斜带石斑鱼亲鱼强化培育及自然产卵研究

通过对斜带石斑鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ ｃｏｉｏｉｄｅｓ）亲鱼进行强化培育,使其达到自然产卵的目的。强化培育的３批亲鱼（共９１尾）在７７ｄ里共产卵１２０天次,产卵量达２６２７６．８万粒,其中上浮卵１８４５２．９万粒,上浮卵率为７０．２％,上浮卵的受精率为９２．５％。另外,斜带石斑鱼的产卵与水温的关系密切,最适的产卵水温在２４～２７℃之间。     

斜带石斑仔鱼不同饵料的营养分析及其对生长和鱼体脂肪酸组成的影响

对斜带石斑鱼Epinephelus coioides仔鱼投喂了不同的饵料(微颗粒饲料,用海水小球藻培养的生物饵料,用小球藻培养后用胶囊强化剂强化的生物饵料),在25 d后结束取样测量体质量、体长等,并分析了各种饵料和鱼体的脂肪酸组成.研究表明,用海水小球藻培养的生物饵料都含有较丰富的EPA,但缺乏DHA,使仔鱼的生长、成活和鱼体DHA较低;而经胶囊强化剂强化后的饵料提高了其中的DHA含量,使仔鱼的生长、成活和鱼体DHA均有所提高.鱼体脂肪酸组成受到饵料脂肪酸组成的较大影响,同时提示了仔鱼DHA不能由自身合成,DHA对仔鱼的生产、成活具有很重要的影响.     

斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白的原核表达与纯化

将含有斜带石斑鱼Epinephelus coioides神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因的重组表达质粒载体pET32a-MCP转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,证实了重组大肠杆菌融合表达了斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白.表达的融合蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在,提取的包涵体中融合蛋白含量占60%以上,经柱层析纯化蛋白,纯化度达90%以上.     

斜带石斑鱼神经坏死病毒基因组RNA1和RNA2序列测定及分析

根据GenBank数据库公布的鱼类神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV)同源序列设计了7对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出目的片断,将PCR产物测序和分析.斜带石斑鱼Epinephelus coioides神经坏死病毒(orange-spotted NNV,OGNNV)基因组由两个片断(RNA1和RNA2)组成,RNA1由3 103个核苷酸组成,含有一个开放阅读框,编码982个氨基酸;RNA2由1 433个核苷酸组成,含有一个开放阅读框,编码338个氨基酸.OGNNV基因组与新加坡GGNNV(greasy grouper NNV)的基因组有高度的相似性.分析病毒的RNA2序列发现:OGNNV与DGNNV(dragon grouper NNV)、RGNNV(redspotted NNV)和GGNNV的亲缘关系很近,并且具有相同的中和位点;分析病毒的RNA1序列,发现在OGNNV的RNA1序列中同样可以找到依赖RNA的RNA聚合酶的6个模序(motif).根据同源性比较和系统进化分析,OGNNV属于RGNNV血清型的成员.     

斜带石斑鱼转化生长因子β1（TGF β1）基因的克隆及表达分析

  转化生长因子β1（TGF β1）是一种高度保守的多效细胞因子。通过分子克隆得到了斜带石斑鱼Epinephelus coioidesTGF β1 cDNA全长序列,全长为2 477 bp,开放阅读框为1 161 bp,编码一种含386个氨基酸的多肽。Realtime PCR分析表明,TGF β1基因在健康斜带石斑鱼所取组织中均有表达,肾脏中表达最高,其次是头肾和脾脏。用PolyI:C或ConA刺激斜带石斑鱼头肾淋巴细胞,TGF β1表达量明显上升,且在刺激4 h后达到最高值。用PolyI:C刺激16、24 h后,TGF β1几乎不表达,而用ConA刺激实验组,TGF β1表达量一直高于对照组。结果说明,斜带石斑鱼TGF β1基因结构和表达特征与其他硬骨鱼类具有高度相似性。     

斜带石斑鱼仔稚鱼生长和摄食的研究

于2003~2004年对人工培育的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)仔鱼、稚鱼和幼鱼的生长和摄食进行了研究.在水温28.5~31.0℃,盐度31.4~34.3条件下,初孵仔鱼经39 d培育变态为幼鱼.全长(L/mm)与日龄(D/d)的关系式为L=2.039 8e0.076 7D;体质量(M/mg)与日龄(D/d)的关系式为M=0.065 8e0.252 8D;全长(L/mm)和体质量(M/mg)的关系式为M=0.006 5L3.267 3.对170尾仔、稚、幼鱼的解剖观察结果表明,摄食率达95.88%,饱食率达77.65%.饱食量(F/mg)与体质量(M/mg)呈直线相关,F=0.043 3M-0.003 9,大多数仔稚鱼在30 min内可以饱食.仔鱼对轮虫的消化时间为1~2 h,稚鱼对卤虫无节幼体和桡足类的消化时间分别为1.5~3 h和2~4 h.斜带石斑鱼仔稚鱼的摄食强度具有明显的昼夜节律性,仔鱼白天摄食、晚上不摄食,前期仔鱼在8:00和18:00摄食量较大,后期仔鱼在8:00和16:00摄食量较大,稚鱼昼夜均摄食,摄食高峰期出现在中午12:00.     

斜带石斑鱼染色体核型分析

采用PHA、秋水仙碱腹腔注射，肾细胞直接制片法分析了斜带石斑鱼染色体核型。结果表明，斜带石斑鱼核型为：2n=48=2sm 46t,臂数：NF=50．     

斜带石斑鱼受精卵及仔稚鱼生理生态学的研究进展

综述了近年来国内外在斜带石斑鱼受精卵及仔稚鱼的发育、仔稚鱼对理化环境的耐受性及摄饵机制等方面的研究进展,并对今后斜带石斑鱼的发展前景提出了几点建议．     

赤点石斑鱼♂与斜带石斑鱼♀杂交的初步研究

叙述了4批赤点石斑鱼♂与斜带石斑鱼♀杂交的初步结果。用人工授精的方法可以取得杂交受精卵,受精卵的受精率、孵化率和仔鱼的畸形率与雌鱼的卵质有关;杂交组与对照组的斜带石斑鱼相比,受精率、孵化率和畸形率无显著差异,但发育速度较快;杂交组仔鱼与对照组仔鱼在孵化后11 d内的生长速度差异不显著,但12 d后杂交组仔鱼增长显著;杂交组仔鱼的不投饵活力系数SAI和育苗成活率较对照组显著高,初步表现出杂交的优势。     

斜带石斑鱼消化器官的蛋白酶和淀粉酶活力变化

在广东阳江闸坡网箱养殖区,采集不同生长阶段的斜带石斑鱼样品,体重20～500 g。采用酶学分析方法研究了斜带石斑鱼胃,幽门盲囊、肠、肝胰脏蛋白酶和淀粉酶的活力。结果表明,30℃养殖水温下,各部分蛋白酶活力为幽门盲囊>胃>肠>肝胰脏,淀粉酶活力为肝胰脏>幽门盲囊>肠>胃。在斜带石斑鱼发育进程中,300 g前蛋白酶活力呈上升趋势,350 g前淀粉酶活力呈上升趋势。胃、幽门盲囊、肠、肝胰脏蛋白酶活力的最适温度和pH依次为40℃和3.0,40℃和8.0,50℃和8.0,50℃和7.0,胃、幽门盲囊、肠、肝胰脏淀粉酶活力的最适温度和pH依次为40℃和5.0,40℃和8.0,50℃和8.0,50℃和7.0。     

冰鲜杂鱼与颗粒饲料对斜带石斑鱼的对比饲养效果

选择冰鲜杂鱼和2个市场反映较好的石斑鱼配合饲料产品,分别对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)进行饲喂效果实验,通过生长性能、体成分、群体离散度以及养殖成本分析,评价冰鲜杂鱼和配合颗粒饲料在斜带石斑鱼养殖效果上的优劣.同一批培育的斜带石斑鱼幼鱼,随机分成3组(冰鲜杂鱼组、石斑鱼颗粒饲料1组和石斑鱼颗粒...     

不同培水方式对斜带石斑鱼育苗池中浮游生物群落的影响

 斜带石斑鱼在中国的养殖主要位于南方,养殖规模仍不及其他海水养殖鱼类,如卵形鲳鲹、海鲈、军曹鱼等。苗种培育成活率低是造成斜带石斑鱼养殖业发展滞后的主要“瓶颈”之一,这与石斑鱼仔鱼开口期缺乏适宜的生物饵料有关,尤其是浮游动物的缺乏。为此,文中设计了4种不同培水方式,研究其对斜带石斑鱼育苗池中浮游生物群落的影响。方式1中分别添加益生菌、虾片40 mL·m^-3和4 g·m^-3（组1）,方式2中分别添加益生菌、虾片80 mL·m^-3和8 g·m^-3（组2）,方式3中添加小球藻液2.5 L·m^-3（组3）,方式4中添加小球藻液5 L·m^-3（组4）。每组设3个重复。育苗池规格2.5 m ×4.0 m×1.1 m（宽×长×高）。结果表明,组1和组2中浮游植物、浮游动物种类数高于组3和组4。益生菌和虾片的添加可显著提高育苗池中浮游植物及浮游动物密度。整个育苗过程中。组2所含浮游动物密度维持在较高水平(1.3 × 10.5~2.1 × 10.5 ind·L^-1),组1和组2中浮游动物密度要显著高于组3和组4(P≤0.05)。从实验中可看出石斑鱼育苗池中添加一定量的益生菌和虾片,可获得较丰富的浮游动物群落,为石斑鱼仔稚鱼生长提供活饵料。     

斜带石斑鱼雌鱼卵巢发育与血清性类固醇激素的生殖周期变化

斜带石斑鱼Epinephelus caioides卵母细胞发育可分为6个时相，以卵母细胞在卵巢中组成的差异可以把卵巢发育划分为相应6个时期。测定了成熟雌鱼血清中雌二醇和睾酮含量的生殖周期变化，在生殖季节成熟雌鱼血清中雌二醇和睾酮含量最高。生殖季节成熟雌鱼的平均性腺成熟系数GSI显著高于其它月份，并且血清性类固醇激素水平的季节变化与性腺成熟系数的变化基本一致，都是在生殖季节达到最高峰。     

斜带石斑β-珠蛋白cDNA的克隆和序列分析

从斜带石斑EpinephelusCoioides白细胞cDNA库随机挑取噬菌斑，做为模板，用λTriplEx5'3'长距离插入子筛选引物，进行插入片断的PCR扩增，并进行表达序列探针（ESTs)测定。从中克隆到了血红蛋白β亚基cDNA,cDNA包含长达444bp的开放阅读框，编码147个氨基酸的多肽。用www.expasy.ch网站的compute pI/MW程序计算其可能的相对分子质量为16544，等电点为6.95。其氨基酸序列与草鱼β-珠蛋白Ⅲ的同源性最高，为73.0%。在远端和近端的与血红素结合的组氨酸都是保守的，另外，与其它鱼类及蛙，鸡和人的β-珠蛋白比较，在血红素结合区及亚基结合区的氨基酸残基均是高度保守的。     

甲状腺素和生长激素与斜带石斑鱼早期个体发育的关系

采用放射免疫法测定了斜带石斑鱼卵、胚胎及仔鱼组织的三碘甲腺原氨酸(T3)水平。斜带石斑鱼未受精卵中含有较高的T3水平，达每克体质量2，75ng，于开口期升至每克体质量6.28ng，之后保持在较低水平。用T3浸泡处理4～5周仔鱼，当T3浓度达到10^-8mol／L以上时，外源T3才能引起组织T3水平增加；10^-8mol/L的作用比10^-7mol/L的作用弱，浸泡24h所引起的T3增加幅度明显高于72h；对4周仔鱼的影响明显强于5周仔鱼。这些结果证实了斜带石斑鱼卵中存在母源T3，其自身内分泌腺的分化可能始于孵化期或开口期，处于变态后期的仔鱼已具有一定的调节组织甲状腺素水平的能力。外源T3能影响4--5周仔鱼组织L水平的最低浓度为10^-8mol／L,浸泡2，4h对发育早期的仔鱼作用较强。用RT-PCR检测了斜带石斑鱼卵、胚胎及仔鱼生长激素(growth hormone，GH)mRNA的表达情况，表明未受精卵中有较高水平的GH mRNA表达，受精卵至囊胚期胚胎的GH mRNA表达水平较低，原肠期以后，胚胎GH mRNA的表达量明显增加，进一步证明硬骨鱼从受精卵开始就存在GH mRNA的表达，并在自身内分泌腺分化之前参与鱼类早期发育的调节。总之，斜带石斑鱼的早期发育受甲状腺素和生长激素的共同调节。     

斜带石斑鱼白细胞介素8基因的克隆与表达分析

为了研究斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)白细胞介素8(IL-8)的结构和功能,本实验对其基因序列进行了克隆和分析. 运用RACE-PCR方法,从斜带石斑鱼总RNA反转录cDNA库中获得了961 bp 长的cDNA全序列. 同时利用RT-PCR 技术,检测了微壁溶球菌诱导前后该基因在斜带石斑鱼体内不同组织之间的表达差异. 结果表明,斜带石斑鱼IL-8cDNA序列包含235 bp 的5′非编码区,438 bp的3′端非编码区和288 bp 的开放阅读框,编码95个氨基酸. 未诱导前,斜带石斑鱼IL-8基因主要在心、头肾、脾和肝脏中表达,在鳃和肠中量表达,在胃、肌和皮中几乎没有表达;诱导后,IL-8基因强烈表达于所有取样器官. 所获得的斜带石斑鱼IL-8基因是一种与炎症作用有关的CXC亚族趋化性因子.