木瓜蛋白酶的原位固定化及理化性质研究

以氨基载体原位固定化PEG相中的木瓜蛋白酶,获得了高固定化率(95.9%)和酶活回收率(38.9%)的固定化木瓜蛋白酶,解决了双水相分离纯化后成相聚合物和目的蛋白难以分离的问题。固定化木瓜蛋白酶的最适pH在7.0左右,最适温度处于60～70 ℃之间。相比游离木瓜蛋白酶,在广泛的pH区间内(3.0～9.0)固定化酶稳定性都较好,热稳定性也有改善。在4 ℃密闭容器内将固定化木瓜蛋白酶以湿润状态保存可以较好地保留其活性。LH-HA固定化木瓜蛋白酶可以特异性地水解单克隆抗体IgG,制备Fab和Fc片段。     

蚯蚓纤溶酶的分离及其生物学特性

经过分离纯化，从人工养殖的赤子爱胜蚓中提取出两种既有纤维蛋白溶酶原激活因子活性又能直接溶解纤维蛋白的组分。ＰＡＧＥ检测各为一条区带，证明已达电泳纯。对这两组分的生物学性质进行了研究，包括分子量、酶活力，Ｎ－末端氨基酸残基，氨基酸组成，温度的稳定性及对苯甲酸精氨酸乙酯（ＢＡＥＥ）的酶促反应动力学特性。还分析了其中一个组分（ＢⅡ）从Ｎ末端开始的 ２５个氨基酸残基序列。     

蛋白双酶（胰蛋白酶—木瓜蛋白酶）的固定化研究

以脱乙酰壳多糖为载体、戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的固定化条件及固定化双酶的动力学性质进行了研究。实验对比了交联剂的用量、交联的ＰＨ值、温度及载体与酶的比例等因素对固定化的影响。     

固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质

用固定化单宁通过吸附法制备固定化木瓜蛋白酶,研究了固定化的条件和固定化酶的性质、在200毫克固定化单宁加入200单位木瓜蛋白酶、5℃,pH8.5的条件下进行固定化,固定化木瓜蛋白酶活力可达260单位/克固定化酶(湿重)。固定化酶和自然酶的最适pH及最适温度相同,分别为pH6及75℃;但固定化酶的温度及贮存稳定性明显优于自然酶。在室温下用其连续澄清啤酒,使用半衰期为8天。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

限制性核酸内切酶Bsp63I的部分性质研究及与其同工酶的比较

纯化至电脉均一纯的限制性核酸内切酶Bsp63I经SephadexG-200测得相对分子质量约为113800,SDS－聚丙烯酰凝胶电泳测得其亚基相对分子质量约为56800,用DNS法测得该酶N－末端氨基酸为丙氨酸,表明该酶由2个相同的亚基组成,还对Bsp63I和它的同工酶PstI和Bsp78I之性质进行了比较。     

以卵清蛋白为载体的固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质

以变性的卵清蛋白为载体, 用戊二醛为交联剂固定木瓜蛋白酶. 通过正交实验考察了固定化pH值、 交联剂戊二醛浓度、 交联时间和酶用量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响,确定了最适固定化条件： 5%戊二醛, pH 6.0, 交联时间20 h, 每克载体含酶量12 mg. 对比研究了游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶的性质, 所得到的固定化木瓜蛋白酶最适温度90 ℃, 最适pH 9.0, 米氏常数53.6　mg/mＬ, 其热稳定性及耐热性均较游离酶显著提高.     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

椰果内生枯草芽孢杆菌YZ-21产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

[目的]分离纯化来源于内生枯草芽孢杆菌YZ-21的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质.[方法]采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系进行分离与纯化,在此基础研究它的酶学性质.[结果]比较3种纯化方法,最优方法为双水相萃取法,在双水相体系为16%(NH_4)_2SO_4、18%PEG2000、2%NaCl条件下,纯化倍数最高可以达到3.06,酶回收率达到99.26%;酶学性质研究表明,β-甘露聚糖酶的最适反应pH为7.0,最适的反应温度是40℃,pH稳定性在3.0～7.0,热稳定范围在35～55℃之间;Ca~(2+),Ba~(2+),Mg~(2+),K~+,Co~(2+)对酶都有激活作用,而Ca~(2+)激活作用最强,Cu~(2+),Na~+,Zn~(2+),Mn~(2+),EDTA对酶有抑制作用.[结论]利用双水相萃取法较好纯化了β-甘露聚糖酶,酶学性质良好,可以广泛应用于饲料添加剂、纸浆漂白和食品加工等领域.     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

酪蛋白糖巨肽酶解物的二肽基肽酶-4抑制作用

为探讨酪蛋白糖巨肽(GMP)酶解物的二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制作用,选择木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别酶解GMP获得糖巨肽酶解物,选择甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物的发色底物法检测DPP-4活性.结果表明,GMP酶解物的DPP-4抑制效果优于GMP本身,并且随酶解时间的延长酶解物DPP-4抑制作用逐渐增加,其中GMP木瓜蛋白酶解物对DPP-4抑制效果最好,GMP木瓜蛋白酶酶解物作为DPP-4抑制剂具有潜在应用价值.     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

木瓜蛋白酶应用开发的性质研究

实验研究了ｐＨ值、温度、激活剂（ＥＤＴＡ,Ｃｙｓ）、金属阳离子（Ｋ＋,Ｎａ＋,Ｍｇ２＋,Ｃａ２＋）、去垢剂（ＳＤＳ,ＣＨＡＰＳ,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）以及贮存时间和贮存温度对木瓜蛋白酶活力的影响。结果表明,木瓜蛋白酶具有耐高温、活性强、稳定性好等特征,能耐受一定ｐＨ值和温度变化,对金属离子及去垢剂不敏感。     

复酶水解鹅血工艺条件的优化

研究了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鹅血液的水解作用,并分析了酶用量、温度、时间、pH值等因素对鹅血酶水解的影响。结果表明,双酶水解效果较好,确定了其最适宜的酶解条件：中性蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为4000U／g,pH值为7．0,温度为55℃,时间为5h;木瓜蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为6000U／g,pH值为7．5,温度为50℃,时间为4h。     

无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较

比较了无花果蛋白酶和木瓜蛋白酶的部分酶学性质, 二者均为巯基蛋白酶类, 且水解底物相似. 实验结果表明, 无花果蛋白酶比木瓜蛋白酶的适用性更广, 两者在反应温度范围上各有优点, 无花果蛋白酶的适宜pH值范围大于木瓜蛋白酶的适宜pH值范围; 在对底物的亲合性上, 无花果蛋白酶明显高于木瓜蛋白酶.     

氯化钙、生姜和木瓜蛋白酶对牛肉嫩化效果的研究

采用正交试验方法和感官评定方法来优化和评价氯化钙溶液注射、生姜汁注射、木瓜蛋白酶溶液注射对牛肉嫩度等的影响.试验结果表明:氯化钙溶液的浓度和注射量、生姜汁的注射量、木瓜蛋白酶溶液的浓度和处理时间显著影响牛肉的嫩度(P<0.05).在这3种牛肉嫩化方法中,木瓜蛋白酶溶液注射的嫩化效果最好.     

淫羊藿多糖的酶法除蛋白工艺研究

采用木瓜蛋白酶法去除淫羊藿（Epimedium brevicornum M．）多糖提取物中的蛋白成分,以蛋白去除率和多糖损失率为指标,考察了酶用量、温度、pH及酶解时间对除蛋白效果的影响。酶法除蛋白适宜工艺条件为：木瓜蛋白酶液占底物料液体积的10％,温度55℃,pH6．0,酶解1h。木瓜蛋白酶法可作为淫羊藿多糖的除蛋白方法,蛋白去除率可达90％,同时多糖损失率为16％。