农杆菌介导的棉花遗传转化过程中诸因素对出愈率的影响

研究了农杆菌介导的棉花遗传转化过程中影响外植体出愈率的一些相关因素.结果表明:卡那霉素(Kan)的浓度以50 mg/L或75 mg/L为最好,农杆菌菌株EHA105的浸染能力较强,7 d苗龄的棉花无菌苗下胚轴为最佳的遗传转化外植体材料,下胚轴外植体经预培养后再经农杆菌菌液浸染更有利于胚性愈伤组织的形成,同时农杆菌菌液浸染时间以3 min为最佳.     

农杆菌介导的花生遗传转化体系的初步研究

应用花生胚小叶再生体系,以农杆菌介导法对质粒上的基因转化进行初步探讨.通过对影响基因转化的各因素,如抗生素的筛选压、共培养时间、AS的影响、及外植体取材方式等进行研究,结果发现:外植体与农杆菌在加有AS(100μmol/L)的改良MS液体培养基中共培养4 d后,先进行10 d的恢复培养,继而转入加有Hy(25 mg/L)和Cef(200 mg/L)的抗性筛选培养基中进行筛选培养40～50 d,后转入含Hy(20 mg/L)的分化培养基中分化,3个月后在首批材料中得到6个再生植株,经PCR检测,有1株显示了800 bp的GUS基因核酸片段,初步证实了此转化体系合理有效.     

雄性二倍体毛白杨再生体系的构建和遗传转化的研究

【目的】建立雄性二倍体毛白杨再生体系,构建稳定的遗传转化方法,为进一步研究毛白杨基因功能提供试验平台。【方法】以雄性二倍体毛白杨的幼嫩茎段和叶片为外植体,1/2 MS为基本培养基,通过调整6-BA、IAA和TDZ激素浓度进行再生体系筛选;采用农杆菌EHA105介导叶盘法,控制预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和卡那霉素筛选浓度,进行遗传转化;以幼嫩叶片原生质体为受体细胞,PEG介导转化荧光标记基因EGFP,进行瞬时表达。【结果】雄性二倍体毛白杨再生过程包括继代、芽伸长和生根3个阶段,其培养基组分分别为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ、1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA和1/2 MS+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,该条件下生根率为96.7%,增殖系数为4.47。遗传转化过程包括预培养、农杆菌侵染、共培养、抗性筛选和生根5个阶段,其中预培养为12 h、农杆菌浓度OD₆₀₀为0.4、侵染时间为20 min、共培养时间为24 h、卡那霉素(30 mg/L)筛选45 d和抗性苗生根20 d。试验共获得86株抗性植株,其中14株分子鉴定结果为阳性。在40% PEG4000的介导下,EGFP基因瞬间转化效率为50%。【结论】雄性二倍体毛白杨再生周期短、遗传转化稳定,是杨树基础研究的理想材料。本研究拓宽了杨树遗传转化体系,为杨树分子辅助育种提供了新途径。     

农杆菌介导的二氢黄酮醇3''5''羟化酶cDNA对非洲菊的转化及对其花色的影响

通过非洲菊(Gerbera hybrida)组织培养建立起适合于农杆菌介导的基因转化受体系统，非洲菊叶柄外植体在MS 3mg／L BA 0．01mg／L NAA培养基中直接诱导芽生长，在MS 0．1mg／L NAA培养基中生根培养，获得再生植株，诱导率达57％。带有云南矮牵牛(Petunia hybrida)二氢黄酮醇3’5’羟化酶cDNA的pEH表达载体与农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404融合后，与非洲菊叶柄外植体共培养3d，通过含有卡那霉素25mg/L和羧苄菁霉素500mg/L的选择培养，诱导出转基因非洲菊。经PCR和Southern分子杂交检测，证明目的基因已整合入非洲菊的基因组中，转基因非洲菊花色、花型及叶型都有显变化。     

4种抗生素对菘蓝外植体生长的影响

对抗生素卡拉霉素和潮霉素进行菘蓝外植体抗性浓度筛选，结果表明不同外植体具有不同抗性．子叶芽分化阶段，卡拉霉素和潮霉素筛选浓度范围分别为10-50mg／L和5-30mg／L；下胚轴芽分化阶段的筛选浓度分别为15-50mg／L和10-30mg/L；分化苗生根时筛选浓度分别为30mg/L和20mg/L．芽分化阶段宜使用头孢霉素为抗菌剂，但分化苗生根时宜选用羧苄青霉素．     

本生烟组织培养及遗传转化体系的建立

本文研究了通过农杆菌侵染获得本生烟(Nicotiana benthamiana)转基因植株的方法。将本生烟中上部叶片消毒后切成5mm×5mm左右的小块作为外植体,在含有6-BA(3mg/L)和NAA(0.2mg/L)的MS培养基中培养2~3d,用含有表达载体的农杆菌侵染后共培养3~4d,转入含有6-BA(3mg/L)、NAA(0.2mg/L)和卡那霉素(100mg/L)的MS培养基中培养2~3周。将外植体边缘产生的愈伤组织和芽点转移到只含有卡那霉素(100mg/L)的MS培养基中继续培养,2周后分化出大量不定芽。继续培养2周,当芽长1~3cm时,将芽转移到含IBA(0.1mg/L)的MS培养基中分化生根,得到再生植株。当再生植株高8~10cm、根长4~5cm以上时,移栽到经过灭菌的营养土中。通过实时荧光PCR扩增,从获得的植株中检测35S启动子和NOS终止子外源基因片段,判定所得的植株的确为转基因植株。最后对本生烟组织培养中应该注意的问题进行了讨论。     

超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化

由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积,提高农杆菌对外植体的转化频率。用野生型发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes)A4菌株感染黄瓜（Cucumis sativus L.) 无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系。同时,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究。结果表明,采用外植体在添加0．5mg/L NAA和2mg/L 6-BA的MS培养基上预培养4d,超声波处理2s,共培养3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果,发根诱导率为94．7％。乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显。冠瘿碱检测表明,发根确定能合成农杆碱。     

TDZ促进花生外植体分化及基因转化

以花生成熟胚的上胚轴和胚叶为外植体，通过农杆菌介导转化Bt和CpTI双基因，在共培养基和诱导培养基中加入TDZ诱导不定芽和体细胞胚，实验证明，TDZ有明显促进花生外植体分化的作用，当诱导培养基组成为TDZ0．3mg/L NAA 0.4mg/L，诱导时间为28d，分化培养基为MS时采用TDZ发胚培养基萌发的轴外植体分化率最高，可达73％，GUS基因阳性率3．5％，当诱导培养基组成的TDZ0．2mg/L NAA0.4mg/L，诱导时间为21d，分化培养基为MS时水萌发种胚叶外植体分化率最高，达56％，GUS基因阳性率2．5％。     

根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化的研究

以向日葵无菌苗的子叶节为外植体,通过农杆菌介导法,对其遗传转化条件进行了研究,建立了向日葵子叶节农杆菌介导的遗传转化体系.结果表明:在农杆菌浸染前(浸染浓度为OD600=0.6)进行2 d的预培养、浸染8 min的外植体在MS+1.2 mg/L 6-BA+0.03 mg/L IAA的培养基上转化效率较高.PCR检测初步证明,LycB基因已整合到向日葵再生植株中.     

胞质雄性不育新基因T1243在大白菜中的遗传转化

以大白菜带柄子叶为外植体,通过农杆菌介导法,优化大白菜的遗传转化体系,得出结论:津育75的最佳筛选培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+7.0mg/L AgNO3+7.5mg/L Kan+200mg/L Amp,外植体在黑暗条件下预培养2d,然后用OD600值为0.1菌液侵染2min,共培养2d时转化率最高,为35.48%.对抗性植株进行分子检测,结果表明T1243基因已整合到大白菜中,并可以正常表达。     

油菜转化体系中抗生素浓度的优化试验

以芥菜型油菜 (Brassicajuncea)DB3 下胚轴为外植体 ,对卡那霉素和羧苄青霉素对外植体分化影响进行了研究。结果表明卡那霉素不仅可以抑制芽的分化和愈伤的形成而且可以使分化出的芽在很短的时间内白化死亡 ,在浓度为 6 0mg/L时 ,四周后 ,可以使分化率为 0 ;羧苄青霉素在浓度为 0 .5 g/L时 ,可以完全抑制农杆菌的生长 ,同时发现它对于芽的分化有促进作用     

生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入

以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var.capatata L.)为试材，以MS为基本培养基。采用不同激素配比，确定生菜高效诱芽培养基为MS 0．1 mg／L6-BA 0．05mg／LNAA；抗生素敏感性试验表明，筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75mg／L，抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg／L；通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜，PCR检测转化率达25．4％。     

抗生素对番茄子叶愈伤组织诱导的影响

以番茄子叶为外植体,将其接种在含不同种类和浓度的抗生素培养基上进行培养,研究卡那霉素（Kna）、潮霉素（Hyg）以及羧苄青霉素（Carb）对番茄子叶愈伤组织诱导的影响。研究结果表明：卡那霉素、潮霉素以及羧苄青霉素对番茄子叶愈伤组织的分化均有一定的抑制作用。随着三种抗生素浓度的提高,番茄子叶愈伤组织的分化频率逐渐降低,当Hyg达到20 mg/L时,完全抑制愈伤组织诱导产生芽;与Hyg相比,Kan的抑制作用相对弱一些,Carb的抑制作用最弱。     

丽格海棠的组织培养与快速繁殖研究

以丽格海棠的茎状、叶柄、叶片为外植体进行组织培养。最佳培养基：（1）诱导培养基MS＋6－BA4．0mg/L(单位下同）＋IBA1．0；（2）增殖培养基MS＋6－BA0．5＋IAA0．2；（3）生根培养基MS＋NAA0．2．生根壮苗培养50d左右，经移栽，成活率达92％左右。     

大岩桐的组培快繁和温室栽培

以大岩桐（Sinningia hybrida Hort.）叶柄为外植体,通过2次灭菌后进行组织培养,适宜条件为（1）诱导培养基为MS＋BA2.0mg/L;（2）继代和增殖培养基为MS＋BA1.0mg/L NAA0.5mg/L;（3）生根培养基为MS＋NAA0.2mg/L或MS＋IBA0.5mg/L,大岩桐在适合的栽培条件下生长良好,具有很强的观赏性。     

堇叶碎米荠组织培养研究

堇叶碎米荠(Cardamine violifolia)是在我国富硒地区发现的一种富集硒植物,具有很高的科学研究价值。研究以堇叶碎米荠的幼叶为外植体,进行组织培养研究,结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.6mg/L,诱导率高达85%,以培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.6mg/L诱导不定芽分化效果最好;在生根阶段以培养基MS+NAA1.0mg/L生根效果最好,生根3.2条/株,根系健壮。     

濒危药材红芽大戟组培快繁影响因素研究

【目的】研究濒危药材红芽大戟(Knoxia corym bosa Willd)最适宜的组培快繁方法,为规模化生产红芽大戟提供依据。【方法】选取红芽大戟不同组织器官为外植体,采用不同配方的培养基培养,研究影响外植体诱导分化、增殖和生根的因素,筛选获得最佳培养基。【结果】外植体采用茎尖优于叶轴、叶片,茎尖接种于MS+1.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA,萌芽率为100%,MS+3.0mg/L 6-BA+0.30mg/L NAA最适用于继代增殖培养,1/2MS+2.0mg/L IBA+0.2mg/L NAA最合适生根培养。【结论】选取合适的外植体,采用适宜的培养条件和培养基,可以有效地进行红芽大戟的组培快繁。     

金边瑞香花瓣的愈伤组织诱导和植株再生研究

以金边瑞香的花蕾作为外植体,接种于MS附加不同种类外源激素及其浓度配比的培养基中。结果表明:MS 6-BA2.00mg.L-1 IAA0.10mg.L-1愈伤组织诱导率最高,达85.1%;MS Zeatin1.00mg.L-1 6-BA0.10mg.L-1愈伤组织的分化率最高,达97.5%;MS IBA1.00mg.L-1有利于生根,生根率达89.2%,且试管苗生长健壮.