壳聚糖作载体制备固定化酶的方法

综述了以壳聚糖为载体制备固定化酶的几种主要方法及其特点。     

细胞固定化及其在工业中的应用

简要地介绍和评述了细胞工程中细胞的固定化及其生物反应器的制备技术、特性和它们在工业中的应用概况及发展的趋势。     

有机溶剂中脂肪酶固定化的研究

研究了在有机溶剂中的脂肪酶的固定化。并确定了固定化脂肪酶的条件,如载体、有机溶剂、初水量等。固定化脂肪酶的回收率达到48.30%且稳定性好,其半衰期为360h.     

固定化脂肪酶的动力学研究

以壳聚糖为载体,用物理吸附固定化脂肪酶,对影响固定化过程的各种因素进行了考察,确定了最优条件,并比较了游离酶和固定化酶的最适温度、pH、酶的热稳定性以及表观Km。固定化酶水解的最适pH(pH7．0)稍低于游离酶(pH8．0),最适温度为50℃(游离酶为40℃)。固定化酶在50℃的半衰期(0．96h)是游离酶(0．32h)的3倍,在4℃的冰箱中贮存3个月活力变化很小。     

生物柴油生产用固定化脂肪酶研究进展

生物柴油是新型的绿色能源,是石油燃料的理想替代物之一．目前生产生物柴油的方法主要是化学法、酶法和超临界法,而其中又以生物酶法最为环保,具备良好的发展前景．通过阐述固定化酶法制备生物柴油的国内外研究和生产现状,从而对固定化酶法制备生物柴油技术的发展给出了建议．     

棉纤维膜上高碘酸钠法固定化脂肪酶

研究了棉纤维膜上高碘酸钠法固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化脂肪酶的温度、酸度以及间歇操作稳定性。通过实验给出了固定化酶的最佳条件：NaIO4浓度为0．2mol/L,交联时间24h,pH值为9左右,酶的质量浓度6．0g/L,固定化酶最在活力7．38U/cm^2。该固定化酶最适应的温度为35℃,pH＝8．0,t1/2=168h。     

合成有机载体固定化猪胰脂肪酶性质研究

以丙烯酸（AA）为单体,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺（MBAA）为交联剂,W（乙醇）=95％为致孔剂反相悬浮聚合得到白色珠状聚合物载体材料,通过N-羟基丁二酰亚胺（NHS）在二环己基碳二亚胺（DCC）作用下脱水得到含酯基活化载体,从而在温和条件下以共价法固定化猪胰脂肪酶．研究得到固定化酶的最佳条件是200r／min,40℃固定1h．比较自由酶和固定化酶的最适温度和pH值,自由酶的最适温度为35℃,固定化酶的最适温度为40℃,提高了5℃;自由酶的最适pH值为8．5,固定化酶的最适pH值为9．5,提高了1个pH单位．连续使用5次固定化酶,仍具有75．7％的相对活力,4℃冰箱中贮存2个月活力未见明显下降,具有一定的工业应用价值．     

大孔疏水载体的制备及其在脂肪酶固定化中的应用

以苯乙烯(St)为功能单体,二乙烯基苯(DVB)为交联剂,采用固液联合致孔的方式,制备了疏水多孔载体。将多孔载体用于脂肪酶Candida sp.99-125的固定化,得780U/g的固定化活力。固定化使酶在30～50℃范围内热稳定性得到了明显的提高,最适反应温度提高了5℃,在pH6.0～9.0范围内酶的相对活力有所提高,最适pH不变仍为8.0。固定化酶单次催化油酸和十六醇的酯化率达98%,其操作稳定性好,连续间歇操作15批,酯化率仍可达到50%。     

海藻酸钠-壳聚糖固定化漆酶的研究

采用海藻酸钠包埋法和海藻酸钠-壳聚糖包埋-交联法固定化漆酶,探讨了固定化条件、固定化漆酶及游离酶的酶学性质,结果表明：包埋法和包埋-交联法固定化漆酶的最佳条件分别为海藻酸钠浓度3％、CaCl2浓度1．5％和海藻酸钠浓度2％、CaCl2浓度2％、壳聚糖浓度1．5％、戊二醛浓度1％．两种固定化漆酶的最适pH和最适温度相同,分别为5．0和30℃,游离酶pH为4．6,温度20℃．包埋法固定化漆酶、包埋一交联法固定化漆酶和游离酶的米氏常数分别为3．3,2．8,1．22mmol／L．     

固定化脂肪酶催化棉籽油合成生物柴油

对比多种载体固定化脂肪酶的吸附效果,确定了以大孔吸附树脂D101为载体,采用先吸附后交联的方法固定脂肪酶。固定化后脂肪酶的稳定性得到较明显改善,最适反应温度50℃,最适反应pH值为8。确定了固定化脂肪酶催化棉籽油与甲醇转酯化反应合成生物柴油工艺条件,醇油比3∶1,含水量1.25%(V/V),加入质量比(酶量与固定化载体)0.48的固定化酶,反应介质辛烷,在40℃反应24h催化生物柴油的合成,最高转化率可达到65%。     

离子交换树脂固定接枝脂肪酶

 酶法是制取生物柴油的一种新型方法,而酶的重复利用率直接影响该法的运行成本.本文采用吸附法将碱性脂肪酶L4固定在4种不同树脂上,对比了利用不同树脂和在不同酶液浓度条件下的固定化效果,然后采用吸附-交联法将脂肪酶固定在树脂DK110上,考查交联方式和交联剂浓度对酶固定化的影响以及固定化酶的重复使用稳定性.结果表明：大孔型离子交换树脂DK110的固定化效果最好,酶液浓度对脂肪酶固定化影响显著.交联方式对固定化效果有显著影响,酶液先与戊二醛混合后加入树脂载体(JL1)所获得的酶活最大(340U/g),酶液、戊二醛与树脂载体同时混合(JL2)重复使用稳定性最好.该研究为固定酶法制取生物柴油奠定了基础.     

微乳凝胶固定化酶催化油酸丁酯的合成

研究了以AOT(二(2—乙基已基)琥珀酸酯磺酸钠)／正庚烷／水／明胶组成的反向微乳凝胶固定化脂肪酶催化油酸和丁醇的酯化反应，分析了凝胶组成、反应温度、溶剂等因素对酯化反应的影响，得到了一种合适的体系，使油酸丁酯酯化率达90％以上。     

棉纤维膜固定化脂肪酶的研究

对棉纤维作载体、对 - ( β-硫酸酯乙砜基 )苯胺 ( SESA)作活化剂固定化脂肪酶的工艺条件进行了研究 ,发现在醚化 p H值为 9.0～ 1 0 .0 ,交联 p H值为 7.0 ,酶的质量浓度为 6 mg· m L- 1,交联时间为 1 2 h,在室温条件下 ,得到最高固定化酶活力为 33U·g- 1。对上述条件下制备的固定化酶的稳定性进行了考察 ,用该固定化酶间歇水解橄榄油 ,重复使用 6次后相对水解率由 1 0 0 %降至 44%。该固定化脂肪酶最适使用的温度为 30～ 35℃ ,p H值为 9.0     

三组分大孔树脂的合成及其在脂肪酶固定中的应用

以甲苯和正庚烷为致孔剂,采用悬浮聚合法合成了三组分甲基丙烯酸缩水甘油酯-二甲基丙烯酸乙二醇酯-丙烯酸丁酯(GMA-EGDMA-BA)环氧基大孔树脂,并应用于脂肪酶的固定。结果表明,加入第三单体丙烯酸丁酯后,同GMA-EGDMA相比较,GMA-EGDMA-BA树脂的孔径变大,其固定化酶量提高约1倍(达20mg/g);同游离酶相比较,固定化酶对温度和pH值的适应性有所提高,其活性恢复达到83.3%以上。     

鲐鱼酶法脱脂技术

应用脂肪酶于鲐鱼鱼片和鱼糜加工的脱脂工艺,并筛选出该酶的最佳使用条件,pH8.7,温度32℃,酶添加浓度40U/mL,脱脂时间50min,同时比较了鲐鱼酶法脱脂与理化法脱脂的效果,结果表明,鲐鱼鱼糜在上述脂肪酶最适脱脂条件下的残脂率可达到5％（干基）,而采用理化法脱脂只能达到10％（干基）左右,对鲐鱼片无论酶法还是理论法均难以达到１０％以下。     

脂肪酶在去污应用中的研究

研究了脂肪酶对油酯污布除油率的影响。结果表明，脂肪酶Lip在含量为40－100u/mL，洗涤溶液pH为9．0，洗涤温度为20－40℃，洗涤时间为20－30min时去污效果最佳。Lip与AES，TX－10或Sav配伍使用有良好的配伍去污作用，而与LAS的配伍去污效果不佳。添加酶稳定剂可以保存酶在洗涤过程中的相对活性，增强脂肪酶的去污作用。     

霉菌产脂肪酶发酵条件的研究

从合肥市不同环境的土壤中分离筛选到几株产碱性脂肪酶的霉菌菌株。这些菌株产酶培养基组成 (% )是 :黄豆粉 4 .0 ,玉米浆 1 .0 ,橄榄油 1 .0 ,小麦粉 1 .0 ,(NH4) 2 SO41 .0 ,K2 HPO40 .2 ,pH自然。产酶的最适温度 2 4～ 2 6℃ ,pH稳定范围为 9.4～ 9.5 ,培养周期为 72h .     

硅 藻 土 固 定 化 脂 肪 酶

采用硅藻土作为载体, 对脂肪酶进行固定化, 研究了固定化条件对固定化脂肪酶 的催化活性以及硅藻土吸附脂肪酶量的影响. 得到最适的固定化反应条件： 温度为30~35 ℃; pH值为7.7; 缓冲液离子浓度在0.01~0.03 mol/L之间; 载体与脂肪酶的质量比为 8∶1.