大阪鲫鱼两种卵黄蛋白紫外吸收特性的研究

采用大柱制备电泳的办法从大阪鲫鱼卵巢中提纯出两种蛋白质:卵黄脂磷蛋白和类似于卵黄高磷蛋白的卵黄蛋白L。分析了两种蛋白的氨基酸组成,并对两种蛋白的紫外吸收和紫外吸收四阶导数谱特性进行了分析研究。发现卵黄脂磷蛋白在溶液的pH改变(pH3.12-8.12-11.00)时。紫外吸收谱和四阶导数谱未发生明显变化,而卵黄蛋白L在溶液的pH改变(pH7,66-9,35-11,89)时,其紫外吸收谱最大吸收波长红移,紫外吸收四阶导数谱出现新的未知峰,发生显著变化。这表明卵黄脂磷蛋白所含的大量脂类存在于蛋白质分子的表面,从而影响了蛋白质分子中产生紫外吸收的氨基酸—酪氮酸、色氨酸、苯丙氨酸的紫外吸收。在卵黄蛋白L中,这几种氨基酸则位于蛋白质分子的表面,从而对溶液pH的变化尤为敏感。     

罗氏沼虾个体发育之初——受精卵特性的研究

采用石蜡切片和生化方法研究了罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)受精卵的特性。结果表明：受精卵中央区是一团致密的卵黄物质,卵表面初级卵膜内是一层细胞质。表层细胞质与中央区之间是连接紧密的卵黄颗粒。中央区与外周卵黄颗粒紧密相连,同时也透过卵黄颗粒间的细胞质与表层细胞质相连。卵黄物质的组成以蛋白质(18．67±0．22(μg/卵))和脂类(13．52±0．27(μg/卵))为主,分别占受精卵干重的45．86%和33．21%。在受精卵期较高的淀粉酶活力说明糖类在此期为主要的能源,迅速为受精卵的发育提供能量,蛋白酶类酶活力也较高,分解卵黄蛋白以供能,脂类在受精卵期不是主要的能源。罗氏沼虾受精卵期蛋白SDS-PAGE显示了包含卵黄磷蛋白两个亚基在内的75．6～105KD区域内的蛋白亚基含量丰富,是受精卵期蛋白质的主要成分,也是胚胎发育时期的蛋白营养源,此外,其他分子量的蛋白亚基种类也较多。     

大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白多价卵黄抗体的制备

对已构建的重组菌株BL21(DE3)(pETXKSL3)进行鉴定,酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST_1-LT_B融合基因且阅读框架正确.Western blot分析表明K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白能够被ST_1单抗、K88ac和LT_B抗体识别.以K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白为抗原免疫蛋鸡制备卵黄抗体,ELISA法测定卵黄抗体效价可达1∶13 200.仔猪攻毒实验表明制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为96%,上述研究结果说明K88ac-ST_1-LT_B多价卵黄抗体对由ETEC引起的新生仔猪腹泻具有很好的预防效果,从而为最终开发出一种新型高效、可替代抗生素的防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻的特异性卵黄抗体生物防治制剂打下坚实基础.     

HEp-2细胞MPM-2磷蛋白的蛋白质组学分析

MPM-2磷蛋白家族成员在有丝分裂进程中起着重要作用．为了从MPM-2磷蛋白家族层面入手研究细胞周期调控中磷蛋白的重要作用，以人上皮样喉癌细胞株HEp-2为细胞模型，运用双向电泳、免疫印迹以及质谱技术等蛋白质组学的方法对其细胞抽提物中的部分MPM-2磷蛋白进行了分析鉴定，初步确定了乙二醛酶(GlyoxalaseⅠ)、真核翻译起始因子(eIF4B)以及核质蛋白NPM等MPM-2特异识别的细胞磷蛋白，这将有助于进一步研究MPM2磷蛋白家族成员在细胞周期调控中的重要作用．     

人A组轮状病毒结构蛋白VP7原核表达及其卵黄抗体效价的研究

为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7。将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21(DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达。通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋。用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY。进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性。结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1:100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒。     

钙调神经磷酸酶

钙调神经磷酸酶是一种依赖Ca^2 －CaM的磷蛋白磷酸酶。主要存在于脑组织神经元中，由催化亚基A和调节亚基B1：1组成。钙调神经磷酸酶是一个侈底物的磷蛋白磷酸酶。它的活性还受到Ni^2 和Mn^2 等金属离子的调节。     

中华蟾蜍卵巢性类固醇激素受体的免疫细胞化学研究

为探讨两栖动物卵巢内不同性类固醇激素受体在卵子发育中的调控作用.采用免疫细胞化学方法,对中华蟾蜍不同发育时期卵泡中的雌激素受体、孕激素受体和雄激素受体进行了定位检测.结果发现,三种受体在不同发育时期的卵泡中均有阳性反应:雌激素受体在卵黄合成期和卵黄合成后期的滤泡细胞表达为强阳性,在卵母细胞胞质和核膜中呈弱阳性反应;孕激素受体在卵黄合成早期的滤泡细胞和卵母细胞质、核膜中表达均较弱,在卵黄合成后期表达均增强;雄激素受体在卵黄合成早期的滤泡细胞和卵母细胞胞质、核膜中表达也均较弱,在卵黄合成后期卵母细胞胞质和核膜中表达略有增强.     

中华绒螯蟹卵子发生中卵母细胞表面和滤泡细胞的超微结构

利用透射电镜技术观察了中华绒螯蟹卵子发生过程中卵母细胞表面和滤泡细胞超微结构的变化.结果显示:从卵原细胞期到卵黄大量合成时期,滤泡细胞逐渐向卵母细胞迁移,细胞膜向外伸出许多突起,胞质中的细胞器逐渐增多,它们与卵黄蛋白物质一同移入卵周隙.到卵黄合成晚期,滤泡细胞逐渐解体.与此同时卵母细胞表面在卵黄发生初期可见微胞饮小泡;卵黄大量发生期出现大量微绒毛;卵黄合成晚期,卵黄膜形成,卵黄膜上出现多条通道,这些结构为卵母细胞吸收来自滤泡细胞的卵黄蛋白物质提供了保障.     

中华锯齿米虾卵母细胞卵黄发生的超微结构

利用透射电镜对中华锯齿米虾卵母细胞的卵黄发生过程进行超微结构的研究.结果表明:中华锯齿米虾卵黄发生过程是双源性的.在卵黄发生过程中,卵母细胞中的线粒体、内质网、溶酶体和核糖体等多种细胞器均参与了其内源性合成,其中线粒体最早参与形成卵黄颗粒.在卵黄发生的中后期,内质网成为内源性合成卵黄蛋白最主要的细胞器,并最终演化成颗粒较大且有膜包被的卵黄球;溶酶体也在此时期发挥其特有的吞噬功能,通过融合分解线粒体、内质网等胞质细胞器,最终形成一种十分致密的卵黄球.外源性卵黄则主要通过卵质膜形成的微绒毛和微吞饮小泡从卵周隙及滤泡细胞中摄取外源物质而形成.     

乌鳢卵巢发育的组织学研究

对乌鳢卵巢的成熟时间，卵巢黄发生过程中液泡、油球、卵黄的形成时间及位置等问题进行了研究。结果表明：乌鳢卵黄发生过程中具有３种内含物：液泡、油球和卵黄粒。液泡最先从质膜边缘细胞质产生；在初积脂肪时相，油球从核周围开始形成；卵母胞发育到初积卵黄时相时，卵黄粒开始出现在核周围的油球之间。乌鳢产卵期为５－７月份，最小性成熟鱼全长约为３５ｃｍ，体重约为４００ｇ．     

成熟中国对虾(Penaeus chinensis)卵巢中卵黄蛋白的纯化

用层析(SephadexG-150, DEAE-Cellulose-52)和电泳洗脱2种方法分别从成熟中国对虾卵巢中纯化得到了一种卵黄蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测表明,卵黄蛋白出现在SephadexG-150的第1个洗脱峰和DEAE-Cellulose-52的0.4 mol/L和0.5 mol/L NaCl洗脱峰处.比较了这2种方法的优缺点:层析法可用于蛋白的大量制备,电泳洗脱能够得到高纯度的蛋白.并对与其结合的类胡萝卜素的稳定性进行了讨论.     

克氏原螯虾(Procambius clarkii)卵黄蛋白的部分生化性质

通过电泳回收的方法对克氏原螯虾(Procambius clarkii)的卵黄蛋白进行了纯化,鉴定结果显示总分子质量为481 ku,具有6个亚基(198,176,132,111,92,82 ku);染色分析表明该蛋白是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,亚基之间有1个二硫键交联.     

中华锯齿米虾卵黄蛋白的纯化鉴定

为了研究中华锯齿米虾卵黄蛋白的性质,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用不同的染色方法对其进行分析鉴定,并采用电泳洗脱法从中华锯齿米虾成熟卵巢中将其分离纯化.研究结果表明,中华锯齿米虾成熟卵巢中的卵黄蛋白为糖脂复合蛋白,该蛋白分子质量为434 ku.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析该卵黄蛋白由3个主要亚基组成,分子质量分...     

环核苷酸磷酸二酯酶PDE9A的体外表达、纯化与酶活特性分析

环核苷酸磷酸二酯酶PDE9A作为研究具有调节血糖等功效的天然活性物质的新型靶点,日益受到关注。通过异丙基硫代半乳糖苷诱导大肠杆菌BL21感受态细胞表达获得PDE9A,并通过Ni-NAT琼脂糖树脂亲和柱、Q-Sepharose离子交换纯化系统和Sephacryl S300分子筛纯化系统进行逐级纯化,最终获得高纯度的PDE9A蛋白,并应用高效液相色谱进行酶活特性检测,证明制备得到的蛋白质具有较高的水解cGMP能力,能够为新型降血糖功能性食品的开发提供依据。     

Studies on the developmental biology of sweet potato seed

ｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓＬａｍ．ｂｅｌｏｎｇｅｓｔｏｔｈｅｇｅｎｕｓＩｐｏｍｏｅａｏｆＣｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．Ｉｔｓｆｌｏｗｅｒａｐｐａｒａｔｕｓｉｓｍｏｎｏｅｃｉｓｍ．Ｔｈｅｏｖａｒｙｃｏｎｓｉｓｔｅｓｏｆｔｗｏｌｏｃｕｌｅｓａｎｄｆｏｕｒｏｖｕｌｅｓ．Ｅａｃｈｃａｐｓｕｌｅｃｏｎｔａｉｎｓ１ｔｏ４ｓｅｅｄｓ．Ｉｔｗａｓｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｖａｒｙｉｎｓｏｍｅｃｒｏｓｓｉｎｇｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｈａｄ３ｌｏｃｕｌｅｓａｎｄ６ｏｖｕｌｅｓ．Ｅａｃｈｃａｐｓｕｌｅｃｏｎｔ…     

锯缘青蟹卵母细胞的卵黄发生

锯缘青蟹（Ｓｃｙｌｌａｓｅｒｒａｔａ）卵母细胞的卵黄粒形成是通过多种胞器的共同作用完成的。粗面内质网和线粒体是参与卵黄粒和脂滴形成的主要胞器，其演化方式复杂多样：高尔基液泡和胞溶酶体不同程度参与卵黄粒的形成；卵黄粒还可直接在胞质中聚集形成，此外．微吞饮颗粒可参与卵黄合成表明部分卵黄物质也来源于卵母细胞之外．中文讨论了上述结构在卵黄发生中的变化特点和作用。还描述了卵黄粒内一种类似“微管”的微细结构。     

家蝇幼虫抗菌物质的诱导及抗菌活性研究

针刺家蝇三龄幼虫诱导其体内产生抗菌物质,利用乙酸铵和硫酸铵盐析方法提取纯化家蝇三龄幼虫体内产生的抗菌物质,并进行抗菌实验,通过测量其抑菌圈的大小来确定其抑菌能力的强弱。实验结果显示:家蝇三龄幼虫经针刺诱导后能产生抗菌物质;经初步鉴定该抗菌物质为蛋白质或多肽,且具有热稳定性。     

中国明对虾卵黄蛋白原基因启动子克隆与分析

为了探明中国明对虾卵黄蛋白原基因启动子表达调控机制,利用DNA步移法克隆了中国明对虾卵黄蛋白原基因启动子及其上游调控序列,总长1 100bp.分析表明,在基因转录起始位点上游-30～-24bp处有1个TATA box,未发现有CAAT box和GC box.同时,在上游调控区还存在有多个可能影响启动子转录活性的顺式作用元件,如NF-κB,YY1和SP1等转录因子结合位点.这些结果为深入研究中国明对虾卵黄蛋白积累及卵子发生过程奠定了基础.     

信息检索在专利技术开发中的作用

通过对一项公开专利技术CN1440744A(纳米包覆退黑激素复合保健品)的开发提供信息检索跟踪服务的实例，论证了信息检索在专利技术开发中的地位和作用。     

锯缘青蟹卵子发生的超微结构研究

锯缘青蟹的卵子发生可划分为卵原细胞，卵黄发生前期和卵黄发生期卵母细胞三个时期，卵原细胞核大而圆，卵质稀少，胞器以滑面内质网为主。卵黄发生前的卵母细胞核显著膨大，部分核内可见到同源染色体的联会现象：卵质细密，出现核仁外排物和大量的核糖体，粗面内质网，线粒体和自噬泡，卵黄发生的卵母细胞核膜上核孔密集；卵质中各种胞器高度发达，参与形成卵黄粒和脂滴；细胞出现微吞饮活动并形成卵黄膜，细胞外围单层滤泡细胞，本