红树林内生真菌的抗肿瘤活性

从红树植物秋茄、桐花树和白骨壤树皮样品中分离出125株内生真菌。采用MTT法对其体外抗肿瘤活性进行检测,发现11株红树植物内生真菌对KB(人口腔上皮癌)或HL-60(人白血病)细胞具有显著的抑制活性,占总分离菌株的8.8％。秋茄、桐花树和白骨壤的抗肿瘤活性菌株分别占供测菌株的11.6％、5.7％和4.8％。抗肿瘤活性菌株主要分布在拟青霉属及曲霉属。在所分离的菌株中,归属于拟青霉属的活性菌株占供测菌株的比例最高、活性最强。结果显示红树植物内生真菌是潜在的抗肿瘤药物资源。     

红树植物内生真菌的种群动态及生物活性

2003年10月至2004年8月对福建龙海浮宫2种红树植物秋茄、木榄的内生真菌进行连续6次的分离，得到290株内生真菌．研究结果显示，木榄（Bruguiera gymnorrhiza）和秋茄（Kandelia candel）内生真菌数量高峰期分别为4月份和10～R12月份；青霉（Penicillium）、交链孢（Alternaria）、Dothiorella和无孢目是秋茄中的主要优势属；木榄内生真菌主要优势属为头孢霉（Cephalosporium）、交链孢（Alternaria）、青霉（Penicillium）等．不同宿主对内生真菌的季节分布有重要的影响．抗菌测定共筛选得到活性菌株40株，占总菌株数的13．8％；17株内生真菌对KB（人口腔上皮癌）和／或Raji（人B淋巴瘤）细胞具有抑制作用，占总菌株数的5．9％．生物活性菌株分布于青霉、交链孢、拟青霉、无孢目等10个不同的分类单元中，2种宿主植物内生真菌抗菌及抗肿瘤活性均有不同程度的季节差异性．     

海洋木栖真菌抗肿瘤活性及其营养条件的影响

对从厦门海沧及漳州浮宫的红树林生态区分离到的177株海洋木栖真菌用MTT法进行抗肿瘤活性的测定，获得具有抗肿瘤活性的菌株共44株，占总受试菌株的24．9％，其中对KB瘸株有抑制作用的有12株．对Raji瘤株有抑制作用的菌株有43株，对这两种肿瘤细胞均有抑制作用的菌株有11株．并且考察了其中6株海洋木栖真菌在纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉和蔗糖为碳源的生物量和抗肿瘤活性。结果表明海洋木栖真菌在不同营养条件下的菌体生物量及代谢产物的抗肿瘤活性均存在差异，部分菌株在纤维素为碳源时，有最高的生物量和抗肿瘤活性，PDB培养基不宜作为抗肿瘤活性测定或生产发酵的基质．     

博落回内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

从健康博落回植株中分离内生真菌,用PDA培养基分离纯化菌株,结果纯化得到19株内生真菌,用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选,其中有2株博落回内生真菌对指示菌株有抑菌作用,占总分离菌株的10.53%,其中有一株内生真菌具有较强的抑菌活性。     

海藻真菌抗肿瘤活性的初步研究

从福建漳州浯屿岛和漳州浮宫海岸潮问带采集到的10种海藻中分离到66株海藻真菌．采用MTT法对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗肿瘤活性进行检测．发现34株菌株对KB和／或Raji肿瘤细胞具有显著的抑制活性,占供测菌株的52％．其中对KB细胞有抑制作用的菌株有21株．对Raji细胞有抑制作用的菌株有30株．对两种肿瘤细胞均有抑制作用的菌株有17株．分别占活性菌株的62％、88％和50％．实验结果表明,海藻真菌是潜在的抗肿瘤药物资源．     

海洋真菌杀虫活性的初步研究

对采集自浙江舟山海域底泥、福建省九龙江口红树林及福建省云霄县红树林共188株海洋真菌代谢产物的杀小杆线虫（Rhabditis sp．）和卤虫（brineshrimp）活性进行初步研究．筛选出#164菌株代谢产物对小杆线虫显示了较好的杀害活性，其LC90小于0．5mg／mL．#122菌株代谢产物对卤虫显示了较强的麻痹效应．#305菌株代谢产物对卤虫的LG。仅为75μg／mL．此外，对188株海洋真菌代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究．筛选出#229菌株代谢产物和#170菌株代谢产物具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,IC50分别为30／μg／mL和25／μg／mL．这些活性菌株具有产生杀线虫剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂的特性．     

南蛇藤果中内生真菌的抑菌活性研究

对从南蛇藤果实中分离的16株内生真菌用马铃薯葡萄糖培养基进行液体培养，将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌，菌丝体晾干研磨后用丙酮提取．用发酵处理液和丙酮粗提物对一些常见的植物病原菌进行抑菌活性测定．结果表明，发酵产物的抑菌率在50％以上的活性菌株有13株（占81．2％）．说明南蛇藤内生真菌中的抗病原真菌资源十分丰富，其中抑菌活性最强的发酵处理液的抑菌率高达90．5％，菌丝粗提物的抑菌率达89．2％，但活性菌株的抗菌谱比较狭窄．     

海洋真菌抗肿瘤活性菌株的筛选

采用MTT法,对从厦门海域红树植物、晒盐场土壤、海藻和海洋沉积物样品中分离到的231株海洋真菌的体外抗肿瘤活性进行筛选. 结果显示,有24株菌具有体外抗肿瘤活性,占总供测菌株的10.4%,其中对HeLa细胞有抑制作用的有15株,对HepG-2细胞有抑制作用的菌株有8株,对BGC细胞有抑制作用的菌株有12株. 选择对肿瘤细胞具有较强抑制作用的10株菌株进一步测定其培养物提取物对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50),发现JSSa-2,JQGa-6f和hzl02a-1株菌的活性很强, IC50分别为0.38,0.18,0.29 μg/mL. 实验结果表明,海洋真菌是潜在的抗肿瘤药物资源.     

用卤虫和A549癌细胞筛选内生真菌抗癌活性的对比分析

抗癌药物是药物筛选的热点之一,简便快捷的初筛模型是药物发现的重要手段.一些研究报告认为卤虫模型可以作为抗癌药物的初筛模型.为了验证这一方法,以MTT法(人癌细胞A549细胞株)和卤虫模型分别对85株鬼臼类植物内生真菌发酵液进行了测定.通过对比分析,发现人癌细胞模型和卤虫模型测定所得到的结果差异很大,两组数据之间没有相关性.用卤虫测定鬼臼类植物内生真菌得到的毒性实验结果是不能代替用人癌细胞测定所得到的结果.     

麻黄内生真菌的分离及其生物活性初步研究

从内蒙古赤峰等地的中草药麻黄中分离得到141株内生真菌,体外抗氧化、抗肿瘤等活性测定表明,有11株内生真菌对H2O2具有较好的清除活性(LD50均大于50,LD50为抑制率为50%时的样品稀释倍数),占菌株总数的7.80%;有27株内生真菌对Raji和HepG-2具有肿瘤细胞毒活性(LD50大于50),占菌株总数的19.15%,其中以抑制悬浮Rajii细胞为主.此外,在141株菌中,有74株对一种或二种以上的指示菌显示出抑菌活性,占菌株总数的52.48%.本实验结果表明,麻黄中含有丰富的内生真菌,是抗氧化、抗菌及抗肿瘤等活性物质的重要来源.为进一步从中草药植物中分离筛选新药先导化合物提供了科学依据.     

元宝山中山针阔叶混交林林窗特征及更新研究

元宝山中山针阔叶混交林以小林窗居多,林冠林窗中面积5~30m2的林窗所占面积比为39.3%,扩展林窗中面积50~100m2的林窗所占面积比达51.8%。林窗形成方式以折干和根拔倒为主,分别占形成木总数的50.0%和31.3%,冬季积雪积冰和强劲的风力是林窗形成的主要外部驱动力。林窗形成木的种类主要是包果石栎(Lithocarpus cleistocarpus)、褐叶青冈(Cyclobalanopsis stewardiana)、南方红豆杉(Taxus wallichianavar.mairei)、马蹄参(Diplopanax stachyanthus)等树种。林窗内的幼苗密度高于林冠下。乔木上层优势树种的幼苗更新情况各异,元宝山冷杉幼苗在林窗和林冠下都更新良好,南方红豆杉林窗更新较为显著,南方铁杉表现为较明显的林冠下更新。     

两种针叶类珍稀植物扦插繁殖技术研究

以针叶类珍稀植物粗榧和南方红豆杉的半木质化硬枝为试验材料,对其扦插繁殖技术进行了研究。结果表明:生根剂GGR对粗榧和南方红豆杉均适用,其扦插效果优于IBA;扦插基质选腐殖土为宜,生根效果优于珍珠岩;生根剂浓度以100 mg/L为宜,粗榧插穗经GGR 100 mg/L处理后在腐殖土中生根率达到了75.68%,红豆杉插穗经GGR 100 mg/L处理后在腐殖土中生根率达到了77.55%。     

香蕉内生真菌、放线菌类群分析

采用内生菌分离法对华南种植的健康香蕉根、叶内生真菌、内生放线菌进行分离研究表明：叶内部的内生真菌主要为盘长孢刺盘孢菌物Colletotrichum gloeosporioides占60.77％；而根内部曲霉Aspergillus spp. ，青霉Penicillium spp.，拟青霉Pacecilomyces spp.的分离频率较高，共占70．4％。在根、叶内生放线菌中灰红紫类群链霉菌分离频率最高，分别占65.2％与78．2％；在整个植株中玫瑰浅灰链霉菌Streptomyces roseogriseolus的分离频率最高(占57．7％)，叶中该种链霉菌占69.0％，根中占43．5％。对峙实验表明：内生真菌在体外对香蕉枯萎病的病原菌(尖孢镰刀菌香蕉专化型)不显示明显的拮抗作用而内生放线菌则显示明显的拮抗活性，玫瑰浅灰链霉菌中有42．5％的菌株显示拮抗作用，该种链霉菌在提高香蕉植株对香蕉枯萎病的抗性中的作用值得重视。     

南方红豆杉紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列的克隆和进化分析

 从南方红豆杉Taxus wallichiana var.mairei的新鲜嫩叶中提取基因组DNA作为模板，利用三组特异引物进行PCR扩增，然后克隆测序得到紫杉烷7β-羟基化酶的基因全长。该基因编码区起始密码子为ATG，终止密码子为TGA，全长1 692 bp；碱基组成为490 A (29.0%)，351 C (20.7%)，362 G (21.4%)和489 T (28.9%)。将紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列与细胞色素P450基因家族的其它三个成员进行比对，发现它与紫杉烷2α-羟基化酶基因、紫杉烷10β-羟基化酶基因及紫杉烷13α-羟基化酶基因的一致性分别为74%、68%及76%。它们的外显子和内含子的连接区均具保守的GT-AG结构，内含子区的变异性明显高于外显子区。进一步以红豆杉属的13个紫杉烷羟基化酶基因家族成员为对象，利用位点间可变ω(非同义替换率dN和同义替换率dS的比值) 模型对该基因家族的适应性进化进行分析。分支模型、位点模型以及分支－位点模型的分析表明：紫杉烷羟基化酶基因家族的少数分支处于正选择压力下(ω>1)，但未检测到正选择位点；而绝大部分位点受强烈的负选择作用(ω<1)。     

一株产紫杉醇的红豆杉内生真菌的分离鉴定

用组织研磨涂布法对中国红豆杉中产紫杉醇的内生真菌进行分离,得到45株内生真菌;通过形态学和分子生物学手段对一株产紫杉醇的菌株Tax-4进行鉴定,其结果为黑团壳属(Massaria)。表明从中国红豆杉中分离得到了一株产紫杉醇的黑团壳属内生真菌,丰富了产紫杉醇内生真菌的资源。     

RAPD技术在罗汉松性别辨别中的应用

部分植物（包括不少濒危物种）是雌雄异株，且在非花期仅凭形态学特征难以辨别其性别；这给品种改良、植物保护工作都带来了麻烦，以罗汉松（Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don)、短叶罗汉松（Podocar、pus macrophyllus Var.maki Endl）为具体实验材料，就RAPD技术在植物性别判断方面进行了尝试，在筛选了340种随机引物后，发现其中23种引物的产物有良性的多态性；最终筛选到了可以扩增出与性别相关的特异性条带的引物P20，在这基础上对表现出多态性的RAPD产物进行了UPGMA聚类分析，观察到各样本在遗传多态性上，性别间的差异大于变种与原种间的差异，同时还对单引物、双引物的RAPD结果进行了对比。     

水稻内生真菌类群分析及其颉抗病原菌活性研究

采用常规方法对广东省番禺和五山两地种植的水稻内生真菌进行分离、鉴定和比较分析,结果表明两地水稻内生真菌的优势菌群为镰刀菌Fusarium spp..同一地区从感病品种和生长不良水稻植株中分离出内生真菌种类相对丰富.水稻根和茎叶中分离出内生真菌的种类有差异,叶片中内生真菌的多样性高于根部,一些内生真菌的分布呈现出器官特异性.通过平板颉抗试验,发现分离到的内生真菌中有41.2%表现出不同程度的抗水稻病原菌活性,其中镰刀菌Fusarium spp.的比例最大.一些内生真菌的抗病原菌活性与产生铁载体有关.     

大戟科4种植物内生真菌分离与抑菌研究

对大戟科4种药用植物大戟、泽漆、乌桕、重阳木内生真菌进行分离鉴定,并检测其抑菌活性。结果表明:4种植物均含有内生菌,乌桕中获得13株内生菌,鉴定12株,分别属于丝核菌属、小菌核菌属、拟盘多毛孢属、小单头孢属、毛壳菌属、壳小圆孢属、棒盘孢属、交链孢属;京大戟中获得9株内生菌,鉴定8株,分别属于镰刀菌和交链孢属;泽漆中获得6株内生菌,鉴定4株,属于交链孢属;重阳木中获得15株内生菌,鉴定了4株,分别属于小穴壳属、壳小圆孢属、拟茎点霉属。茎中均有内生菌,种子和重阳木叶中均未分离到。总计43株内生菌中有11株有稳定的抑菌活性,占总菌株的25.58%,有12株有不稳定的抑菌活性,占27.91%。用绿豆发芽试验检验表明,仅有1株菌在绿豆幼苗上形成病斑,其余均生长良好,且21株表现出对绿豆芽的促进作用。