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相似文献
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1.
RecR是参与大肠杆菌(E.coli)同源重组的蛋白质,在真核生物中存在功能保守性组分.通过构建recR_yfp 融合基因及其表达载体,对大肠杆菌菌体内RecR蛋白的分布情况进行了活体观察.显微镜观察结果表明,RecR蛋白一般在菌体的拟核区起作用.通过对比紫外线敏感性,Re-cR-YFP在重组质粒上提高了recR缺陷型大肠杆菌的抗紫外线能力,表明重组质粒表达的融合蛋白RecR-YFP具有生物活性,能够提高rPfR缺陷型大肠杆菌的存活率.  相似文献   

2.
TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT—NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT—NEP1—40转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT—NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31.59%,纯化后目的蛋白纯度达95.6%,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT—NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT—NEP1—40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。  相似文献   

3.
目的:为制备重组小鼠Pem(以下简称mPem)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,作为研究mPem蛋白功能的材料,方法:根据携带小鼠Pem基因编码序列的模板质粒pEGFP/mPem设计合成特异性引物,PCR扩增小鼠Pem基因编码序列,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-3中,得到重组表达质粒pGEX-4T-3/mPem,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导重组菌表达mPem蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达产物。结果:重组菌株明显诱导表达出预期相对分子质量49000的融合蛋白。结论:成功构建了mPem-GST原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出mPem-GST融合蛋白,为mPem蛋白功能的研究打下了基础。  相似文献   

4.
抗A5型口蹄疫病毒重组多肽疫苗的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
根据A型口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果。设计了A型FMDV的重组多肽疫苗.分别选择VP1上21~40位和137~160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137~160—21~40-137~160的串连结构,并以大肠杆菌β-半乳糖苷酶为大分子载体,构建重组质粒pLM99,在大肠杆菌中表达得到高含量的融和蛋白.体外免疫原性检测表明,所表达的融和蛋白与标准A型阳性血清有特异性抗原/抗体反应,即说明该融和蛋白具有免疫反应性.免疫豚鼠的实验结果表明,融合蛋白能在豚鼠体内诱导中和抗体,并使70%的豚鼠能抵抗病毒的攻击.  相似文献   

5.
利用加端PCR技术在pGEX—1λT质粒BamHⅠ和pstⅠ位点间(片段BamHⅠ端)加入α-amanitin线性八肽碳骨架编码序列,再将两次连续加端PCR产物连入BamHⅠ、PstⅠ双酶切的pGEX—1λT载体,得到含α-amanitin线性碳骨架编码序列的阳性重组子pGAT-1.序列测定和结果分析显示,构建的融合基因相位正确,阅读框通读.通过对融合基因在大肠杆菌中表达条件的优化,目的融合蛋白的表达量可提高33.5%,占总蛋白表达量的28.3%.  相似文献   

6.
以大肠杆菌XL1blue为模板,通过PCR技术扩增大肠杆菌硫氧还蛋白基因,并将目的基因分别连接到克隆载体pUC18和表达载体pTrcHisC上,构建重组质粒.重组质粒pTrcHisC-TRX在大肠杆菌中高效表达,最后利用固定化金属螫合亲和层析技术(IMAC)获得较纯的目的蛋白,为进一步研究硫氧还蛋白的功能及其应用提供了条件.  相似文献   

7.
利用PCR方法扩增DsCOR基因的蛋白编码序列,经BarnH Ⅰ、Sac Ⅰ酶切后连接入pET32a原核表达载体,构建的pET32a—DsCOR融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21进行原核表达.建立了“煮沸-镍离子亲和层析”的蛋白纯化方法.对纯化的DsCOR蛋白进行高温耐受性、pH耐受范围、紫外耐受性方面的研究.  相似文献   

8.
一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT.将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达.表达产量在25%~34%之间.Western blot分析证实了融合蛋白可被大肠杆菌信号肽酶有效地切割。并具有良好的免疫学活性.对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的表达稳定性,显示了其在基因工程中的应用价值.  相似文献   

9.
豌豆胰岛素基因克隆、表达及融合蛋白纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
将人工合成的豌豆胰岛素(PAlb)基因寡核苷酸片段,通过PCR扩增得到PA1b基因,将此基因克隆到原核表达载体pMAL-p2x中,然后将重组质粒pMA1-p2X-PA1b转化大肠杆菌DH5a,经IPTG诱导进行可溶性表达.以Amylose Resin亲和层析,纯化出融合蛋白MBP-PA1b.经SDS-PAGE及Western印迹证明,融合蛋白MBP-PA1b在大肠杆菌中表达成功,为深入研究PA1b的功能作了准备.  相似文献   

10.
研究目的:克隆表达人肠激酶轻链编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化.方法:从人的全基因组中扩增出编码人肠激酶轻链的5个外显子基因片段,经过酶切、连接后得到正确编码的人肠激酶轻链完整基因序列;随后,将目的基因片段插入原核表达载体pBV220中,构建成融合型表达载体pBV—EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),调节温度至42℃诱导重组蛋白表达;通过镍亲和层析纯化得到重组蛋白.结果:所表达的重组蛋白经SDS—PAGE分析,相对表观分子质量约为31kDa,表达量占菌体总可溶蛋白量的46%;通过镍亲和层析纯化得到的重组蛋白经复性后显示出具有催化切割活性.结论:成功构建了能大量表达重组人肠激酶轻链的菌株,为进一步进行重组人肠激酶活性的研究及其在生产和医学方面的应用研究奠定了基础.  相似文献   

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