盐生盐藻肌动蛋白基因及其5′上游片段的克隆

在盐生盐藻 c DNA文库和基因组文库中对肌动蛋白基因进行了筛选 ,结果得到了一个c DNA克隆和两个基因克隆 ,并进一步从基因克隆中克隆出该基因的 5′上游片段 .检索结果表明 ,所得到的 c DNA和基因属于盐生盐藻的肌动蛋白基因 .通过将盐生盐藻肌动蛋白基因序列同其c DNA序列及其他生物的肌动蛋白序列相比较 ,给出了一个此基因 5′上游区大概的结构     

莱茵衣藻叶绿体PsbA启动子的克隆及其活性验证

为验证莱茵衣藻叶绿体基因PsbA启动子活性,提取了莱茵衣藻总DNA。设计基因PsbA启动子引物,以总DNA为模板,利用PCR法扩增,然后与质粒P64D连接。将重组质粒转入大肠杆菌Dh5α。用氨苄青霉素和壮观霉素筛选,进行活性验证。结果成功地从莱茵衣藻基因组中克隆出PsbA启动子片段(1 161 bp),获得了氨苄青霉素和壮观霉素抗性菌落,表明该序列具有启动子活性。     

原核生物pPLacZ报道分子系统的构建及鉴定

构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ。用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列（3258bp）和结构基因序列（3089bp）克隆人经改建的含有pUCl9的多克隆位点的pBR322载体中．经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ—Control和pPLacZ—Basic。用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增热休克基因htpX的启动子序列并克隆JkpPLacZ—Basicq中。经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ—htpX转入细菌中，检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平。成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基NhtpX的报道质粒pPLacZ—htpX。应用此系统通过检测IJacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化。原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便，可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测。     

山羊Agouti基因启动子活性区域探究

对前期拼接获得的12 847 bp山羊Agouti基因序列(EF587236和JN651404)进行启动子活性区域预测,确定候选启动子区为6 450~7 100 bp,得到一个长度为2 537 bp的DNA片段,在该区域发现一个典型转录因子结合位点TATA框,并预测到HSF,SYR,GATA-1,Nkx-2,ADR1等多个转录因子结合位点;山羊基因组序列(登录号:AJPT01136617.1)中有两段序列与牛的预测启动子promoter A和promoter B同源性较高,据此设计引物扩增目的片段,同时构建12个荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染人皮肤黑素瘤细胞A375和293T细胞检测目的片段是否具有Agouti基因启动子活性。结果表明,所构建的目的片段质粒与阴性对照相比无显著差异,说明所获得的目的片段不具有启动子活性。     

运用绿色荧光蛋白探讨肉葡萄球菌双精氨酸分泌途径

根据肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)TM300的基因组序列设计引物,经PCR扩增得到其tufA基因的启动子Peftu片段与大肠杆菌–葡萄球菌穿梭载体pBT2-Tat-GFP连接,构建了穿梭质粒pBT2-ETG.结果表明,穿梭质粒pBT2-ETG成功地转入大肠杆菌与肉葡萄球菌宿主中稳定表达具有活性的绿色荧光蛋白GFP,并被转运到肉葡萄球菌宿主的细胞壁,为进一步研究肉葡萄球菌双精氨酸(Tat)转运系统正确分泌其他外源蛋白奠定了实验基础.     

盐生盐藻肌动蛋白基因及其5‘上游片段的克隆

在盐生盐藻cDNA文库和基因组文库中对肌动蛋白基因进行了筛选,结果得到了一个cDNA克隆和两个基因克隆,并进一步从基因克隆中克隆出该基因的5'上游片段,检索结果表明,所得到的cDNA和基因属于盐生盐藻的肌动蛋白基因。通过将盐生盐藻肌动蛋白基因序列同其cDNA序列及其他生物的肌动蛋白序列相比较,给出了一个此基因5'上游区大概的结构。     

前列腺特异性膜抗原RNA探针的制备

从前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA，经RT－PCR扩增前列腺特异性膜抗原（PSM）靶序列，将其定向插入带T7RNA聚合酶启动子的pSPORT1质粒，转入大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选获得重组质粒，以此重组质粒线性化DNA为模板，以地高辛标记的rUTP及其他三种rNTP为底物，经T7RNA聚合酶体外转录，成功地制备了地高辛标记的PSM特异性RNA探针，为研究以PSM为分子生物学指标的前列腺癌分期诊断奠定了基础。     

盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆

将盐生盐杆菌总DNA的BamHI不完全酶切片段与质粒pUC19连接成重组质粒,并以重组质粒转化E.coli JM101.经X-Gal-IPTG法筛选白色重组子,结合高盐平板检测,已经获得了3株比原受体菌的耐盐性提高30％－67％的转化子。重组质粒酶切电泳分析表明,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的DNA片段长度在1．0－3．5kb之间。     

盐藻（Dunaliella viridis）细菌人工染色体文库的构建和鉴定

盐藻具有极强的耐盐能力，是研究植物耐盐机制的模式系统.为了对其耐盐机制进行深入的 研究，以pCC1BAC为载体，构建了盐藻的细菌人工染色体（BAC）文库.该文库共有9 216 个转化子，插入片段平均长度为55 kb，以单克隆形式保藏在96块96孔板中，并建立了四维P CR基因筛选体系，可以通过4轮PCR快速筛选获得阳性单克隆.根据本实验室分离到的两个盐 藻基因的cDNA序列（ DvSPT2和DvTPSP ）设计引物，通过PCR从该文库中各筛到4个阳性BA C克 隆，说明该文库能有效用于分离盐藻基因的基因组序列，据此推测该文库约覆盖4倍盐藻基 因组序列.     

人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。     

欧盟到处搞专利盒子、创新盒子、知识发展盒子是怎么回事？——从3 种“盒子”看欧盟治理的“理性化”进程

专利盒子、创新盒子、知识发展盒子在欧盟启用后,在欧洲产生扁平化的避税机制,即各国都对专利导向的产品、方法、服务、企业提供较低的所得税优惠。这些看似是高效、优质的避税机制背后,其实是欧盟治理高度"理性化"的体现。     

从洗衣机改型设计看产品造型设计新特征

洗衣机面板改型设计的实践表明,产品造型设计已经进入了一个多元化发展的时代,其设计思想、设计方法和设计风格都表现出前所未有的繁荣,已不存在占统治地位的设计主张。并以此实例进一步探讨了21世纪产品造型设计新特征,并从4个方面分析了设计发展的趋势。     

传动箱体计算机图形生成

文章介绍了传动箱体的计算机图形生成系统的设计思想以及设计过程中一些问题的解决方法。     

谈手风琴演奏中风箱的运用和控制

对短风箱和震风箱的具体运用进行了阐述,对控制风箱的七种方法综合运用进行了例证分析.     

箱形梁最轻设计法

设计箱形截面梁时可采用四个参变量:梁高h、腹板厚度t及两个系数α和β,根据强度条件、局部稳定条件及刚度条件得出一个求截面积最小的目标函数A,将已知条件(截荷、材料、跨度、支承情况等)代入进行求导即可最终求出四个参变量,截面尺寸即可确定,且其截面积必为最小.然后将截面尺寸园整,布置加劲肋,最后进行截面各方面的总校核,必要时对截面尺寸作些修正,设计即告完成.这种设计法从理论上保证了截面尺寸为最小;即使经过修正,尺寸也必然接近最小.而且设计是一次完成,避免了通常凑截面反复计算的繁琐性和盲目性.     

后结合预应力组合梁负弯矩区混凝土开裂性能试验

为了研究后结合预应力技术改善混凝土桥面板组合梁在负弯矩作用下的受力性能,特别是混凝土的开裂性能,设计制作了2根组合梁(一根是常规混凝土桥面板组合梁,另一根是后结合预应力混凝土桥面板组合梁),进行了2根组合梁的静力试验.测试了在不同荷载作用下组合梁的变形、不同截面上构件的应变分布、混凝土的裂缝、钢与混凝土之间的相对滑移以及极限承载力等.试验结果表明:后结合预应力混凝土板连续组合梁的初始开裂荷载和正常使用状态的极限荷载分别是普通连续组合梁的3.87倍和5.38倍,说明采用后结合预应力混凝土桥面板能够大大提高组合梁负弯矩区混凝土的抗裂性能.     

单箱三室混凝土箱梁温度分布研究

以西安西咸新区沣河大桥单箱三室预应力混凝土箱梁桥为研究对象,进行断面温度分布测试,研究箱梁的温度分布规律,讨论了箱梁的温度分布模式和温度基数,提出了指数函数和线性函数相结合的温度梯度模式。结果表明:受环境温度影响,外表面的混凝土温度每天随环境温度急剧变化,内表面除上翼板内侧外其余位置温度比较恒定;从竖向温度分布看,一维热传播理论适用于上翼板和下翼板,但不适用于腹板,且下翼板内外表面温差显著;最大正温度梯度主要出现在夏季,而最大负温度梯度主要出现在冬季。     

Web代码安全人工审计内容的研究

Web系统的大量应用,各种安全事故频发,除了操作系统的安全漏洞以外,web系统的代码在编制的时候,不良的编码习惯、对操作过程中在代码中显露出安全重视不够等因素,导致系统在生产线中存在或大或小的隐患。web系统上线之前,系统一般会进行白盒、黑盒测试,但是并不能保障足够的安全,还应对代码和运行环境等进行详细的人工审计,可以大大减少安全事故。     

软件测试方法及用例的选择

软件测试是软件质量控制和质量管理的关键环节,是软件开发企业生存与发展的核心.本文阐述了两种软件测试方法及用例的使用.