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相似文献
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1.
感受态是细菌最易吸收外源DNA的状态,感受态细胞是基因工程中外源DNA转化必不可少的材料,通常是用新鲜的CaCl2溶液诱导产生,但制备时对实验条件要求较高,本方法制备感受态细胞操作简便,价格便宜,而且转化效率高.  相似文献   

2.
优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法.结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L MgCl2 + 80 mmol/L CaCl2)处理,-85℃放置12~14 h,42℃热激处理90 s,转化效率最高,可达5.5×105~6×105 cfu/μg DNA(pSilencer2.1-U6-neo),随着质粒放置时间增加,转化效率下降.  相似文献   

3.
通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,优化感受态制备和转化方法.结果表明,加入质粒(pBR322)DNA量为1~10ng,感受态制备过程中菌液冰浴时间在30~60min,以及感受态细胞加入质粒DNA并混匀后的冰置...  相似文献   

4.
目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.  相似文献   

5.
对于E.coli菌株用8种不同浓度的CaC l2制备感受态细胞,然后转化各浓度的感受态细胞。实验结果表明,不同浓度CaC l2溶液处理所得到的感受态细胞,其转化效率有很大的不同。随着CaC l2浓度增高,转化效率也随之提高,在80m mol/L~100m mol/L时达到峰值,进一步提高CaC l2的浓度,转化效率急剧下降。还探讨了-70℃贮存时间对转化效率的影响。  相似文献   

6.
高效电转化率条件的探索   总被引:6,自引:0,他引:6  
对影响DNA电转化效率的主要因素进行探索,结果表明:在相同的电场强度、电阻入电容条件下,电中时间的长短对电转化交谊级较大影响,电脉冲时间太长或太短均使转化效率降低;用对数生长早中期的细菌制备感受态细胞,经液氮速冻后储存于-70℃,能获得高转化效率。  相似文献   

7.
针对实验材料E.coli DH5α,对该菌株在不同生长时期的转化效率进行测定,确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案.结果表明:在细菌的生长繁殖过程中,其转化率有很大变化;得到了E.coli DH5α菌株制备感受态细胞的最佳条件.  相似文献   

8.
通过感受态细胞的生长状态、转化温度及不同的电击杯内径、电压等影响电转化的重要条件,探讨索了大肠杆菌JM109菌株电转化的最优条件.在感受态细胞OD600值为0.5-0.7,转化环境温度为4℃,电容25 μF、并联电阻200 Ω、电压2.5 kV和0.2 cm电击杯电转化效率最高,可达到9.12×108.  相似文献   

9.
从含有目的基因的cDNA克隆中,利用PCR方法钓取目的基因.将目的基因与酶切线性化的载体进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞.采用菌落PCR方法和核酸序列测定进行阳性克隆鉴定.对构建好的pCMV-tag2A/NAP1融合蛋白表达载体进行超纯去内毒素抽提.  相似文献   

10.
用构建好的重组质粒转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB600感受态细胞,进行不同时间预培养后,涂布于抗生素平板培养,研究一种更高效的转化方法。用载体与外源片段的连接产物转化WB600感受态细胞,进行最佳预培养时间培养后,涂布于抗生素平板培养,培养得到的转化子用PCR快速验证和双酶切鉴定,研究一种转化子的快速验证方法。  相似文献   

11.
河北省部分地区肉、蛋食品大肠杆菌污染状况的检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
为了解河北省肉食品大肠杆菌污染状况,从河北省内不同地区集贸市场和超市随机采集了生活用肉、蛋类等105个样品,采用国家标准法和PCR方法对样品进行了大肠杆菌的检测与鉴定。结果表明,从105个样品中检测到大肠杆菌19株,大肠杆菌总阳性率18.1%。其中,生鸡肉、生猪肉、生鸡蛋的大肠杆菌阳性率分别为35.3%,23.8%,16.7%;生羊肉、生牛肉、生鸭蛋、生虾没有检出大肠杆菌。19株大肠杆菌中从生鸡肉样品中检出产志贺样毒素大肠杆菌2株。河北省肉类食品总体上大肠杆菌污染程度较轻,但生鸡肉中大肠杆菌的检出率较高。  相似文献   

12.
介体型MFC内微生物催化剂的在线驯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
以E.coli为微生物催化剂,新亚甲基蓝为电子媒介体,葡萄糖为燃料,铁氰化钾为电子受体,构建介体型微生物燃料电池(MFC)实验装置;采用在线驯化法,即MFC产电和槽内E.coli驯化的联合过程,以提高E.coli电化学活性,该法无须刮移生物膜,操作简便。结果表明,驯化后E.coli产电能力得到显著提高,在E.coli干重为1.24 mg/mL时,MFC峰电流密度达到612.50mA/m^2,较未被驯化E.coliMFC提高了0.54倍;最大功率输出达到166.67 mW/m^2,提高了0.64倍;同时MFC生物膜成熟所需时间减少至240 min,比未被驯化时加快近一倍。  相似文献   

13.
用合成生物学和代谢工程技术,筛选并克隆丁醇合成途径中酶活性较高的atoB,hbd,crt,ter,adhE2等5个关键酶基因,先通过重组PCR构建pUC18-ato B-hbd-crt-ter质粒,再将串联基因atoB-hbd-crt-ter和基因adhE2克隆至质粒pET-21b中,构建含丁醇合成途径的表达载体p ET-21b-ato B-hbd-crt-ter-adh E2,将其转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中制备工程菌株.对样品进行IPTG诱导表达检测与色谱分析的结果表明,已合成出关键酶蛋白并产生一定量的丁醇.  相似文献   

14.
鸡马立克氏病病毒与大肠杆菌混合感染症的病原分离鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
鸡呼吸道病流行病学调查的过程中,在韶关市某养鸡场观察到一群100日龄广西黄肉仔鸡发生了以呼吸道症状为主要临床表现的疾病,死亡率达10%.病理解剖学检查可见病鸡有单一或多器官肿瘤病变(4/8)、典型腹膜炎病变(3/8)和肿瘤与腹膜炎病变并存(2/8).在病鸡肿瘤组织切片中可见典型MD病理组织学变化.采用CEF接种方法,从有肿瘤和腹膜炎病鸡的羽髓液中分离到MDV.在病鸡的心、肝、脾等脏器分离到大肠杆菌O78血清型菌株.研究结果表明:HVT疫苗免疫鸡群MDV强毒株和E.coliO78血清型菌株以混合感染形式存在,病鸡出现以呼吸道症状为主的临床表现,死亡率明显增加.  相似文献   

15.
目的:了解非临床标本中大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBb)的情况及检测最佳底物,以利于ESBLs菌的监控,防止ESBLs菌的传播和区域性流行.方法:用NCCLS推荐的双纸片协同筛选试验和表型确证试验对50例大肠埃希菌进行ESBLs的检测.结果:非临床标本分离的大肠埃希菌产ESBLs阳性率为896,用于ESBLs筛选的最佳底物是CTX,其次为CRO,而CAZ敏感性较差.结论:检测ESBLs,应用双纸片协同法进行初筛,对可疑菌株再用表型确证实验确证.对底物选择应使用两种以上的头孢类抗生素.  相似文献   

16.
用LKB—2277微量热议测定了大肠杆菌在不同温度下受到希佛碱药物作用时的生长代谢热谱,计算了生长代谢的各种参数,拟合了多种关系式,从热动力学原理探讨了大肠杆菌在药物作用下生长代谢抑制规律,发现可用细菌生长代谢总时间和停滞期时间表征大肠杆菌的生长代谢和希佛碱铜配合物的抗菌活性.  相似文献   

17.
目的探讨新的有效抗菌药物及其研究策略和新的抗菌活性筛选试验方法。方法用TAM air微量热仪测定了新合成的二种稀土药物[La(Hsal)2·(tch)]·2H2O和La(Hsal)2·(hq)在37℃时对大肠杆菌作用的产热曲线。结果实验表明药物[La(Hsal):·(tch)]·2H2O在低浓度下对大肠杆菌有刺激作用,高浓度下为抑制作用,说明药物[La(Hsal)2·(tch)]·2H2O对微生物的生长具有双向生物效应。结论药物La(Hsal)2·(hq)的抑制效果优于[La(Hsal)2·(tch)]·2H2O。  相似文献   

18.
由于传统微生物检测存在步骤繁琐、耗费时间、成本较高等缺点,因此研发快速有效检测微生物的新技术新方法显得尤为必要.本文利用whole-cell SELEX技术,进行了大肠杆菌活细胞核酸适配体的筛选,对单链DNA的制备鉴定、每轮筛选核酸文库的检测、核酸适配体的扩增克隆等内容进行了研究,在筛选过程中成功制备了单链DNA,并对整个筛选过程的核酸适配体库进行监测,保证了筛选的顺利进行,并对核酸适配体库进行了扩增和克隆,最终获得靶向大肠杆菌的核酸适配体序列,这将有助于基于核酸适配体的微生物检测新方法的建立.  相似文献   

19.
酵母编码α-半乳糖苷酶的基因MEL1被扩增并克隆到表达载体pRSET中,重组质粒pRSET-Gal转化至相应的受体菌BL21(DE3))PlysS,阳性克隆经液体培养和IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析,在50kD处有一目的分子大小的亮带,裂解细菌后经X-α-Gal的显色底物反应,液体变蓝.试验表明:α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中得到了表达,糖基化对于维持此酶的生物活性不是必须的。  相似文献   

20.
用聚合酶链式反应扩增了大肠杆甜菜碱醛脱氢酶基因,插入pGEM-3Zf(-)的Xbal和KpnI位点后转化大肠杆菌,得到了克隆,并亚克隆在植物双元表达盒式载体pGA643中,通过PCR得到证实。  相似文献   

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