磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2的表达抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞的增殖

利用磷酸钙沉淀法将重组的质粒ｐＣＭＶ５－ｐｅｍｔ２与ｐＳＶ－ｎｅｏ共转染,经Ｇ４１８筛选免疫细胞化学和免疫印迹法检测蛋白表达。获得稳定表达ＰＥＭＴ２的阳性克隆。     

外源脑啡肽基因在哺乳动物体细胞的表达

评价转染脑啡肽基因体细胞用于爱滋病和晚期癌症患者生物镇痛的可行性。方法：采用磷酸钙共沉淀法和脂质体包裹法，分别将ｈｅｎｋ基因或ｈｅｎｋ与ｎｅｏ基因导入三种哺乳动物体细胞，观察转染效率并用放射免疫法测定转染后ｈｅｎｋ基因的瞬时表达及稳定表达水平。结果：双基因共转染加Ｇ４１８筛选组的ｈｅｎｋ基因稳定表达水平（１００～２００ｐｇ／ｍＬ）明显高于单基因转染未经筛选组（６０～１００ｐｇ／ｍＬ）；脂质体包裹法在基因转染率（１３３％～１６１％）及表达水平（１５０～２４０ｐｇ／ｍＬ）方面均优于磷酸钙共沉淀法（２０％～２６％和１００～２００ｐｇ／ｍＬ），两者的稳定表达水平与ＰＣ－１２细胞的分泌水平（１６０ｐｇ／ｍｌ）相当，均能满足细胞镇痛的要求。结论：转脑啡肽基因体细胞的脑啡肽分泌量（１０７个细胞）可以满足镇痛的要求。若用于ＡＩＤＳ患者，可望长时间地缓解全身疼痛，并增强机体免疫功能和改善神经退行性痴呆症状     

人抑癌基因nm23—H1在逆转录病毒载体上表达的研究

应用基因工程的方法，将抑癌基因ｎｍ２３－Ｈ１的ＤＮＡ片段克隆到逆转录病毒表达载体ｐＬＸＳＮ，得到重组质粒ｐＬＸＳＮ－ｎｍｈ１。用磷酸钙沉淀技术将重组质粒转染到辅助包装细胞ψＣＲＩＰ中，通过Ｇ４１８筛选，得到抗性克隆。经ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测证实：ｎｍ２３－Ｈ１基因已整合到克隆细胞的染色体上，并且得到表达。获得的逆转录病毒滴度达１０５ＣＦＵ／ｍＬ。     

抗人肝癌单克隆抗体JHⅢ的制备及其生物学特性

用肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２脾内直接免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，获得一株分泌肝癌单抗的杂交瘤细胞株ＪＨⅢ，其染色体众数为９０－１１０，单抗ＪＨⅢ系ＩｇＧ２ｂ亚类。杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为１：１０＾２～１０＾３和１：１０＾６以上。ＡＢＣ法证实它对肝癌组织有较好的相关性。ＩＦＡ法也证明它对肝癌细胞ＢＥＬ－７４０２有强的阳性反应，而对其他肿瘤细胞株和肿瘤组     

人rabl3基因克隆和表达

以人的胚胎ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法筛选获得ｒａｂ１３基因，并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３和原核表达载体ｐＧＥＸ、ｐＥＴ－１５ｂ和ｐＭＡＬ－ｃ２中，把ｒａｂ１３基因转染入牛肾上腺毛细血管内皮细胞（ＢＣＥ细胞）中，免疫荧光染色显示Ｒａｂ１３定位于ＢＣＥ细胞胞质内膜性细胞器上，在为ｒａｂ１３基因对膜通道调节功能的进一步研究打下了基础。     

HER—2基因打靶对HeLa细胞生长的抑制

构建具有正，负筛选特性的ＨＥＲ－２基因打靶载体，ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐＰＮＴ１３０５．用电穿孔法把线法ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐＰＮＴ１３０５导入ＨｅＬａ经Ｇ４１８正筛选及丙氧鸟苷我筛选，选出了敲除了ＨＥＲ－２单等位基因的打靶命中细胞。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交表明，ＨＥＲ－２＾－１     

大鼠谷胱甘肽S—转移酶P1基因增强因子及其反式作用因子的研究

探讨大鼠谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ１基因上游增强子元件及作用于其上特异性结合蛋白与该基因在癌细胞中高表达的关系，用荧光素酶的报告系统在ＨｅＬａ及ＣＢＲＨ７９１９细胞中增强子元件Ｉ（ＧＰＥ Ｉ）及增强子元件Ⅱ（ＧＰＥⅡ）的活性，并将ＧＰＥⅡ的增强子活性部位定位于其上游８４ｂｐ的ＧＰＥⅡ－１区域内。分析对比不同细胞中结合于ＧＰＥⅠ核心序列（ｃＧＰＥⅠ）、ＧＰＥⅡ－１上特异性核合蛋白，发现ＨｅＬａＣＢＲＨ７９     

携带TIMP-1基因逆转录病毒载体的构建及其实验研究

构建携带组织金属蛋白酶抑制物ＴＩＭＰ－１基因的逆转录病毒载体，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的变化．利用常规分子克隆技术，通过对逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ（Ｆ６）质粒的去磷酸化、粘端连接，构建ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ；经限制性内切酶酶切、电泳鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的ＰＡ１３７包装细胞进行基因转移，Ｇ４１８筛选阳性克隆，收集上清，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系的研究．构建获得ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ，有效滴度为１０４ＣＦＵ／ｍＬ～１０６ＣＦＵ／ｍＬ．本研究构建获得的ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体，在感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的研究中得到有效应用     

erbB—2表达下调抑制人胃癌细胞增殖与EGF反应性的机制探讨

应用ＤＮＡ重组、基因转染、分子杂交、生长测定、裸鼠成瘤、凝胶迁移率改变分析等方法观察了人胃癌细胞中原癌基因ｃｒｂＢ－２的表达被其反义ＲＮＡ特异抑制后胃癌细胞恶性增殖、ＥＧＦ反应性及相关基因表达的变化。ｅｒｂＢ－２表达下调显著抑制了胃癌细胞的恶性增殖能力、ＥＧＦ的细胞增殖促进效应及对增殖相关基因ｃ－ｍｙｃ，ＥＧＦＲ的促进效应。与此同时，细胞周期蛋白激酶抑制物ｐ２１基因的表达显著增强。对其转录激活机制     

高价阴离子在PEG水溶液中的粘度B系数

测定了ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４、Ｋ２ＳＯ４、Ｎａ２ＣＯ３、Ｎａ３ＰＯ４在ＰＥＧ水溶液中的相对粘度,利用Ｊｏｎｅｓ－Ｄｏｌｅ方程求出了粘度Ｂ系数,结果表明Ｂ系数具有良好的加和性,以ＫＣｌ为参考电解质计算了单个离子Ｂ系数,发现ＳＯ＾２－４,ＣＯ＾２－３,ＰＯ＾３－４的Ｂ系数随着ＰＦＧ浓度的增大而减小,温度系数ｄＢ／ｄＴ大于零,表明ＳＯ＾２－４,ＣＯ＾２－３,ＰＯ＾３－４对ＰＥＧ水溶液结构呈破坏作