海嘧啶抗肿瘤作用机制的研究

研究了海嘧啶抗肿瘤作用的机制,观察了海嘧啶对荷瘤小鼠红细胞免疫粘附肿瘤细胞的功能以及对红细胞膜及肿瘤细胞膜上唾液酸的含量的影响.结果表明海嘧啶可以提高荷瘤小鼠抗肿瘤免疫功能,提高红细胞膜上唾液酸的含量,而使肿瘤细胞上的唾液酸含量降低.这可能其抗肿瘤作用的机制之一.     

海嘧啶抗癌作用的实验研究

研究了海嘧啶对小鼠艾氏腹水癌（ＥＡＣ）、小鼠肉瘤（Ｓ１８０）、小鼠网织细胞白血病（Ｌ６１５）的抑制作用。结果表明，海嘧啶可显著延长荷瘤小鼠的生存时间，抑制肿瘤细胞的增殖，抗癌作用优于组方中的化疗药物，同时又可使组方中化疗药物的毒性作用显著降低     

哈尔滨商业大学2001年鉴定项目

１．草问荆总碱对中枢神经系统的抑制作用及作用机理研究（黑龙江省科技厅攻关项目）课题负责人：季宇彬教授２．复方铃兰毒甙的药理研究（黑龙江省科技厅攻关项目）课题负责人：季宇彬教授３．海嘧啶对荷瘤小鼠细胞膜功能及功能凋亡影响的研究（国家优秀博士后基金项目）课题负责人：季宇彬教授４．海嘧啶对荷瘤小鼠细胞膜功能及肿瘤细胞内DNA含量影响的研究（国家博士后科学基金项目）课题负责人：季宇彬教授５．海嘧啶对肿瘤细胞膜功能及细胞内犤Ca２＋犦I含量影响的研究（黑龙江省杰出青年基金项目）课题负责人：季宇彬教授６．海嘧啶…     

溴代香豆素对胃癌细胞的细胞毒活性与致死机制研究

为探究合成化合物溴代香豆素的生物活性,将该化合物作用于胃癌细胞进行了体外研究.本研究分别采用磺酰罗丹明染色法和生长曲线法研究了药物的细胞毒活性和癌细胞的致死过程.以彗星电泳技术和瑞士—吉姆萨染色法观察了化合物对细胞核形态变化和核酸损伤效应,最后以琼脂糖凝胶电泳法检测了药物对细胞总DNA的影响.结果显示,溴代香豆素对胃癌细胞具有显著的细胞毒活性,其IC50为21.56μg/m L.药物对细胞的增殖抑制效应和致死效应都具有显著的时间—剂量依赖性.药物作用癌细胞后可引起细胞核形态变化和染色质凝集断裂,并损伤细胞DNA,在电泳中呈梯度降解状态.结果表明,溴代香豆素对胃癌细胞的生长与增殖具有显著的细胞毒活性,并能诱导胃癌细胞发生凋亡.     

电化学法检测细胞中的胸腺嘧啶和胞嘧啶

用基于氧化石墨烯量子点/多壁碳纳米管/丝网印刷电极（GOQDs/MWCNTs/SPCE*）的电化学检测方法同时检测小鼠胚胎成纤维（BALB/c 3T3）细胞中的胸腺嘧啶和胞嘧啶， 并考察富集电位、 富集时间、 pH值对胸腺嘧啶和胞嘧啶标准品电化学行为的影响. 实验结果表明： 最佳检测条件为富集电位0， 富集时间150 s，  pH=7.4; 电极对胸腺嘧啶和胞嘧啶的最低检测限分别为0.69，0.95 μmol/L；  该方法可同时灵敏检测BALB/c 3T3细胞中的胸腺嘧啶和胞嘧啶.     

细胞太空无源搭载装置中的微载体技术初步研究

探讨基于微载体技术的改良细胞单克隆化方法,及直接研究微载体上细胞形态、细胞增殖、核酸提取的方法。利用快速染色法直接观察微载体上的细胞形态,并用MTT法直接分析细胞增殖,用Trizol试剂和吸附柱直接从微载体提取细胞核酸。对微载体上的细胞可直接进行染色,观察正常细胞和凋亡细胞的形态。MTT分析显示细胞数和OD值呈直线关系。从微载体上直接提取的RNA完整性好,可用于RT-PCR分析,提取的DNA含量较高。改良细胞单克隆化方法操作简便,细胞活性好;不消化细胞,可以直接研究微载体上的细胞形态、细胞增殖,提取核酸。     

顺铂与丝裂霉素对体外人胃癌细胞的影响

进行了顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)合用对人胃癌细胞影响的实验研究.用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞SGC7901,在DDP与MMC合并用药前后对细胞存活率的影响,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构变化.DDP与MMC合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,其增效倍数为单独用药的2.52～4.36倍(P＜0.01),细胞生长停止在S期,S期数分数为0.49,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,细胞超微结构显示细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.结果显示,顺铂与小剂量化疗药物合用,可获得化疗药物单独用药相同疗效,丝裂霉素增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用,增加敏感性,减少药物副作用.     

水鬼蕉总生物碱对人肝癌细胞HepG-2凋亡作用

研究水鬼蕉生物碱(AHL)对人肝癌细胞HepG-2的凋亡作用.采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)检测水鬼蕉生物碱对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用,荧光显微镜观察水鬼蕉生物碱对人肝癌HepG-2细胞形态学的影响,流式细胞仪检测水鬼蕉生物碱诱导人肝癌HepG-2细胞的凋亡率.MTT结果显示水鬼蕉生物碱对HepG-2细胞具有一定的细胞毒作用,且随着质量浓度的增大而增强;Hoechst33258染色以后,荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈现均匀的蓝色荧光,而凋亡细胞的细胞核则现出致密强荧光及凋亡小体;利用碘化丙啶(PI)单染通过流式细胞仪检测分析表明不同质量浓度的水鬼蕉生物碱作用HepG-2细胞72 h后,有明显凋亡峰出现.通过体外实验表明水鬼蕉生物碱可以诱导人肝癌细胞HepG-2的凋亡,为新药研发提供科学依据.     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

顺铂与白藜芦醇对体外人胃癌细胞的影响

目的:观察顺铂(DDP)、白藜芦醇合并用药前后对人胃癌细胞影响的实验研究.方法:用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901,在DDP与白藜芦醇合并用药前后对细胞存活率的影响,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构变化.结果:DDP与白藜芦醇合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,其增效倍数为单独用药的2.61~4.21倍(P<0.01),细胞生长停止在S期,S期数分数为0.52,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,细胞超微结构显示:细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.结论:研究表明顺铂与普通中药合用,可获得化疗药单独用药相同疗效,白藜芦醇能增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用,增加敏感性,减少药物副作用.     

细胞间隙连接与肿瘤

介绍细胞间隙连接的结构、功能和调节，着重阐述间隙连接介导的细胞间通讯在肿瘤中的变化、影响因素以及在肿瘤治疗中的作用。     

A microenvironment,rather than chemical,initiates the cardiomyogenic differentiation of marrow stromal cells

To investigate the potential of cardiomyogenic differentiation of rat hone marrow stromal cells (MSCs), they were exposed to 5-azacytidine treatments (single/repeat) at varying concentrations (3, 5, 10μmol/L) and the fates of the cells were analyzed by immunocytochemistry, Western blot and the reporter gene of enhanced cyan fluorescent protein (ECFP) under the control of ventricular myosin light chain 2 (MLC2v) promoter. MSCs were also cocultured with cardiomyocytes for periods up to 16 days, and the expression of cardiac myosin heavy chain(MHC) and troponin Ⅰ (Tn I) proteins was analyzed. After the induction with 5-azacytidine, neither spontaneously beating ceils nor myotubes were found; MHC and Tn I proteins were also undetectable and no ECFP-positive MSCs were detected. But when cocultured with cardiomyocytes, spontaneously contracting MSCs were observed and cardiac specific proteins could be detected. The results proved that the novel effects of 5-azacytldine on the cardiomyogenic differentiation of MSCs should be questioned and a direct intercellular communication with cardiomyocytes is necessary for MSCs to differentiate into cardiomyocytes.     

超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响

目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对Jurkat T淋巴细胞的影响.方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测Jurkat T淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变.结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与Ra值明显发生改变.Jurkat T淋巴细胞经过质量浓度为0.1-100 mg/L SEA,作用48 h期间,Jurkat T细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显.其中,质量浓度10 mg/L SEA作用24 h,Jurkat T淋巴细胞表面结构变化最明显,而细胞增殖活性在48 h达最强.结论:SEA作为超抗原作用于Jurkat T淋巴细胞后,Jurkat T淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏.     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。     

大脑皮质微血管内皮细胞培养及其缺氧性损害模型

建立改良的体外培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞缺氧模型．取1～5d Wistar乳鼠脑皮质获得的脑微血管内皮细胞（BMEC）进行体外培养，缺氧组置入一个经改造的保鲜盒内，密闭并通入混合气体（95％N2和5％CO2）12h，检测缺氧细胞的形态结构、细胞死亡率及培养液中乳酸脱氢酶漏出量．结果显示缺氧BMEC形态结构损伤，细胞死亡率增加，细胞乳酸脱氢酶漏出量显著增加（p〈0．01）．该模型可使脑血管内皮细胞受到损伤，证实该模型具有一定的可靠性、操作简便，可重复性强，为体外研究脑血管疾病提供帮助．     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜技术观察细胞形态结构的改变，利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果（1）丙戊酸能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长，药物浓度相当于生药32．65mg／mL时，即具有显著的抑制作用，抑制率呈剂量和时间依赖性，半数抑制浓度0c．50）相当于生药66．44mg／mL。（2）形态学改变呈典型的凋亡特征。（3）丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡，凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用，诱导其凋亡是其机制之一。     

细胞周期检测作为生物相容性评价指标的研究

应用体外细胞培养法,观察不同质量分数羟基磷灰石浸提液对L-929细胞的细胞学形态的影响,同时采用MTT比色法评价羟基磷灰石对L-929生长和增殖的影响,流式细胞仪检测羟基磷灰石浸提液对L-929 细胞生长周期及凋亡的影响.结果表明,羟基磷灰石浸提液对体外培养的细胞形态无明显影响,对细胞生长和增殖无明显抑制作用;不同质量分数材料浸提液的细胞毒性为0～1级;随羟基磷灰石浸提液质量分数的升高,细胞凋亡率逐渐上升;50%、75%、100%羟基磷灰石浸提液组能明显降低G0/G1期细胞比例,增加S,G2/M期细胞比例,能增加L-929细胞DNA的合成,促进细胞生长和组织修复.细胞周期检测是生物材料生物相容性评价的一种可靠方法和指标.     

Regulated portals of entry into the cell

The plasma membrane is the interface between cells and their harsh environment. Uptake of nutrients and all communication among cells and between cells and their environment occurs through this interface. 'Endocytosis' encompasses several diverse mechanisms by which cells internalize macromolecules and particles into transport vesicles derived from the plasma membrane. It controls entry into the cell and has a crucial role in development, the immune response, neurotransmission, intercellular communication, signal transduction, and cellular and organismal homeostasis. As the complexity of molecular interactions governing endocytosis are revealed, it has become increasingly clear that it is tightly coordinated and coupled with overall cell physiology and thus, must be viewed in a broader context than simple vesicular trafficking.     

Noise-resistant and synchronized oscillation of the segmentation clock

Periodic somite segmentation in vertebrate embryos is controlled by the 'segmentation clock', which consists of numerous cellular oscillators. Although the properties of a single oscillator, driven by a hairy negative-feedback loop, have been investigated, the system-level properties of the segmentation clock remain largely unknown. To explore these characteristics, we have examined the response of a normally oscillating clock in zebrafish to experimental stimuli using in vivo mosaic experiments and mathematical simulation. We demonstrate that the segmentation clock behaves as a coupled oscillator, by showing that Notch-dependent intercellular communication, the activity of which is regulated by the internal hairy oscillator, couples neighbouring cells to facilitate synchronized oscillation. Furthermore, the oscillation phase of individual oscillators fluctuates due to developmental noise such as stochastic gene expression and active cell proliferation. The intercellular coupling was found to have a crucial role in minimizing the effects of this noise to maintain coherent oscillation.     

芒果苷对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其机制研究

利用相差显微镜观察细胞形态变化情况;用MTT法测定芒果苷对A549细胞增殖作用的影响以及Western-Blot法检测芒果苷对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白分子表达水平的影响.结果显示,与对照组相比,芒果苷对人肺腺癌A549细胞的抑制率与浓度和时间均呈正相关性.在有效浓度为3μM,作用最佳时间为48h时,A549细胞的镜下形态和结构发生显著的变化;并且导致Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性以及它们的剪切小体数量增加.表明芒果苷对人肺腺癌A549细胞具有抑制增殖的作用,并且通过caspase依赖性途径诱导A549细胞凋亡.