间质胶原酶活性中心肽段的制备与表征

利用Fmoc固相合成法合成了一种基质金属蛋白酶—间质胶原酶（MMP-1）活性中心的肽片段,通过RP-HPLC对粗肽进行纯化得到了高纯度的多肽,经电喷雾质谱、^1HNMR进行了表征.实验结果表明,Fmoc法合成粗肽的产率为76.0%,纯度为86.5%,经RP-HPLC纯化后纯度达到99.1%.     

液质联用研究人重组干细胞因子一级结构

通过高效液相色谱(HPLC)和质谱技术,对人重组干细胞因子(rhSCF)分子进行分析,以确证其一级结构.将rh-SCF样品胰酶酶切,HPLC-RPC分离,基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱仪(MALDI-TOF-MS)对rhSCF的酶切肽段进行解析,并对rhSCF的O-糖基化和N-糖基化位点进行了分析.结果:(1)rhSCF分子质量得到测定;(2)rhSCF的一级结构得到确认,测定的肽质量谱的覆盖率达到94%,分子中有两对二硫键;(3)鉴定了样品中的N-糖基化位点,并对rhSCF产品的O-及N-连接糖型上的糖结构进行初步探讨.结果显示:rhSCF一级氨基酸序列和二硫键形成位置与理论上一致,糖基化特性符合毕赤酵母表达蛋白的糖基化特点.     

重组人源性抗HBsAg单链抗体的纯化与性质鉴定

对大肠杆菌表达的人源性抗乙型肝炎表面抗原（HBsAg)单链抗体（scFv)进行了纯化研究，并对单链抗体活性及其结构进行了鉴定。大肠杆菌表达的单链抗体包涵体，用8mol/L尿素裂解，经过Ni离子螯合亲和层析和凝胶过滤两步纯化后，纯度（ω）达到97％以上，再通过透析复性除去尿素。经间接ELISA和竞争性ELISA证明，复性后的scFv具有与HBsAg结合的活性，而且对鼠源抗HBsAg单克隆抗体的抑制率可达40.3%，基质辅助激光解析飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization,MALDI-TOF-MS)的结果证明，重组的scFv分子量与理论值相符，肽质量图谱的结果证明重组单链抗体的一级结构与理论序列是完全相符的，并确定了scFv蛋白中二硫键的位置。     

蒜头果中一种新的植物蛋白(malanin)的分离纯化

 蒜头果(Malania oleifera Chunet S.Lee)属于铁青树科(Olacaceae)蒜头果属.蒜头果蛋白(malanin)是通过粉碎、抽提、硫酸铵沉淀、疏水色谱层析等分离手段,从蒜头果种仁中分离、纯化出的一种新的植物蛋白.Malanin是一种糖蛋白,分子质量为61875u,等电点为5.5,由A,B2条肽链通过二硫键连接而成.该蛋白的A链和B链N-端序列分别为DYPKLTFTTS和DETXTDEEFN(X一般情况下为C),用NCBI-BLASTP程序对nr数据库和其它蛋白质数据库进行检索,未发现有相同的序列存在.经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及分析各自的肽质量指纹图谱(PMF),结果没有匹配数据库中的任何记录,说明malanin为新蛋白质.     

两种用于液质联用分析的蛋白质酶解处理效果比较

【目的】分析和评估两种蛋白质溶液酶解方法,为蛋白质组学研究中的大规模质谱鉴定分析建立一种稳定的样品制备技术。【方法】分别使用TEAB法(实验组A)和TFE法(实验组B)对牛血清白蛋白(BSA)进行还原、烷基化和溶液酶解,再用LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪采集BSA酶切肽段信息,比较两种方法得到的数据信息,分析肽段数目、可变修饰位点和蛋白质覆盖率。【结果】实验组A(TEAB法)获得36个肽段、39个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为59.31%;实验组B(TFE法)获得27个肽段、27个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为47.83%,实验组A的数据指标与实验组B差异显著。【结论】采用TEAB法酶切体系能实现蛋白质高效率酶切,达到获得较高肽段覆盖率的目的,可为蛋白质组学后期的质谱分析鉴定奠定实验基础。     

海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定

为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥PCR引物,通过overlap PCR的方法扩增出蝎毒肽Im58DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经IPTG诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.     

灵芝药材质量的HPLC指纹图谱评价方法

以灵芝药材为研究对象,应用RP-HPLC法,色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 Micon),乙腈-乙酸的水溶液二元梯度洗脱模式,流速为0.8 mL/min,检测波长为242 nm,建立了10批不同产地灵芝样品的HPLC指纹图谱.同时对各产地药材指纹图谱进行分析,应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对各产地药材进行了质量评价.该方法简便、可靠,可用于灵芝的质量评价.     

穿膜肽修饰胸腺五肽类似物的合成和生物活性研究

采用Fmoc固相合成法,利用穿膜肽Tat对胸腺五肽(TP-5)进行修饰,合成了新的胸腺五肽类似物,总收率为32.2%.通过RP-HPLC和质谱对该化合物进行了鉴定,采用E-玫瑰花结实验进行生物活性分析,结果表明:经穿膜肽修饰的类似物在其摩尔浓度稀释20倍后仍然比标准品TP-5具有更强的生物活性.     

不同市售野菊花药材的RP-HPLC指纹图谱

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以甲醇和醋酸(体积分数4%)为流动相梯度洗脱,建立了野菊花药材的指纹图谱,并标定出25个共有峰,指认出9个特征峰.测定了12批不同市售野菊花药材的相似度.所建立的野菊花药材RP-HPLC色谱指纹图谱重复性好,专属性强,可用于野菊花药材的质量评价.     

聚芳醚酮环状低聚物和芳香族大环预聚体的激光解吸电离质谱分析

采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术,分别对两种合成的聚芳醚酮环状低聚物和两种芳香族大环预聚体进行了分析研究,并讨论了上述聚合物中不同聚合度离子组份的分布规律,对它们的结构进行了确认。实验结果表明,MALDI-TOF-MS是分析上述聚合物直观、准确、快速的分析工具。     

Analysis of proteinaceous binding media used in Tang Dynasty polychrome pottery by MALDI-TOF-MS

The proteinaceous binding media used in Tang Dynasty polychrome pottery was determined using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). The optimum conditions for the extraction and subsequent enzymatic hydrolysis of the protein sample were established, and applied to the pretreatment of model and historical samples. Complexation of EDTA in combination with dialysis was determined to be the most effective method for eliminating interferences in polychrome layers taken from historical samples. Model samples were aged by burial in loess so as to more closely replicate the ageing process of the historical samples. Using the aforementioned optimized conditions, the "peptide mass fingerprint" of the binding media of historical and model samples was determined by MALDI-TOF-MS. Comparisons between the "peptide mass fingerprint" obtained for the historical sample and those of the model samples proved that animal glue was used as the binding media for the Tang Dynasty polychrome pottery. It also shows that animal glue used as binding media enjoys a long history in China.     

高效液相色谱法测定重组人纽兰格林的纯度

使用分子筛和反相高效液相色谱法测定重组人纽兰格林，得到重组人纽兰格林的分子筛和反相C8柱的纯度分别是：100％和98．93％．说明本方法灵敏、准确、简单，适用于重组人纽兰格林的纯度测定．     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。     

Identification of proteinaceous binding media for the polychrome terracotta army of Emperor Qin Shihuang by MALDI-TOF-MS

A proteinaceous binding media for the polychrome terracotta army of Emperor Qin Shihuang has been identified using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry(MALDI-TOF-MS).Methods for the preparation of the model samples and the elimination of interferences have been evaluated,as well as ageing processes.A method involving the complexation of EDTA in combination with dialysis was used to eliminate any interference in the polychrome layers taken from the historical samples.The model samples were aged by being buried in loess to replicate the ageing process of the historical samples as closely as possible.The optimum conditions for the extraction and subsequent enzymatic hydrolysis of the extracted protein were investigated.Under the optimized conditions,the‘‘peptide mass fingerprints’’of the proteinaceous binding media from the historical and model samples were determined by MALDITOF-MS.The results revealed that animal glue was used as the binding media for the polychrome layers of Emperor Qin Shihuang’s terracotta army.It also shows that animal glue used as binding media has a long history in China.     

棒柄花苷A对照品的制备研究

【目的】建立从棒柄花(Cleidion brevipetiolatumPaxet Hoffm)中制备棒柄花苷A(PPGA)对照品的方法。【方法】利用硅胶柱层析、重结晶和反相制备高效液相色谱对棒柄花的乙醇提取物进行分离纯化,以HPLC对棒柄花苷A进行纯度检查和含量测定,并通过UV,IR,MS,1 HNMR等对其进行结构确证。【结果】从棒柄花叶中分离、纯化出棒柄花苷A对照品,质量分数W98.0%。【结论】所建立的制备方法简单,制备出的棒柄花苷A对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为棒柄花药材和含棒柄花成药质量控制,以及中药药效物质基础用的化学对照品。     

钛白废盐制备高纯MnO_2纳米棒

以钛白生产中产生的废盐为原料,采用水热法合成制备了高纯MnO2纳米棒,研究了不同反应条件对产品纯度和产率的影响.以纯度和产率为指针,确定了制备高纯MnO2纳米棒的最佳工艺条件,并对样品进行了XRD、FT-IR、SEM、ICP表征.研究结果表明,MnO2纳米棒的纯度随水热反应pH增大而增大,当pH为2.0时,制得的MnO2纳米棒纯度最大,继续增大pH,样品纯度下降,MnO2纳米棒的产率随水热反应pH增大而增大,当pH为4.0时,产率最大,继续增大pH,产率下降;当NaCl的加入量为0.08 g时,纯度和产率同时达到最大;MnO2纳米棒纯度几乎不随NaClO3加入量的变化而变化,而产率随着NaClO3加入量的增加而增加.     

电容铝箔微观结构的TEM和X射线衍射研究

本文采用不同形变热处理高纯铝箔,经电解抛光和减薄后,用高压透射电镜观测了蚀坑形貌与其它微观结构,同时根据 X 射线晶面衍射强度分析,建立了铝箔易见蚀坑形貌与高 F_(hkl)值的实质联系,为制取高比电容铝箔,提供了理论依据.