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相似文献
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1.
细胞穿膜肽是一类能够穿透细胞膜并且不损坏细胞膜结构的小分子多肽,该多肽由不多于40个氨基酸组成。研究表明,将细胞穿膜肽与小分子药物、蛋白质以及纳米载体(如脂质体等)结合起来,促进这类药物或载体穿透肿瘤细胞膜,从而实现对肿瘤细胞的靶向性。该文重点介绍细胞穿膜肽的特点,作用机制以及它在药物传递系统中的应用。  相似文献   

2.
利用MTT试验,检测石蒜碱对人肝癌HepG-2细胞具有增殖抑制作用,并观察细胞凋亡形态,采用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,发现石蒜碱对人肝癌HepG-2肿瘤细胞具有显著的抗肿瘤作用;通过对肿瘤细胞膜上主要组成成分进行检测,发现石蒜碱可以改变HepG-2细胞膜主要组成成分,使细胞膜结构发生变化;通过考察石蒜碱对HepG-2细胞细胞膜结构功能的影响,发现石蒜碱可以破坏肿瘤细胞膜完整性,并且能够降低肿瘤细胞膜封闭度、肿瘤细胞膜流动性以及肿瘤细胞膜阳离子通道活性,肿瘤细胞膜主要组成成分、结构的改变将会改变肿瘤细胞的内环境,细胞的内环境的改变必将影响细胞正常的新陈代谢功能,引发细胞凋亡.  相似文献   

3.
目的:实验致力于研究正反向细胞穿膜肽Penetratin携带工具的穿膜效率,为进一步解决大分子药物的临床应用奠定基础。方法:通过质粒构建重组成融合质粒载体pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(-)-EGFP,分别在BL21(DE3)中进行表达、经过His标签蛋白纯化柱纯化,得到比较纯的融合蛋白,然后用这些蛋白与HeLa细胞共同孵育,进行蛋白质的穿细胞功能检测。结果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(-)-EGFP穿细胞膜能力类似,而His-EGFP不具有细胞穿膜功能。结论:经过研究验证正向和反向序列Penetratin穿膜能力类似,并且两种融合蛋白穿膜机制与膜受体无关,属于被动运输的一种,两种融合蛋白对细胞无创伤作用,为开发新药成功建立了技术平台。  相似文献   

4.
艾滋病病毒的一个富含精氨酸的Tat多肽具有穿膜转导蛋白功能并能介导多种外源性物质进入细胞甚至细胞核.本研究的目的是探讨Tat多肽进入骨髓间充质干细胞的机制.将FITC标记的Tat分别和Alexa Fluor 546-标记的转铁蛋白(笼形蛋白介导的受体内吞方式入胞)、Alexa Fluor 594-标记的霍乱毒素B(脂筏介导的巨胞饮内化方式入胞)同兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)共孵育.用激光共聚焦扫描显微镜可观察到在BMSCs中穿膜肽Tat和霍乱毒素B呈点状叠加而与转铁蛋白几乎无叠加,同时在细胞核部位观察到有绿色荧光的Tat,初步表明穿膜肽Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs而非受体介导的内吞方式.另外,低温(4℃),破坏ATP、β-环式糊精和诺考达唑内吞抑制剂的使用均可观察到BMSCs内吞Tat的量降低,也间接验证Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs.  相似文献   

5.
肺腺癌A549细胞膜上磷脂翻转酶的存在与顺铂耐药性   总被引:1,自引:0,他引:1  
为证实肺腺癌细胞膜上是否存在磷脂翻转酶,将含有NBD-PE荧光探剂的脂质体与A549和A549/DDP细胞融合,根据外膜NBD-PE的荧光强度变化来检测细胞膜上磷脂翻转酶的存在及其活性.当含有NBD-PE的A549和A549/DDP细胞在保温0,30,60和90min时,测定外膜NBD-PE的结果表明,A549细胞的NBD-PE荧光强度在上述不同时间保温后分别为0%,1.4%,2.9%和7.8%;而A569/DDP细胞则相应为0%,10.5%,15.5%和18.3%,证实A549肺腺癌细胞膜上存在磷脂翻转酶.而且,具有抗药性的A549/DDP细胞膜上的磷脂翻转酶的活力明显高于药物敏感的A549细胞.用多药耐药逆转剂Verapamil(20μmol/L)在37℃处理A549/DDP细胞60min后测定其结果又表明,NBD-PE在膜外侧的增加较对照降低了25.0%.而用治疗肺腺癌的特异性抗癌药cisplatin(255μmol/L)处理时,NBD-PE在膜外侧的增加降低了31.6%,且随cisplatin的浓度增加进一步降低达79.4%.这与肺腺癌细胞的耐药性可能相关.  相似文献   

6.
以合成的含噁二唑杂环的罗丹明荧光染料(Rh-M)对Hela和U937细胞进行了活体染色实验.荧光显微镜下观察该荧光染料可以在5 min内进入Hela细胞,染色后的细胞发光面积较大,强度较高,Rh-M浓度在10-20μmol/L,染色15 min效果最佳.激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)下,浓度在20μmol/L染色15 min的Hela细胞,可以清晰看出染料在细胞质中均匀分布.流式细胞术((flow cytometry,FCM)检测U937细胞,表明Rh-M与肿瘤细胞的亲和能力强,在100μmol/L内荧光亮度与荧光染料浓度呈现增加趋势.  相似文献   

7.
采用穿膜肽(八聚精氨酸)作为连接基团,双硫键为敏感化学键,叶酸作为靶向基团,修饰光敏剂替莫卟吩(m-THPC),制备了一种多肽修饰的还原敏感型靶向光敏剂1,其结构经核磁共振氢谱(~1HNMR)和基质辅助激光离子化飞行时间型质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行表征.研究表明,八聚精氨酸的引入,可显著改善m-THPC的溶解度和提高肿瘤细胞的靶向性;在谷光甘肽(GSH)作用下,光敏剂1可释放出m-THPC, 6 h时的释放率大于80%.细胞毒性实验表明,光敏剂1在浓度为15μmol/L时, HeLa细胞的存活率可降至36.1%,细胞毒性大于叶酸-PEG-羧酸卟吩(光敏剂7).  相似文献   

8.
紫甘薯花色苷对人肝癌细胞HepG2的作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
以人肝癌细胞HepG2为模型研究紫甘薯花色苷的抗肿瘤活性.通过MTT实验检测紫甘薯花色苷对HepG2细胞的生长抑制作用,HE染色观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期变化.MTT结果表明,不同浓度的紫甘薯花色苷处理HepG2细胞24、48、72,h后,低浓度的紫甘薯花色苷促进肿瘤细胞的生长,高浓度的紫甘薯花色苷抑制肿瘤细胞的生长,800,μg/mL花色苷处理72,h抑制率高达80%.HE染色结果表明,正常HepG2细胞的细胞核和细胞质清晰可见,而加入花色苷后,出现细胞核固缩、染色质浓集于核膜表面、形成新月形致密小斑块、细胞膜形态变得不规则等凋亡的特征.流式细胞仪分析结果表明,花色苷能够促进肿瘤细胞的凋亡,且细胞的凋亡率随花色苷浓度的增加而增大.  相似文献   

9.
研究水鬼蕉生物碱(AHL)对人肝癌细胞HepG-2的凋亡作用.采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)检测水鬼蕉生物碱对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用,荧光显微镜观察水鬼蕉生物碱对人肝癌HepG-2细胞形态学的影响,流式细胞仪检测水鬼蕉生物碱诱导人肝癌HepG-2细胞的凋亡率.MTT结果显示水鬼蕉生物碱对HepG-2细胞具有一定的细胞毒作用,且随着质量浓度的增大而增强;Hoechst33258染色以后,荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈现均匀的蓝色荧光,而凋亡细胞的细胞核则现出致密强荧光及凋亡小体;利用碘化丙啶(PI)单染通过流式细胞仪检测分析表明不同质量浓度的水鬼蕉生物碱作用HepG-2细胞72 h后,有明显凋亡峰出现.通过体外实验表明水鬼蕉生物碱可以诱导人肝癌细胞HepG-2的凋亡,为新药研发提供科学依据.  相似文献   

10.
根据模块酶原理设计一种嵌有穿膜结构域序列并具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)双酶活性的含硒76肽(Se-CuZn-76P),利用半胱氨酸缺陷表达法在单一蛋白生产(SPP)系统表达该肽,并鉴定其穿膜效应.实验结果表明:该方法可成功表达纯度较高的Se-CuZn-76P,并且每毫克蛋白表现出109μmol/min的GPx活力和1 218μmol/min的SOD活力;在Se-CuZn-76P存在的环境中培养肝L02细胞一段时间后,细胞内的GPx和SOD活力分别升高1.65和4.12倍,且Se-CuZn-76P可顺利进入L02细胞.  相似文献   

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