pACT E3质粒的构建及其在转基因烟草中的表达

将1个从棉花中分离的新的启动子ACT E3插入质粒pBI101,ACT E3与GUS基因融合，构建成pACT E3表达载体。通过农杆菌介导转化法将ACT E3/GUS融合基因导入烟草。GUS组织化学染色分析表明，在ACT E3启动子控制下，GUS基因仅在叶片及茎等组织中特异表达。     

拟南芥器官大小调控基因AtKIX8启动子的克隆和表达分析

为研究拟南芥器官大小调控基因AtKIX8的表达模式,以期进一步研究其功能机制,克隆了该基因启动子序列,获取了启动子-GUS转基因报告植株.利用GUS组织化学染色检测了该启动子作用位置,利用荧光定量PCR分析了启动子对外源激素及冷胁迫的响应.结果表明该启动子诱导GUS基因在幼苗茎尖分生区,成株茎、叶主脉中特异性表达,生长素和低温处理显著提高GUS基因的表达量.说明拟南芥AtKIX8基因启动子具备组织特异性表达模式,且能受到外源生长素和低温的诱导.     

一个水稻花发育特异性启动子的克隆与活性分析

用PCR方法从水稻中克隆了EXPANSIN家族基因OsEXPB1的启动子,利用PLACE软件在线分析其上游2.7kb的序列,发现存在2种与花粉特异性表达有关的顺式作用元件.将该启动子与GUS报告基因融合,构建重组表达载体并转移到水稻中,对水稻各组织进行GUS染色.结果显示:水稻幼嫩组织中均有GUS染色信号;进入生殖生长期后,在营养组织中均没有检测到GUS的表达;只在花器官中检测到GUS信号,在花发育晚期,GUS信号则主要出现在花粉粒中.荧光实时定量PCR进一步验证了GUS染色的结果.综上所述,在水稻成熟植株中,OsEXPB1启动子是一个花发育特异性启动子,可为利用水稻生殖生长期的花特异性表达启动子来进行转基因实验提供备选.     

农杆菌介导的中国水仙遗传转化体系的建立

利用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入中国水仙,组织化学法检测转化后共培养3d的水仙鳞茎盘组织块,GUS基因瞬时表达很好,90％以上的材料呈现大面积的蓝色斑块,取筛选培养20d的材料检测GUS基因的稳定表达,约1％的组织块有蓝色反应。水仙预培养10d后转化,转化前在菌液中加入60μmol/L AS活化2－3h,转化率提高了两倍以上。转化材料在MS＋BA10＋NAA0．2＋Cef300＋Gyg30培养基上培养20d左右分化出小鳞芽,频率约为60％,组织块平均出芽5．7个,最多可达14个,小鳞芽10d后长成小鳞茎。     

拟南芥VHA-c3基因的特异性表达和调节

利用RT-PCR技术检测VHA-c基因在拟南芥中的表达，结果表明VHA-c3基因在拟南芥的果荚、花、叶、茎和根中都有表达，但是，在叶中的表达量远远高于其它的组织.以GUS基因作为报告基因构建了不同长度的VHA-c3基因启动子缺失突变体，利用农杆菌介导的瞬时表达系统检测GUS基因的表达，研究发现在VHA-c3基因起始密码子上游2812-2 234 bp之间的区域內存在着控制VHA-c3基因高表达的转录调控元件.     

tritordeum花粉特异性表达的遗传分析

为明确转基因tritordeum中被外源uidA基因标记的启动子的调控特异性,对筛选到的一株标记材料进行了两代uidA基因的遗传表达分析,结果表明,后代材料基因组中都含有uidA基因,没有发生分离,且都只在花粉中检测到GUS活性,在其他组织没有检测到GUS活性.进一步RT-PCR分析显示uidA基因在根和叶中没有发生转录,说明该株材料为花粉特异性启动子被uidA基因标记的阳性纯合体,实验证明该特异性能稳定遗传.     

利用电击法转化玉米胚性愈伤组织获得GUS基因瞬时表达的研究

作者以成单玉米幼胚经诱导、继代、筛选,获得了可分化的胚性愈伤组织,采用电击转化法,将质粒PBI121导入成单玉米的胚性愈伤组织中,通过组织化学染色法,观察到了GUS基因的瞬时表达,并筛选出对愈伤组织损害轻、GUS表达较强的最适电击条件为：960μF,375V/cm,61ms。     

抗除草剂Bar基因对小麦的遗传转化

作者通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导和基因枪法 ,将含抗除草剂Bar基因的植物表达载体 ,导入小麦幼穗和幼胚愈伤组织 .X Gluc染色检查表达载体中GUS标记基因的瞬时表达 ,并在含有除草剂Basta的培养基上进行多步筛选 .以愈伤组织为单位 ,统计GUS表达阳性频率和转化体的分化频率 .结果表明 :基因枪轰击法的平均转化率高于农杆菌导入法 ;幼穗作为受体的转化率高于幼胚 ;干燥处理有利于提高根癌农杆菌对小麦愈伤受体的浸染力 .     

根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生

用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens转化晋南苜蓿Medicago sativa L.cv.Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达.     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.     

玉米愈伤组织的扫描电镜观察

用扫描电镜观察了玉米愈伤组织在继代周期中的变化及其胚状体发生过程。结果表明,愈伤组织的胚性与表面结构有明显关系。继代半年和一年半的胚性愈伤组织表面结构无显著差异,均可产生大量正常和畸形胚状体。正常胚状体可通过类似合子胚的分化或不规则发育过程而成熟。畸形胚形态多样,其中多数盾片异常。根据观察认为,胚状体一般是多细胞起源的。     

玉米幼胚愈伤组织再生植株的变异

玉米受粉7—10天的幼胚,在含激素的MS培养基上诱导生成愈伤组织,并分化出胚状体,成苗后移栽于温室内,至成熟结实。这些试管苗植株在整个生长发育过程中,出现了雌穗顶生,顶生雌雄同穗,植株矮,叶片少,雌穗着生部位低及轮生叶序和对生叶序等多种显著的差异和变异。     

绿色荧光蛋白基因mgfp4在水稻愈伤组织中的瞬时表达

采用基因枪方法将适用于高等植物的绿色荧光蛋白基因ｍｇｆｐ４转化到水稻愈伤组织之中,获得高效瞬时表达,在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察到强烈绿色荧光。绿色荧光蛋白ｍＧＦＰ４生色团形成迅速,转化４ｈ后就能观察到绿色荧光,并且持续时间较长,２ｄ后才基本消退。     

小麦幼茎组织培养中的植株再生

我们对小麦不同品种的幼穗幼茎在不同发育期,不同培养基上进行了2年的愈伤组织诱导及分化实验,并将幼茎与幼穗作了比较。二棱末期至小花分化期是幼穗及幼茎诱导愈伤组织的最适时期。不同品种对培养基的反应不一。不同时期的幼茎愈伤组织只有来源于二棱末期者能够在分化培养基上分化,其它时期者则不分化。品种间分化率差异较大。幼穗的一块愈伤组织可以分化多个苗,而幼茎的一块愈伤组织只发生一个苗。植株再生是通过器官发生的途径。     

小麦耐盐愈伤组织内源脯氨酸含量和细胞学特征

以小麦幼穗和幼胚为外植体，诱导出愈伤组织，通过在培养基中逐渐增加选择剂（ＮａＣｌ：Ｎａ２ＳＯ４＝４：１）方法，获得耐０．８％至２．０％选择剂的耐盐愈伤组织，其内源脯氨酸含量显著高于相同盐渍条件下的对照组．培养基中选择剂浓度达到１．６％耐盐细胞仍能保持细胞及细胞器正常形态，液泡化程度低，细胞核大，有的细胞中出现二或二个以上核仁．在培养基中选择剂超过１．２％，绝大多数细胞处于坏死或类坏死状态．耐盐愈伤组织在培养基中选择剂不超过２．０％，生长良好，可以再生植株，其后代在０．３％ＮａＣｌ土壤中仍表现耐盐性．     

小麦幼胚愈伤组织诱导及植株再生

选取 2 3个品种 (系 )及 8个杂交组合F1的幼胚作为供试材料 ,取 12～ 16日龄的幼胚接种在附加 2 ,4 -D2 0mg/L和 6 -BA 1 0mg/L的MS培养基上 ,诱导 3～ 5d后所有供试材料都具有愈伤组织。筛选出适宜的继代培养基为 :MS +2 ,4 -D 4 0mg/L +NAA 0 5mg/L +LH 5 0 0mg/L +0 5 %蔗糖 +0 85 %琼脂 ;大穗 2、昌乐 2号、抗锈 2 0 4、品系 38等材料愈伤组织生长较好。植株再生适宜的培养基为 1/2MS +NAA 0 5mg/L +6 -BA0 5mg/L +0 3%蔗糖 +0 85 %琼脂。抗锈 2 0 4、昌乐 2号、优 2 6 5 /昌乐 2号、优 2 6 5 /京选 6号、优 2 6 5 /有芒白 4号等 5个供试材料分化率较高 ;杂交胚与常规品种比较 ,幼苗分化率表现出较强的杂种优势     

不同外植体和激素对银杏愈伤组织诱导和生长的影响

以银杏胚的不同部位子叶、胚芽、胚轴、胚根为外植体,比较不同外源激素和培养条件对银杏愈伤组织诱导和继代培养的影响,结果表明子叶最易诱导愈伤组织,且在暗条件下诱导效果最好,2,4-D和队影响子叶的愈伤诱导能力;以茎段为外植体,发现生长素为茎段愈伤组织诱导所必需,且NAA诱导效果好于2,4-D;以叶片为外植体,发现生长素中的NAA诱导愈伤效果最好,雌雄叶的诱导能力相同.在愈伤组织生长过程中,NAA是子叶和茎段愈伤组织继代培养必需的,BA对茎段愈伤组织生长速.度无显著影响,但可使愈伤组织敛密,并有利于分化.MS 1 mg/LNAA 0.005 mg/LKT(或BA)的培养基对叶片愈伤组织生长最理想,雄叶愈伤生长较快,光照培养促进愈伤组织生长.     

獐毛愈伤组织耐盐性研究及耐盐变异体的筛选

獐毛 (Aeluropuslittoralisvar.sinensis)匍匐茎茎尖来源的原始型愈伤组织 ,测定其耐盐范围为 0 .3 %～ 1 .5% .盐胁迫下 ,脯氨酸及K 、Na 、Ca2 离子在渗透调节中起重要作用 .用直接筛选的方法 ,将原始型愈伤组织放在含 2 %NaCl的选择培养基上连续筛选 ,获得耐盐性进一步提高的愈伤组织耐盐变异体 ,在选择培养基上 ,变异型愈伤组织鲜重相对生长率显著大于原始型愈伤组织 ,在变异型愈伤组织耐盐性提高中 ,脯氨酸及无机离子K 、Na 、Ca2 起重要作用 .耐 2 %NaCl的变异型愈伤组织在无NaCl培养基中培养 1 1代后 ,仍能耐受 2 %NaCl,愈伤组织的耐盐性没有退化 ,说明筛选得到的耐盐变异体不是生理适应性的而是由遗传变异而来的 .     

木槿愈伤组织继代培养在不同培养基上的变化

木槿下胚轴在MS附加2,4-D(0.5mg/l)、激动素(0.1mg/l)和3％蔗糖的培养基(MS_1)上诱导出愈伤组织。将愈伤组织分别转移到不同培养基上,在特定培养基上可以发生根、芽和体细胞胚,并萌发成苗。组织切片观察了胚和器官的形态建成。最后,文中就激素、蔗糖浓度以及愈伤组织类型对形态建成的影响作了讨论。