人食管鳞癌细胞球细胞的干细胞特性研究

目的探讨不同代次食管癌Eca109细胞球细胞p75~(NTR)核阳性表达情况和增殖、侵袭能力。方法运用无血清成球培养法,富集到第1代的肿瘤干细胞球样细胞,对其进行离心、接种,得到第2代直至第9代细胞球细胞。检测第1代、3代、5代、7代、9代细胞球细胞中肿瘤干细胞特异性标志物Ki67和p75~(NTR)的表达情况,并对细胞增殖、侵袭能力进行对比。结果第1代、3代、5代细胞球细胞中p75~(NTR)核阳性表达的细胞数量随球细胞代数的增长依次递增,增殖、侵袭能力都随之相应增强;第5代、7代、9代细胞球细胞核均p75~(NTR)表达阳性,同时其相应的增殖、侵袭能力均未见显著差异。结论食管癌p75~(NTR)核阳性表达的球细胞可能是食管癌干细胞。     

食管癌Eca109单克隆细胞株的干细胞特性研究

为分离及鉴定食管癌Eca109肿瘤干细胞。将购买上海生命科学研究院的食管癌Eca109细胞株采用有限稀释法进行单克隆培养并进行HE染色;应用免疫细胞化学技术检测Eca109单克隆细胞株中P75NTR、Oct-4的表达;MTT法和平板克隆实验检测细胞体外增殖情况。Transwell小室法检测各细胞株侵袭能力。结果显示,HE染色示细胞形态有圆形、核大和短梭形、核小两种;在Eca109单克隆的细胞中P75NTR强表达、Oct-4表达相对较弱,且在圆细胞株中表达定位于胞核;MTT法测增殖示圆细胞株增殖率明显高于其他细胞株,差异有统计学意义(P<0.001);平板克隆实验示圆细胞株形成克隆团数高于其他细胞株且细胞团大;Transwell法结果示各细胞株侵袭能力相当。由此可知,Eca109细胞中P75NTR、Oct-4核表达阳性的圆细胞有可能为食管癌干细胞。     

人食管鳞癌Eca109细胞株中肿瘤干细胞的分离与鉴定

为分离富集人食管鳞癌Eca109细胞株中肿瘤干细胞,并对其"干细胞"特性进行鉴定。采用无血清(DMEM/F12 1∶1,无血清)成球培养法获得细胞球,应用免疫荧光细胞化学技术检测Eca109细胞株中细胞球细胞中干性相关转录因子的表达;平板克隆和MTT法检测细胞体外增殖情况;Transwell小室法检测其细胞侵袭能力。结果显示,无血清培养4 d获得Eca109细胞球;P75NTR和Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上,Eca109细胞为细胞核和细胞浆表达,但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱;MTT法测增殖显示细胞细胞球增殖率明显高于Eca109细胞,差异有统计学意义(P0.001);平板克隆实验显示细胞球细胞形成克隆团数高于Eca109细胞;Transwell小室法结果显示细胞球细胞侵袭力高于Eca109细胞。由此可知,食管鳞癌Eca109细胞系通过无血清成球培养法获得细胞球,细胞球存在肿瘤干细胞。     

色胺酮在食管癌化疗耐药过程中的作用

为研究色胺酮对食管癌化疗药物顺铂耐药性的抑制作用及其作用机制,设计食管癌Eca109细胞及其顺铂耐药株Eca109/cDDP细胞的顺铂及色胺酮不同处理组,根据实验目的选择不同的处理方式.利用实时荧光定量PCR检测Eca109和Eca109/cDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)及谷胱甘肽-巯基-转移酶-pi基因(GST-pi)的mRNA表达水平;免疫印迹和免疫荧光技术检测Eca109细胞和Eca109/cDDP细胞中MDR1和GST-pi蛋白的表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)法检测细胞增殖以及基因敲降后的回补效果.结果表明:色胺酮不仅显著抑制了食管癌细胞顺铂耐药株Eca109/cDDP细胞中MDR1基因的表达,而且MDR1和GST-pi蛋白的表达也受到了显著的抑制;色胺酮不但能抑制Eca109细胞的增殖能力,对耐药株Eca109/cDDP细胞增殖也存在抑制作用;色胺酮逆转耐药性的能力依赖于对MDR1和GST-pi的表达抑制.综上分析,色胺酮能够通过抑制MDR1和GST-pi蛋白的表达来逆转食管癌细胞顺铂耐药株的耐药性,是一种潜在的化疗辅助药物.     

二氢卟吩e6光动力学疗法对食管癌Eca—109细胞增殖迁移的影响

研究了二氢卟吩e6(Ce6)介导的光动力学疗法(PDT)对体外食管癌Eca—109细胞增殖迁移的影响.通过MTT法检测了Ce6-PDT对食管癌Eca—109细胞增殖的作用,采用划痕实验探究了Ce6-PDT对Eca—109迁移的影响.结果表明:无光照条件下,低浓度Ce6各组与对照组相比无显著性差异(P>0.05),但Ce6质量浓度为1.0μg/mL时与对照组相比有显著性差异(P<0.05);Ce6-PDT对Eca—109细胞增殖的抑制作用在一定范围内与Ce6浓度、光照剂量、作用时间和孵育时间成正相关(P<0.05);Ce6-PDT对Eca—109细胞迁移能力的影响与未经处理的对照组比较作用不显著.可见Ce6-PDT能有效抑制Eca—109细胞的增殖,但Ce6-PDT对Eca—109迁移的作用不明显.     

miR-143-3p通过调节TGIF2的表达在甲状腺癌中的作用研究

目的 探究过表达 miR-143-3p 对甲状腺癌( thyroid cancer,TC) 细胞的影响及其作用机制。 方法 Real-time PCR 分析正常甲状腺上皮细胞和不同 TC 细胞中 miR-143-3p 的表达。 Targetscan 网站和双荧光素酶报告系统验证miR-143-3p 和 TGIF2 3′UTR 的靶向关系;Real-time PCR 检测 miR-143-3p 和 TGIF2 mRNA 的过表达效率;过表达成功后,将 CAL-62 细胞分为对照组、miR-143-3p mimic 组、pcDNA-TGIF2 组和 miR-143-3p+TGIF2 组,ELISA 检测细胞上清液中诱导型一氧化氮合酶( iNOS) 、白细胞介素( IL) -1β 和 IL-6 的含量;试剂盒检测超氧化物歧化酶( SOD) 水平,免疫荧光检测活性氧( ROS)产生;显微观察干细胞成球,Western blot 检测 TGIF2、p-P65、富含亮氨酸重复序列的 G 蛋白偶联受体5 ( LGR5) 和 八聚体结合蛋白4 ( OCT4 ) 蛋 白 表 达。体内构建裸鼠移植瘤, 检测过表达miR-143-3p 对肿瘤生长的影响。 结果 miR-143-3p 在 TC 细胞中的表达明显低于正常甲状腺上皮细胞( P< 0. 05) 。Targetscan 网站和双荧光素酶报告系统证实 miR-143-3p 与 TGIF2 存在靶向关系。 miR-143-3p mimic 组 miR-143-3p的表达上调( P<0. 05) ,TGIF2 mRNA 和蛋白表达下调( P<0. 05) ,iNOS、IL-1β 和 IL-6 含量明显降低( P<0. 05) ,抗氧化能力显著下降 ( P < 0. 05) , 干 细 胞 成 球 能 力 降 低 ( P < 0. 05) , p-P65、 LGR5 和 OCT4 的蛋白表达均显著下调( P<0. 05) 。 pcDNA-TGIF2 组的结果相反,过表达 miR-143-3p 能显著抑制 pcDNA-TGIF2 的促癌作用。 裸鼠移植瘤模型表明过表达 miR-143-3p 能够减小肿瘤的质量和体积,下调瘤组织中 TGIF2 和 OCT4 的表达( P<0. 05) 。 结论过表达 miR-143-3p 能够通过下调 TGIF2 的表达抑制 TC 细胞促炎因子水平、抗氧化能力和干细胞样特性,并抑制裸鼠肿瘤的形成。     

人胎骨髓MSCs的分离鉴定及其向脂肪和成骨细胞的分化

目的:分离鉴定人胎骨髓中的间充质样干细胞(m esenchym al-like stem cell,MSCs),探索其体外培养的生物学特性。方法:利用细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎骨髓间充质样干细胞;利用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志;添加常规诱导液诱导其向脂肪、成骨方向分化,并利用特异性细胞化学染色法加以鉴定。结果:从人胎骨髓中成功分离、纯化得到间充质样干细胞,P4代细胞有92.3%的细胞处于G0/G1期;P5代细胞有96.1%的细胞处于G0/G1期;流式细胞仪检测P3代细胞结果显示:人胎骨髓MSC表达CD15、CD29、CD44、CD105、CD106和CD166,不表达造血细胞标志CD34、CD45,不表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86、CD40、CD40L。在经典的诱导条件下,人胎骨髓MSCs可迅速向脂肪及成骨方向分化。结论:人胎骨髓中含有丰富的间充质样干细胞,具有较强的多向分化潜能,且免疫原性弱,是组织工程的较为理想的种子细胞。     

EC109细胞株细胞周期DNA代谢和形态改变的研究

人食管癌细胞株 EC109以显微分光光度计测定癌细胞核 DNA 含量,以放射自显影测定细胞核摄取~3H-TdR 和扫描电镜检查细胞表面的超微结构.大多数 EC109瘤细胞间期细胞核的 DNA 含量增加,主要干系细胞 DNA 含量为2 C,属 G_1期,也可见低于四倍体(3 C),高于四倍体(>4 C).甚至多倍体(>8 C)的瘤细胞.~3H-TdR 加入培养基10分钟后,许多瘤细胞核有银粒出现(S 期细胞).大量细胞进入细胞周期反映其恶性程度高.扫描电镜可见 EC109在细胞周期不同阶段其细胞大小形状和微绒毛也不同.本文结果说明用细胞核 DAN 含量测定,~3H-TdR 掺入和细胞表面超微结构可测定肿瘤周期.也可用这些方法判定瘤细胞的恶性程度.     

小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离

利用小鼠皮肤成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植并从重构胚中分离胚胎干细胞(ES)样集落,以便对体细胞核移植重构胚来源的ES细胞样集落进行研究.结果显示,小鼠皮肤成纤维细胞作为核供体,核移植重构胚激活率为60.48%(254/420),囊胚发育率为6.90%(29/420),6个囊胚中分离出ES细胞样集落,分离率为1.43%(6/420),3个ES细胞样集落能够稳定传代,至第5代时核型正常率分别为77.84%,75.18%,77.20%.分离出的ES细胞样集落具有岛屿状团状隆起结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,体外可自发分化成上皮样或梭形细胞.实验证实小鼠唇部皮肤成纤维细胞能够支持体细胞核移植重构胚发育至囊胚,并能分离出可以稳定传代的ES细胞样集落.     

SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定

目的:探讨体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞rMSCs的方法,检测传代细胞的细胞周期,并分析部分细胞表型,对rMSCs进行初步的鉴定。方法:密度梯度离心结合贴壁培养法分离培养rMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原,流式细胞仪检测细胞周期。结果:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化rMSCs,细胞呈均一的成纤维细胞样,细胞周期显示90.16%P1代细胞处于G0/G1期,免疫组化结果为:CD44、CD29阳性、CD34阴性,说明培养的细胞即非造血干细胞,也非成纤维细胞。结论:本实验分离培养的细胞群与间充质干细胞的生物学特性吻合,说明密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化rMSCs,细胞稳定表达CD44、CD29,是实用、可行的方法,所培养的细胞可用于细胞移植等研究。     

食管鳞癌中CDK16的表达及其临床病理意义

以组织芯片为研究对象,采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测细胞周期素依赖性激酶16(Cyclin Dependent Kinase 16,CDK16)在各类型食管癌(鳞癌、基底细胞样鳞癌、梭形细胞鳞癌、腺癌、腺鳞癌、未分化癌)中的表达.结果显示,CDK16在食管癌中的表达具有组织学特异性.CDK16在食管鳞癌中为强阳性表达.CDK16在食管鳞癌中的表达与肿瘤分化程度呈负相关,而且CDK16在细胞核中的表达阳性强度随着肿瘤的恶性程度呈依次递减趋势,而在细胞质中的表达阳性强度随着肿瘤的恶性程度呈依次递增趋势.另外在淋巴结中,CDK16主要以细胞核表达为主,且CDK16在淋巴结中的表达与肿瘤的临床分期呈正相关.以上结果表明,CDK16的表达与食管癌的组织学类型密切相关.CDK16在食管鳞癌中的高表达与食管鳞癌的发生、发展具有紧密的关系.     

CTAB调控乳腺癌干细胞抑制迁移

乳腺癌转移是限制其临床治疗的主要因素.十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为一种潜在的抗癌化合物具有明显的抗肿瘤作用.使用划痕和Transwell实验证明了CTAB可抑制ZR-75-1细胞迁移.乳腺癌干细胞是导致乳腺癌转移的一个重要因素.通过免疫荧光、流式细胞术和细胞成球实验证明CTAB降低了乳腺癌干细胞比例,并且抑制了干性标记物CD44和CD133的表达.实验证明CTAB抑制乳腺癌干细胞并且抑制乳腺癌细胞迁移.     

以鼠腹腔微环境研究三氧化二砷对食管癌EC109细胞骨架的影响

目的:细胞骨架微丝是与肿瘤细胞生长密切相关的因素之一,本文以生物机体腹腔为免疫的微环境,研究化疗药物三氧化二砷(As2O3)对人食管癌细胞株微丝骨架的影响.方法:利用鬼笔环肽(Phalloidin)及碘化丙碇(Propidium Iodide,PI)标记,以流式细胞仪技术分析小鼠腹腔液中食管癌EC109细胞周期的各期细胞内F-actin的变化.结果:诱导肥大细胞(mast cell,MC)迁移入腹腔的同时,迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量,DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加(p<0.05),S期细胞含量降低;三氧化二砷作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均降低,尤其S期为甚.MC和As2O3共同作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均也减少,但G0/G1期细胞数量却显著增加.结论:在小鼠腹腔微环境中,免疫功能改变(免疫细胞MC的聚集)引起G0/G1期细胞数量迅速升高、S期细胞的数量降低,可能促使EC109细胞G0/G1期向S期跨越的延迟;在此环境中,As2O3也可能通过抑制S期EC109细胞内F-actin的重组来延迟细胞从G0/G1期进入S期;诱导肥大细胞迁入腹腔的同时加入药物As2O3,其作用主要表现为短期效应,促进了肿瘤细胞内F-actin含量的降低,G0/G1期细胞数量较高,出现短暂的延迟G0/G1期向S期跨越,增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用.因此,以生物机体为研究环境,可能更真实地呈现化疗药物对肿瘤细胞的治疗效果.     

过表达IL-8受体对脐带源间充质干细胞生物活性的影响

目的探究腺病毒介导的IL-8受体过表达对脐带源间充质干细胞生物活性的影响。方法本研究利用含有IL-8RA和IL-8RB的c DNA和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒载体(p Ad-IL-8RA-GFP、p Ad-IL-8RB-GFP和p Ad-Null-GFP)分别转染分离培养的P3-5代脐带源间充质干细胞,倒置荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测干细胞标签蛋白CD29、CD44、CD34、HLA-DR的表达,CCK-8实验检测转染后细胞的增殖能力,粘附实验及Transwell趋化实验观察过表达IL-8RA/B的脐带源间充质干细胞的迁移能力。结果脐带源间充质干细胞形态均一、生长状态良好;干细胞特异性相关蛋白CD29、CD44阳性表达,CD34、HLA-DR阴性表达;与对照组比较,IL-8RA/B过表达的脐带源间充质干细胞的增殖能力无明显改变,但是过表达IL-8RA/B的间充质干细胞粘附在损伤内皮上以及迁移到小室下方的细胞数目更多。结论以上结果表明IL-8RA/B的过表达不影响脐带源间充质干细胞的增殖能力,但是能够促进脐带源间充质干细胞向IL-8趋化和向损伤内皮细胞粘附。     

人早孕蜕膜组织子宫内膜间质干细胞向子宫内膜上皮细胞定向分化的研究

目的:探讨早孕蜕膜组织分离子宫内膜间质干细胞及子宫内膜间质干细胞向子宫内膜分化的方法.方法:胶原酶Ⅰ法消化早孕人流子宫蜕膜组织,贴壁法分离子宫内膜间质干细胞,传代纯化至第2代,流式细胞仪检测其表面抗原.细胞免疫组织化学法检测角蛋白(CK)、波形蛋白(VIM)的表达.取第2代细胞,接种于24孔培养板爬片.实验分两组:单纯培养基组,细胞因子组即分别加入质量浓度均为10 ng/mL TGF-β、EGF与PDGF-BB.培养至第6天,采用免疫细胞化学法检测子宫内膜上皮标记物CK18和间质标记物VIM的表达.结果:胶原酶Ⅰ酶消化后贴壁培养法能稳定从人早孕蜕膜组织中分离出子宫内膜间质干细胞;子宫内膜间质干细胞不表达CD34、CD45、CK,强表达CD73、CD90、HLA-I;细胞免疫化学法检测干细胞CK阴性,VIM阳性.细胞免疫化学染色提示生长因子组CK阳性,VIM阳性,而对照组CK阴性,VIM阳性.结论:胶原酶法能有效从早孕蜕膜组织中分离出子宫内膜间质干细胞,且子宫内膜间质干细胞能向子宫内膜上皮细胞分化.     

人骨髓间充质干细胞诱导分化为RPE样细胞的探讨

目的:探索骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化成视网膜色素上皮(RPE)样细胞所需的微环境。方法:采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化BMSCs,第一阶段将培养第3代的细胞以bFGF、EGF及BDNF三种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化,应用免疫细胞化学检测诱导细胞巢蛋白表达情况,当巢蛋白阳性表达率达到最高时去除诱导因子,进行第二阶段与第三代人RPE细胞共培养诱导2w,两阶段诱导后均采用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测角蛋白及RPE65蛋白表达情况。结果:免疫细胞化学检测方面,诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达,第12d阳性表达率达到最高,达(86.9±2.6)%,第一阶段诱导后见角蛋白表达,未见RPE65蛋白表达,第二阶段诱导后见角蛋白表达,阳性率为(60.8±3.1)%,见RPE65蛋白表达,阳性率为(25.7±3.8)%。RT-PCR检测方面,两阶段角蛋白与RPE65蛋白结果与免疫细胞化学检测结果一致。结论:体外采用分阶段诱导法,应用因子bFGF、EGF、BDNF及与RPE细胞共培养的微环境作用下能在体外诱导BMSCs表达RPE细胞标志物角蛋白以及RPE65蛋白。     

人与大鼠脂肪干细胞提取方法及生物学特性的比较研究

目的:研究人脂肪干细胞与大鼠脂肪干细胞的提取方法并对比差异,对培养出的细胞做形态学观察及表面标记鉴定.为今后ADSCs分化能力相关研究提供方法及依据.方法:获取人脂肪及大鼠脂肪,利用胶原酶消化法进行ADSCs提取,消化传代以纯化细胞.对比观察细胞形态,并取第3代的细胞进行细胞爬片HE染色、生长曲线测定、成脂和成骨诱导,流式鉴定表面标记物.结果:在相同的培养环境下,两种细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,h ADSCs原代第3天,r ADSCs原代第1天即可见较多细胞伸展为长梭形或短梭形,HE染色可见二者大小形态差异;成脂及成骨诱导组分别用油红"O"、茜素红染色为阳性,对照组为阴性.传代培养后,h ADSCs约1周,r ADSCs约6 d长满.流式鉴定示:二者均CD29(+),CD45(-),CD90(+),CD106(-),符合间充质干细胞特性.结论:本实验建立了高效提取ADSCs的方法,经过比较发现r ADSCs成骨能力较弱,在进行成骨向分化研究时不推荐首选;成脂能力与h ADSCs相似.r ADSCs是较好的动物来源脂肪干细胞,可广泛应用于再生医学研究.     

淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株周期阻滞作用的研究

目的:研究淫羊藿素(ICT)对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的增殖抑制作用及机制,为复发耐药性卵巢癌治疗药物的研发提供新思路.方法:利用胸腺嘧啶核苷酸(TdR)双阻滞法建立周期同步化模型,采用流式细胞技术检测淫羊藿素对同步化后的不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的细胞周期阻滞作用,Western blot检测浓度为20μmol/L淫羊藿素作用下细胞株周期蛋白CyclinE、CyclinB1、p53及CHK1蛋白表达情况.结果:淫羊藿素浓度为20μmol/L作用4 h时即产生周期阻滞作用,阻滞效果随作用时间延长而增强;其中,p53野生型C13~*细胞株G1期百分比升高(P0.05);p53变异型A2780cp细胞株G2期百分比升高(P0.05);p53缺失型的SKOV3细胞株G2期百分比升高(P0.05).淫羊藿素20μmol/L作用下,p53野生型C13~*细胞株CyclinE表达下调,而CyclinB1蛋白无明显变化;p53变异型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株CyclinB1蛋白表达下调,而CyclinE无明显变化.p53野生型C13~*细胞株p53蛋白表达明显上调,p53变异型A2780cp细胞株p53蛋白无明显变化,p53缺失型SKOV3细胞株p53蛋白表达缺失;三株细胞CHK1蛋白表达均明显升高.结论:淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞均具有时间依赖性的周期阻滞作用;其对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞的阻滞作用途径不同;其中对p53野生型C13~*细胞株通过p53途径下调CyclinE蛋白诱发细胞G1期阻滞;而对p53突变型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株则通过CHK1途径下调CyclinB1诱发G2期阻滞.     

南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性并抑制裸鼠成瘤能力

摘要:目的 探究南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达对食管癌细胞化学敏感性的影响。 方法 构建食管癌肿瘤模型小鼠,使用南蛇藤醇(1、5 mg / kg)和顺铂(5 mg / kg)单独或联合对其进行瘤内治疗,观察其肿瘤体积变化和检测 30 d时肿瘤质量;免疫组化检测 Ki67,VEGF 和 Caspase 3 的表达情况。 用不同剂量的南蛇藤醇( 0. 5、1、2. 5、5、10、20、50、80、100 μmol / L)处理人食管上皮细胞系( HET-1 A) 24 h,CCK8 分析检测细胞存活率。 顺铂( 4 μg / mL) 预处理EC109 / DDP 细胞后分别用不同剂量的南蛇藤醇( 1、2. 5、5 μmol / L) 处理 EC109 / DDP 细胞,对照组用 PBS 代替顺铂,CCK8 检测细胞存活率;Transwell 检测细胞的侵袭情况,Western blot 检测细胞中 EMT 相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达情况,Hoechst 染色检测细胞调亡情况。 结果 南蛇藤醇 1 mg / kg 和 5 mg / kg 处理后的食管癌肿瘤模型小鼠体内肿瘤质量和体积均显著降低( P< 0. 05) ;PTEN 蛋白表达水平显著升高( P< 0. 05) ;Ki67,VEGF 和 Caspase 3 阳性细胞数均显著减少( P<0. 05) 。 用南蛇藤醇(1、2. 5、5 μmol / L) 处理后,与对照组比较,EC109 细胞存活率和侵袭力均显著降低( P<0. 05) ; Ki67、PCNA、N-cadherin 和 Vimentin 蛋白表达水平显著降低( P<0. 05) ;E-cadherin、cleavedPARP 和 cleaved caspase 3 蛋白表达水平以及细胞凋亡率显著升高( P< 0. 05) ;干扰 PTEN 后细胞存活率以及侵袭力显著升高( P<0. 05) ;凋亡率显著降低( P<0. 05) 。 结论 南蛇藤醇介导的 PTEN 过表达增强顺铂对食管癌细胞EC109 生长、侵袭和 EMT 的抑制作用,促进顺铂诱导的食管癌细胞 EC109 凋亡,从而增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性。     

Ki67、p63在不同状态食管上皮的表达变化及意义

为观察蛋白Ki67和p63在食管上皮中的表达变化以及与食管上皮发育之间的关系,本研究收集小鼠胚胎第11-16天和人胚胎第9周以及成年小鼠,正常成人和人食管癌的食管上皮组织。采用免疫组织化学方法检测蛋白Ki67和p63在各食管上皮的表达情况。结果显示:Ki67和p63在所观察的食管上皮中均有表达,但表达强度不同,差异具有统计学意义(P0.05)。Ki67和p63蛋白主要表达在食管上皮基底层细胞的细胞核,两者在食管上皮细胞的表达部位基本一致。Ki67和p63在小鼠和人胚胎时期食管上皮的表达量均高于成年时期食管上皮。并且,Ki67和p63在成人食管癌组织中表达量明显增高。由此可知,Ki67和p63在食管不同发育阶段表达强度有所不同,与食管上皮的发育有密切关系:Ki67和p63的联合检测提高了寻找干细胞的可能性。