锌指结构基因HKR1在脑胶质瘤中的表达分析

从人胎脑cDNA文库中筛选到2612nt的锌指蛋白HKR1克隆,C端含有10个C2H2锌指结构,N端含有2个KRAB区域,基因芯片的原位杂交检测显示,HKR1基因表达在脑胶质瘤中明显升高,提示该基因可能是一条潜在的肿瘤相关基因。     

棉花细胞壁蛋白基因分离鉴定与表达分析

棉纤维起源于棉花胚珠外层表皮细胞．研究棉纤维发育，具有重要理论和实践意义．从棉纤维等组织cDNA文库中分离了186个棉花细胞壁结构蛋白基因，按照所编码的蛋白质结构特点，可将这些基因分为三类；富含脯氨酸细胞壁蛋白（Proline—rich cell wall proteins，PRPs）基因、伸展蛋白（Extensins）或者富含羟脯氨酸糖蛋白（Hydroxyproline—rich glycoprotein，HRGP）基因，富含甘氨酸蛋白（Glycine—rich proteins，GRPs）基因．采用cDNA microarray技术，比较上述基因在开花后10天的野生型棉花纤维和无絮无绒（fuzzless—lintless，fl）突变体胚珠表皮中表达谱发现，其中有7个基因在野生型纤维中特异性或高效性表达，表明它们可能与纤维发育有关．     

人类锌指蛋白新基因ZNF641的克隆及表达

从人类心脏cDNA文库中分离并鉴定了一个新的人类锌指基因ZNF641,该基因的cDNA序列全长4．9kb,编码一个含438个氨基酸的蛋白质,从进化上看,该蛋白质在从小鼠到人的脊椎动物中都高度保守．Northern Blot分析显示：ZNF641在人类的多数组织中都有表达,尤其是在骨骼肌中有较高水平的表达．而亚细胞定位则显示ZNF641在细胞核及细胞质中均有定位．     

一个麻疯树C2H2型锌指蛋白基因JcZFP1的克隆与表达分析

从麻疯树胚乳cDNA文库中克隆得到一个C2H2型锌指蛋白基因,JcZFP1,全长931bp,开放阅读框全长735bp,编码244个氨基酸残基,等电点pI=7.0,分子量PA=27.38kD.C2H2型锌指结构位于第81至103个氨基酸残基中,包括植物锌指蛋白特有的保守氨基酸序列QALGGH.在该基因的顺式作用元件上发现了与生长发育和逆境胁迫相关的启动元件.荧光定量PCR(qPCR)检测发现,JcZFP1基因在麻疯树各器官中的表达量依次为:绿果皮花叶根茎种仁,且幼嫩器官表达量高于成熟器官;对麻疯树幼苗进行低温、干旱胁迫时,JcZFP1基因的表达量明显增加,表明该基因可能在麻疯树的生长发育及逆境胁迫应答过程中起重要作用.     

一个新C2H2型锌指蛋白的功能的初步研究

通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条编码332AA的全长新基因,生物信息学研究表明,该蛋白质序列有2个C2H2型锌指结构,其中1个锌指结构有RNA－binding蛋白特异锌指的特征,虽然同源比较发现与多种蛋白质精氨酸N端转甲基酶（protein arginine N-methyltransferase) 有一定的同源性,但新锌指蛋白不含转甲基酶的活性功能区域,属功能未知的基因,利用芯片研究功能未知基因的表达是一种较好的手段,通过代谢增强剂PMA（phorbol myristae acetate)刺激培养的血管内皮细胞,观察细胞受激活后新锌指蛋白基因的表达变化,结果表明新基因表达量提高了11倍以上,证实新基因属内皮细胞的极早期应答基因（Immediate early response gene,ERG)。     

人类RING型锌指蛋白DTX2的全长cDNA克隆与序列分析

鉴定了一个人类WWE与RING型锌指基因DTX2,位于人染色体7q11.23. 通过RACE获得的全长cDNA显示，DTX2编码包含两个WWE区域与一个RING锌指区域的蛋白.     

大鼠小脑特异基因Zic的克隆、序列分析和初步表达

EST（AW055732）片段是SD大鼠脑内一特异表达基因cDNA的3‘-端片段,与小鼠和人的Zic基因同源。基于小鼠及人的Zic基因的同源序列,设计引物用PCR方法从SD大鼠中克隆得到该基因的编码区序列（rZic)。该基因编码一锌指蛋白,其锌指结构域与线虫的tra-1基因,果蝇的ci^D基因。人的Gli癌基因和果蝇的opa基因的锌指结构域高度同源,用RT－PCR方法分析了rZic基因在大鼠脑区分布状况。结果表明,rZic基因在小脑中高表达。将该rZic基因克隆至带有6个组氨酸的表达载体pET-32a( )中,用IPTG诱导rZic融合蛋白在大肠杆菌BL21菌株中表达,诱导后重组蛋白质占菌体总蛋白的20．8％。     

金鱼蛋白磷酸酶2A—B＂家族Alpha和Gamma调节基因的cDNA克隆及mRNA表达

以金鱼卵巢组织作为材料，运用RTPCR和cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆得到蛋白磷酸酶2A（PP2A）调节亚基B＂家族中γ基因（GSPR）cDNA全序列和α基因（PR130）cDNA部分序列．结果显示γ基因cDNA全长1885bp，编码一个含457个氨基酸的蛋白质．而α基因cDNA长1781bp，编码的多肽共含426个氨基酸，系v亚基的部分蛋白序列．它们与已知其他物种对应的B＂家族蛋白质均有着很高的同源性．结构预测分析发现，α和γ两条多肽均存在PP2A调节亚基B＂家族成员共有的两个EFHAND结构域．用RT—PCR的方法检测了这两个基因在金鱼不同组织和胚胎发育不同时期的mRNA表达水平．结果表明，γ亚基在金鱼多种组织和各个胚胎发育时期中均有较高表达且表达量比较平均，仅在卵巢和精巢组织中最为丰富．与γ亚基表达模式相比，α亚基表达呈现明显的组织和胚胎发育阶段差异性，在卵巢和肌肉组织中最高，在肾脏和鳃中最低，在原肠胚、神经胚、脑泡分化和体色素等胚胎发育时期的表达较弱，而在其他时期中的表达较强．据此，推测α、γ两调节亚基可能在金鱼不同组织和胚胎发育过程中起着特定的作用．此外，进一步的分析发现，α基因除参与PP2A全酶功能外还可能具有独立的功能．     

杨树MAGPIE和JACKDAW基因克隆、表达及蛋白互作研究

利用RACE技术从杨树不定根中克隆获得PeMGP和PeJDK基因全长cDNA序列,分别包含1 434 bp和1 518 bp长度的开放阅读框。两者都含2个内含子,其氨基酸序列均有4个保守结构域:2个C2H2型锌指结构域ZF1(CX2-4CX3FX4LX2HX3-5H)和ZF2(CX4CXnHXnX4H),2个C2HC型锌指结构域ZF3(CX2CXnHX3C)和ZF4(CXCXnHX3C)。在根茎叶中均检测到PeMGP和PeJKD基因的表达,但它们在杨树不定根发育过程中具有动态的表达模式。杨树原生质体瞬时表达揭示,PeMGP和PeJDK蛋白都定位于细胞核,两者在细胞核发生相互作用。     

用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因

采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization, SSH）方法，构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减 cDNA 文库，以期 筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA，反转录成cDNA，以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester)，以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(driver)， 经过2轮杂交和抑制性PCR扩增，产物与T载体连接，经蓝白斑筛选，提取质粒，经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序，由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法，进一步验证 了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序，对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较，大部分片段都可以检索到同源序列。 结果显示，cPGES/p23等13个基因热激后表达量上调；septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。     

水稻C2H2型锌指蛋白OsZAT12转化拟南芥功能的初步研究

摘要:植物C2H2型锌指蛋白是植物转录调节因子中的大家族,通过转录调控、翻译后调节和蛋白质间的相互作用在植物发育和环境胁迫中发挥关键作用. 本研究在水稻基因组中克隆到一个C2H2型锌指蛋白,命名为OsZAT12. 生物信息学分析显示OsZAT12全长597bp,其中不包含内含子,其蛋白质序列含有199个氨基酸,具有两个典型的C2H2锌指结构. OsZAT12蛋白定位于细胞核,在根中特异性表达.过表达拟南芥植株与野生型比较,其根变短,子叶的变绿率明显降低,植株矮小.初步推断OsZAT12可能影响植物生长发育尤其是根的伸长.     

Rab结合蛋白RanBP1的同源基因M3的克隆与功能分析

以Ran结合蛋白RanBP1的保守区域作为探针,低严谨条件下杂交筛选人视网膜cDNA文库,得到阳性克隆M3,它与鼠zhx-1基因高度同源.RH作图将其定位于8q24.11～q24.3.拼接EST序列并填补缺口,得到M3 cDNA全长4 934 bp,与Northern blot得到的主要转录本长度一致.此cDNA全序列包括2 622 bp开放阅读框,编码873氨基酸,含有2种翻译调控元件uUAG和TTATTTAT.该基因预测蛋白含有2个锌指结构,5个同源盒保守区,1个双侧核定位序列(NLS)及35个磷酸化位点,表明它既可能作为转录调控因子,也可能受到上游因子的调控.     

Ran结合蛋白RanBP1的同源基因M3的克隆与功能分析

以Ｒａｎ结合蛋白ＲａｎＢＰ１的保守区域作为探针,低严谨条件下杂交筛人视网膜ｃＤＮＡ文库,得到阳性克隆Ｍ３,它与鼠ｚｈｘ－１基因高度同源。ＲＨ作图将其定位于８ｑ２４．１￣ｑ２４．３。拼接ＥＳＴ序列并填补缺口,得到Ｍ３ ｃＤＮＡ全长４９３４ｂｐ,与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ得到的主要转录本长度一致。此ｃＤＮＡ全序列包括２６２２ｂｐ开放阅读框,编码８７３氨基酸,含有２种翻译调控元件ｕＵＡＧ和ＴＴＡＴＴＴ     

烟草尼古丁去甲基酶基因CYP82E4启动子结合蛋白的鉴定与分析

 以尼古丁去甲基酶编码基因（CYP82E4）上游的启动子功能元件作为诱饵,使用酵母单杂交方法从喷施乙烯利叶片的cDNA融合表达文库中钓取与之相互作用的结合蛋白.研究结果表明,诱饵载体pHIS2/pE4和cDNA融合表达载体pGADT7-Rec2共转化到酵母细胞中的效率为1×10⁶.对文库的筛选结果表明,本研究共获得39个阳性克隆,且阳性克隆的插入片段在850～2500bp之间.将获得的39个阳性克隆进行测序,其中发现1个可能参与基因(CYP82E4）表达调控的锌指蛋白转录因子.下一步将对其功能进行分析,为通过分子育种手段培养低含量去甲基尼古丁的烟草提供实验基础.     

棉蚜Para钠通道cDNA和基因组DNA片段的克隆和序列分析

采用降落 PCR技术 ,根据昆虫 para型钠通道 区 S4至 S6及 与 连接区的保守区域设计简并引物 ,成功地克隆了棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段 (Gene Bank登录号分别为 :AF4 114 5 5、AF4 475 74 ) ,其中 c DNA片段为 6 5 9bp,编码 2 2 0个氨基酸。利用 c DNA片段设计特异性引物克隆获的基因组DNA片段为 132 8bp,共有 2个内含子。Blast序列分析表明 ,PCR扩增获得的棉蚜 para型钠离子通道 c DNA片段所编码的氨基酸与其他昆虫的 para型钠通道氨基酸具有很高的同源相似性 ,与马铃薯甲虫、德国小蠊、果蝇和家蝇的同源性分别为 6 5 %、6 3%、6 3%、5 9%。棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段的克隆对于农药分子设计与害虫抗性机制 ,特别是靶标抗性分子监测具有重要意义。     

Molecular cloning and characterization of a cotton phosphoenolpyruvate carboxylase gene

Phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) plays diverse physiological functions during plant development. In this study, a new phosphoenolpyruvate carboxylase gene GhPEPC2 is isolated from cotton (Gossypium hirsutum cv. zhongmian 35) by RACE-PCR. The cloned cDNA of GhPEPC2 is 3,364 bp in length, and has an open reading frame of 2,913 bp, encoding for 971 putative amino acids with a calculated molecular mass of 110.6 kD and pI of 5.56. The deduced amino acid sequence of GhPEPC2 shares high similarity with other reported plant PEPCs. Southern blot analysis indicates that the cotton PEPC exists as a small gene family and the GhPEPC2 might have two copies in the cotton genome. The semi-quantitative RT-PCR reveals that GhPEPC2 constitutively expresses in all the tissues of cotton and accumulated highly in roots, flowers and embryos but relatively low in stems and fibers. In addition, the recombinant GhPEPC2 has been purified by expressing it in E. coli and the catalytic properties of it were also investigated. The results showed that GhPEPC2 is a typical C₃ PEPC with a higher K_m (83.6 μM) and lower V_max (8.0 μmol min^-1 mg^-1) compared with the C₃ PEPCs previously reported.     

青岛文昌鱼核糖体蛋白AmphiL 37a基因的克隆和同源性分析

对青岛文昌鱼神经胚cDNA进行测序,获得了3个AmphiL 37a的EST,经拼接得到编码文昌鱼核糖体蛋白的AmphiL37a基因全长cDNA序列并演绎出AmphiL37a的氨基酸序列.通过对AmphiL37a蛋白的结构分析及其与多种脊椎动物和无脊椎动物中同种蛋白的同源性进行比较,发现AmphiL37a具有典型的四个半胱氨酸的锌指结构,与人、鼠、鸡的L37a,尤其与果蝇、隐板石鳖等高等无脊椎动物核糖体L37a具有较高的同源性,说明文昌鱼在进化上更接近于高等无脊椎动物;同时说明核糖体蛋白L37a基因在进化上具有较高保守性.     

河蟹指环蛋白基因的克隆与组织分布

河蟹在水产养殖业中占据十分重要的地位。深入开展免疫防御机制的相关研究,是实现其健康养殖的可靠保障。通过RACE技术获得了河蟹指环蛋白基因的cDNA全长序列。通过RT-PCR法研究了该基因的组织分布和对鳗弧菌刺激的响应。河蟹指环蛋白基因的cDNA全长为1 257 bp,具有典型的指环结构域。河蟹指环蛋白基因在各检测组织中呈组成型表达。研究结果表明指环蛋白基因参与河蟹的多种生物学功能。