OsCHX1基因克隆及转基因植株获得

利用RT-PCR扩增水稻的Na 、K 、/H 反向转运蛋白(OsCHXl)基因全序列,将其与35S启动子连接后,插入到pl301中,构建植物过量表达载体pl301-35S-OsCHXl-NOS.将该质粒转化农杆菌EHA105,并对水稻愈伤组织进行转化,获得了再生植株.对再生植株进行GUS和PCR鉴定,发现超过85%的再生植株为阳性植株.此研究结果为进一步探讨OsCHX1基因功能提供了实验材料.     

一个NBS-LRR蛋白质基因转化水稻及其超量表达

水稻Osxoc1334是一个编码NBS-LRR类蛋白质的基因,通过构建该基因的超量表达载体,并在农杆菌EHA105介导下转化中花11号水稻,最终获得6株再生水稻植株.对抗性愈伤组织和再生植株用GUS组织化学染色检测,结果抗性愈伤组织和6株再生水稻植株均可染上蓝色,而野生型植株不变色,用潮霉素磷酸转移酶基因的特异引物进行PCR鉴定,再生植株均可扩增到目标条带而野生型植株则不能,表明Osxoc1334基因已随T-DNA整合到再生水稻植株基因组中.采用半定量和荧光定量PCR分析转基因水稻的Osxoc1334基因表达,结果其中3株转基因植株的Osxoc1334基因平均相对表达量明显增强,其中1株为野生型植株的23.5倍.这为进一步鉴定该基因功能奠定了基础.     

银合欢壳多糖酶在转基因Khao Da wk Mali 105籼稻中的表达(英文)

通过含有pCAMBIA1300载体(抗潮霉素基因(hpt)作为选择标记基因)的根癌农杆菌菌株EHA105的介导,将326个银合欢I型碱性壳多糖酶基因(KB3,GenBank登录号为:AAM49597)的氨基酸导入到籼稻Khao Dawk Mali 105(KDML 105)植株中,获得了KDML 105籼稻的愈伤组织。pCAMBIA1300载体包含有CaMV35S启动子、银合欢壳多糖酶基因和NOS终止子。在NB培养基的水稻秧苗中愈伤组织的转化率为94%.在培养温度为28℃,以含有4 mg/l BAP和7 g/l植物凝胶再生培养基的条件下,愈伤组织的再生频率高达80%.为了建立一个KDML 105农杆菌转化方法,考察了各方面的因素。共培养期间,在培养基中添加50μM的乙酰丁香酮对提高瞬时转化率非常重要。4周龄的盾片衍生的愈伤组织是最佳的起始材料。添加40 mg/l潮霉素和400 mg/l头孢霉素的NB培养基是水稻愈伤组织选择性转化的最佳培养基,其转化率达到78%.采用PCR、Northern Blot杂交凝胶、Southern Blot杂交凝胶和GUS分析技术研究了愈伤组织和转基因水稻中的壳多糖酶和gus基因的表达。壳多糖酶和gus基因在水稻的多个部位被检测到,包括愈伤组织、叶、根、茎和秧苗,但是它们在水稻根部的含量较少。抗真菌的水稻壳多糖酶表现出抗串珠镰刀菌的性质。     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点，具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点．本实验通过农杆菌介导的遗传转化．以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜．通过筛选．获得潮霉素抗性愈伤组织。经胚状体再生得到156棵抗性苗．通过GUS染色检测．GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达．并在部分抗性苗中稳定表达．对部分抗性植株进行PCR和PCR—Southern杂交检测．证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中．     

根癌农杆菌介导的绿色荧光蛋白基因在水稻植株中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（EGFP）基因插入到植物表达载体中,构建了ubi启动子驱动下的植物表达载体p13UEGFP．通过根癌农杆菌介导转化水稻的胚性愈伤组织,经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株．对T2代植株进行PCR分析、激光共聚焦显微镜检测和RT—PCR分析,结果表明,绿色荧光蛋白基因已经在转基因植株中稳定表达．     

CMV启动子克隆及其在植物体内的表达

根据细胞肥大病毒CMV启动子基因序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建具有Kan抗性和GUS intron报告基因的植物表达载体LpPCG,并将重组质粒转化到烟草叶片中.通过CMV启动子指导的GUS intron基因在烟草叶片内的瞬时性表达,比较了其植物表达特性.结果表明:CMV启动子可启动GUS在植物体内的表达,其表达活性相当于2×35S启动子的(80.4±26.6)％.     

抗除草剂Bar基因对小麦的遗传转化

作者通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导和基因枪法 ,将含抗除草剂Bar基因的植物表达载体 ,导入小麦幼穗和幼胚愈伤组织 .X Gluc染色检查表达载体中GUS标记基因的瞬时表达 ,并在含有除草剂Basta的培养基上进行多步筛选 .以愈伤组织为单位 ,统计GUS表达阳性频率和转化体的分化频率 .结果表明 :基因枪轰击法的平均转化率高于农杆菌导入法 ;幼穗作为受体的转化率高于幼胚 ;干燥处理有利于提高根癌农杆菌对小麦愈伤受体的浸染力 .     

原球茎为转化受体的农杆菌介导石斛遗传转化

以携带双元载体pCAMBIA1305.1的农杆菌菌株EHA105转化石斛种子萌发形成的原球茎,通过GUS瞬时表达检测对受体状态、农杆菌活化条件、共培养时间等转化影响因子进行了优化;共培养4 d的原球茎接种到含有30 mg/L潮霉素(Hyg)和500 mg/L头孢噻肟钠的愈伤组织诱导与增殖培养基上以获得潮霉素抗性的愈伤组织,抗性愈伤组织在含Hyg 50 mg/L的再生培养基上再生植株,抗性株经GUS组织化学、PCR和PCR-southem blot检测证明为转化株。     

苜蓿愈伤组织诱导及GUS基因瞬时表达

用电击转化法将质粒pBI121(含GUS基因,β-葡萄糖苷酸酶基因）导入苜蓿愈伤组织的小细胞团内,利用组织化学定位实验检测到GUS基因在受体组织中的瞬时表达。     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.     

外源基因表达系统的研究进展

最近20多年来，随着重组DNA技术的迅速发展，对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入，并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统，它们各有优缺点，在选择时应衡量使用。     

论日本人际交往的润滑剂——敬语

敬语是日语的一大重要特色,根据不同的场景和人际关系,使用不同的敬语。目前广为统一的分类有四种,即：尊敬语、谦让语、郑重语、美化语。搞清人际交往中的敬语表达,如何正确使用敬语,是本文论述的重点。     

略论树立科学发展观

科学发展观的核心就是强调人与社会的和谐与统一,实现社会的全面、可持续的发展.我们要努力把握发展的客观规律,汲取人类关于发展的有益成果,要把实现人民群众的利益作为追求政绩的根本目的,把党和人民的需求作为评价政绩的重要尺度,在科学的发展观的指导下实现我国社会的全面发展.     

脸部表情动画的实现

用计算机动画技术合成人的面部表情动画是人体动画研究的一个重点。本文分析了人脸的生理结构组成和脸部表情与表情单元形变之间的关系，研究了包括局部变形箱变形、线性局部变形和密度球收缩和舒张变形在内的三种面部肌肉变形方法，在此基础上，提出了一个基于复合多组局部变形操作的脸部表情动画的模拟算法。通过调相关整表情单元的形变因子一时间参数曲线，有效地控制了脸部表情的动画过程，从而实现了脸部表情动画。     

Newton公式和Waring公式的等价性的讨论

本文研究了Newton公式和Waring公式的关系,揭示了两公式之间的内在联系,得到了一个重要的结论。     

基于二叉树的将中缀表达式转换为前缀表达式的方法

中缀表达式是使用频率最高的表达式形式,对其求值时,一方面要考虑表达式中运算符的优先级,另一方面还要考虑运算符的结合性.尽管运用人的思维能容易地判断中缀表达式的运算顺序,但使用计算机直接处理就会显得非常困难.提出一种基于二叉树的方法,即将中缀表达式转换为前缀表达式,然后在计算机上就可以实现简单求值.     

一种将中缀表达式转换为后缀表达式的新方法

中缀表达式是一种常见的表达式形式,对它进行求值时,既要考虑操作符的优先级,又要考虑操作符的结合性,虽然在直观上判断一个中缀表达式的运算次序并不难,但如果用计算机处理就非常困难,其一般做法是先将中缀表达式转换成后缀表达式再求值.在已有方法的基础上提出一种将中缀表达式转换为后缀表达式的新方法.     

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶ 1为宜     

与-或及与-异或表达式间的一种转换方法

介绍了与-或表达式及与-异或表达式间的一种形式的转换方法，该方法方便了在这两种表达式间的直接转换，也适于用计算机辅助进行两种表达式间的直接转换．用这种方法能方便地导出与-或表达式与Reed-Muller表达式间的形式转换以及极性函数转换成Reed-Muller表达式的形式转换。     

不同培养条件对基因工程疫苗菌抗原蛋白表达的影响

基因工程菌的表达条件研究在现代生物高技术产业化的发展中具有重要的意义。影响基因工程菌表达的因素主要有pH值、温度、诱导剂IPTG的浓度、诱导时间等。笔者分别就以上因素对基因工程菌抗原蛋白表达的影响进行了初步研究。在摇床培养条件下，外源基因表达蛋白的最适表达条件为终浓度O．8mmol/L的IPTG，32℃，诱导6h。