Nucleostemin siRNA对结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响

利用RNA干扰技术沉默结肠癌细胞株HT-29细胞中Nucleostemin(NS)基因的表达,并分析其对HT-29细胞凋亡的影响,进一步利用半定量RT-PCR和Western blotting技术检测细胞凋亡相关基因caspase-3/9 mRNAs和蛋白的表达.结果表明,NS基因的沉默能明显提高caspase-3/9的活性(P0.05),并诱导细胞发生凋亡,此外,HT-29细胞中NS基因沉默后,caspase-3/9mRNAs和蛋白的表达均明显升高,提示NS基因沉默介导的细胞凋亡与caspase-3/9基因表达的升高密切相关.     

ABL沉默对DOX和TRAIL诱导结肠癌细胞HT29凋亡的影响

研究酪氨酸激酶Abelson(ABL)基因沉默与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)、阿霉素(doxorubicin,DOX)联合作用对结肠癌细胞株HT29凋亡的影响.利用shRNA慢病毒载体构建ABL沉默稳转细胞株,并用Western blot检测ABL表达水平;细胞计数试剂盒8(cell count kit 8,CCK8)实验检测细胞增殖和药物毒性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白PARP1,cleaved-caspase3的表达水平.结果表明:TRAIL,DOX均能够抑制结肠癌细胞的细胞活性,二者联合用药可在较低剂量诱导细胞凋亡;ABL基因沉默能够抑制结肠癌细胞增殖,但同时也抑制了TRAIL对HT29细胞的凋亡诱导作用,以及TRAIL和DOX对HT29细胞凋亡的协同作用.可见,DOX和TRAIL联合用药能够显著诱导HT29细胞发生凋亡;虽然ABL沉默能抑制HT29细胞增殖,但同时也抑制了TRAIL和DOX协同促进HT29细胞凋亡的作用.     

siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。     

血清对人脑胶质瘤细胞株U251基因表达的影响

利用分子原位杂交和定量PCR技术分析新生小牛血清培养和无血清培养的人脑胶瘤细胞株U2 5 1的基因表达 ,发现血清对细胞周期正调控基因cdc2基因和PCNA基因的表达有激活作用 ,而对细胞周期负调控基因 p2 1和 p16基因的表达有抑制作用 .这些事实表明 ,血清刺激细胞生长时 ,一方面要激活促进细胞增殖的基因 ,另一方面要抑制或关闭抑制细胞增殖的基因     

siRNA干扰Survivin基因对结肠癌生物学特性影响

向结肠癌SW480细胞中导入针对Survivin基因的siRNA,研究RNA干扰对SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据,同时寻求新的、有效的RNA干扰片段.设计3条特异性干扰靶向Survivin基因的siRNA,转染24,48,72h后,Western蛋白印迹法检测Survivin蛋白变化,同时噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.3条siRNA分别作用于SW480细胞,转染24,48,72h后,3组Survivin蛋白表达均出现下调(P<0.05),在48h时达到顶峰,抑制率分别为66.5%±2.1%,49.6%±2.8%和47.8%±3.1%,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT法显示Survivin基因沉默后,细胞增殖受到明显抑制.脂质体所介导的体外Survivin siRNA,能有效地沉默结肠癌细胞的Survivin基因,从而抑制结肠癌细胞的增殖和促进细胞的凋亡,特别是针对保守区域设计的靶向siRNA.干扰效果更为显著.     

PRDM14表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响

利用原位杂交和免疫组织化学检测89例食管鳞癌组织和对应的正常食管黏膜组织中PRDM14 mRNA转录水平和蛋白的表达量,并分析其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响.结果显示,食管鳞癌组织中PRDM14 mRNA转录水平和蛋白表达量高于正常食管黏膜组织,有显著性差异(P<0.05).PRDM14 siRNA能下调EC9706细胞中PRDM14蛋白表达,其表达下调显著抑制EC9706细胞的增殖、改变细胞周期分布和降低侵袭力.此外,PRDM14表达下调降低EC9706细胞中cyclin D1、cdk2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达以及提高p21和E-cadherin蛋白的表达.上述结果表明PRDM14可能在食管鳞癌的发生、发展中发挥重要的作用,抑制其表达.有望成为食管鳞癌分子靶向治疗的新的策略.     

西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导结肠癌HCT-15细胞凋亡

研究西达本胺(Chidamide)对结肠癌细胞系HCT-15的增殖抑制作用及机制. 以不同浓度西达本胺处理HCT-15细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况及细胞的药物敏感性;平板克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;EdU实验检测细胞增殖周期;Western blot检测乙酰化组蛋白、线粒体凋亡途径相关蛋白、细胞周期相关蛋白表达水平的变化. 结果表明:西达本胺抑制HCT-15细胞增殖呈浓度和时间依赖性,细胞体外克隆形成能力减弱,凋亡增多,细胞分裂相明显减少、总周期变慢,乙酰化组蛋白H3和H4、线粒体介导的相关凋亡蛋白表达上调、p21、p27表达上调、CDK2、CyclinA2蛋白表达下调. 西达本胺可抑制HCT-15细胞增殖,通过线粒体途径诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期.     

以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA( small interference RNA) 抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变.方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100 μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照.于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50.转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率.结果:以MRP为靶标的siRNA 明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P＜005);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P＜005).结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株周期阻滞作用的研究

目的:研究淫羊藿素(ICT)对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的增殖抑制作用及机制,为复发耐药性卵巢癌治疗药物的研发提供新思路.方法:利用胸腺嘧啶核苷酸(TdR)双阻滞法建立周期同步化模型,采用流式细胞技术检测淫羊藿素对同步化后的不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的细胞周期阻滞作用,Western blot检测浓度为20μmol/L淫羊藿素作用下细胞株周期蛋白CyclinE、CyclinB1、p53及CHK1蛋白表达情况.结果:淫羊藿素浓度为20μmol/L作用4 h时即产生周期阻滞作用,阻滞效果随作用时间延长而增强;其中,p53野生型C13~*细胞株G1期百分比升高(P0.05);p53变异型A2780cp细胞株G2期百分比升高(P0.05);p53缺失型的SKOV3细胞株G2期百分比升高(P0.05).淫羊藿素20μmol/L作用下,p53野生型C13~*细胞株CyclinE表达下调,而CyclinB1蛋白无明显变化;p53变异型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株CyclinB1蛋白表达下调,而CyclinE无明显变化.p53野生型C13~*细胞株p53蛋白表达明显上调,p53变异型A2780cp细胞株p53蛋白无明显变化,p53缺失型SKOV3细胞株p53蛋白表达缺失;三株细胞CHK1蛋白表达均明显升高.结论:淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞均具有时间依赖性的周期阻滞作用;其对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞的阻滞作用途径不同;其中对p53野生型C13~*细胞株通过p53途径下调CyclinE蛋白诱发细胞G1期阻滞;而对p53突变型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株则通过CHK1途径下调CyclinB1诱发G2期阻滞.     

CyclinE反义RNA抑制乳腺癌细胞增殖及P21wafl转录水平

利用反义RNA抑制基因表达的技术,发现cyclinE基因在表达受到抑制后,乳腺癌细胞增殖速率和致瘤性明显下降,结果还表明cyclinE基因的抑制,可使p21wafl的转录水平上升,由此说明cyclinE的异常与乳腺癌的发生有着密切的关系,在细胞周期调控上p21wafl的转录受到cyclinE表达水平的明显影响.     

Social controls on cell survival and cell death.

Programmed cell death occurs in most animal tissues at some stage of their development, but the molecular mechanism by which it is executed is unknown. For some mammalian cells, programmed death seems to occur by default unless suppressed by signals from other cells. Such dependence on specific survival signals provides a simple way to eliminate misplaced cells, for regulating cell numbers and, perhaps, for selecting the fittest cells. But how general is this dependence on survival signals?     

The hard cell

Ethical quandaries aside, stem-cell science is attracting researchers worldwide. Ricki Lewis reports.