细胞外基质对体外培养兔关节软骨细胞增殖及基质代谢的影响

目的：观察软骨组织的主要细胞外基质成分：Ⅱ型胶原、蛋白多糖、透明质酸对体外单层培养的兔关节软骨细胞的增殖及基质合成的影响。方法：原代分离、培养兔关节软骨细胞，分别向其中添加Ⅱ型胶原、蛋白多糖和透明质酸。采用改良MTT法检测细胞的增殖情况，Aleian Blue法检测基质蛋白多糖含量及羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量。结果：单独添加Ⅱ型胶原（50μg／mL）组、蛋白多糖（50μg／mL）组和透明质酸（100μg／mL）组及三者联合添加实验组与对照组相比，对关节软骨细胞的增殖及胶原、蛋白多糖的合成未见明显统计学差异（P〉0．05）。结论：正常软骨组织的主要基质成分对体外培养的兔关节软骨细胞增殖、蛋白多糖和胶原的合成无明显影响。     

富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞增殖及成骨能力的影响

目的:检测富血小板纤维蛋白提取液(PRFe)对人牙周膜细胞(h PDLCs)增殖及成骨分化能力的影响.方法:组织块法分离培养h PDLCs,免疫组化鉴定来源;Choukroun法制取PRFe;MTT法检测不同体积分数的PRFe对h PDLCs增殖活性的影响以确定最适宜体积分数的PRFe.实验分为空白对照组和PRFe组.碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性;茜素红染色观察细胞矿化功能;Western Blotting检测细胞中成骨蛋白BMP2和Runx2的表达.结果:体积分数为50%的PRFe吸光度值高于其他实验组(P0.05).选择体积分数为50%的PRFe用于后续实验,ALP活性检测、茜素红染色结果显示PRFe组的检测指标随着时间延长上升幅度均显著大于空白对照组,具有统计学差异(P0.05),PRFe组ALP活性与矿化结节积分光密度值于各时间点均高于空白对照组,具有统计学差异(P0.05).Western Blotting结果显示PRFe组成骨蛋白表达强于对照组,具有统计学差异(P0.05).结论:PRFe具有促进体外h PDLCs增殖以及成骨分化的作用.     

霍山石斛原球茎液体培养的营养调节

文章考察了培养基、碳源、氮源及激素组合对霍山石斛原球茎液体培养生长和多糖合成的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1/2基本培养基中,SH最适原球茎生长,1/2MS最适多糖合成,继代培养30d,原球茎增重3.73倍,多糖质量分数为2.78mg/g。蔗糖、葡萄糖和果糖3种碳源中,30g/L蔗糖促进原球茎生长,明显优于其它体积质量的葡萄糖和果糖,提高碳源体积质量抑制原球茎生长促进多糖合成。NH+4与NO-3、NAA与BA或KT的体积质量与比例可以调节悬浮培养中原球茎生长和多糖合成,低体积质量NH+4对生长有利,高体积质量的氮源及ρ(NAA)/ρ(BA)为1∶1时,多糖体积质量较高,原球茎生长和多糖合成呈负相关关系,为优化霍山石斛原球茎液体培养条件提供了依据。     

缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞的影响

目的:通过研究缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞生长的影响,以期寻找药物治疗、延缓PVR的发生、发展。方法:体外培养兔视网膜色素上皮细胞,取第三代细胞加入96孔板,分为①正常对照组;②血小板源性生长因子(PDGF)刺激组:50μg/L PDGF;③缬沙坦(Valsartan)治疗组:0.2mg/mL Valsartan+50μg/L PDGF。分别行MTT法检测兔RPE细胞增殖能力,ELASA法检测兔RPE细胞培养液TGF-β1含量。结果:PDGF刺激组兔RPE细胞的增殖速度加快,而Valsartan治疗组对PDGF刺激后的兔RPE生长有明显抑制作用,且明显抑制PDGF刺激兔RPE细胞分泌TGF-β1。结论:Valsartan可抑制体外培养的兔RPE细胞生长。     

碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度。方法：分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞（rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC）。细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。观察0．1、1．0、10．0和100．0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用^3H—TdR和^3H—Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响。结果：第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型。随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形。与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成（P〈0．05）,其中1．0和10．0μg／L bFGF促RGC增殖的作用与10％胎牛血清（FBS）对照组差异无显著性意义（P〉0．05）,但促胶原合成作用较弱,相当于10％FBS对照组的印％左右（P〈0．05）。结论：bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1．0～10．0μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足。     

兔房水HPCE检测及其对培养角膜基质细胞的作用

目的:采用高效毛细管电泳(HPCE)的毛细管区带电泳(CZE)分离与检测兔房水中各蛋白组成,观察房水对培养角膜基质细胞的作用.方法:CZE 测定新西兰白兔房水蛋白成分:运行缓冲液硼酸钠-硼酸缓冲溶液(pH=8.7、9.1、9.4);毛细管柱温20 ℃;检测波长 200 nm;压力进样0.5 psi,进样时间10s;运行电压20 kV.第1代培养角膜基质细胞进行DMEM/F12培养,加入体积分数为10%的房水,CCK-8检测24 h后细胞增殖情况,每天倒置显微镜下观察细胞生长情况.结果:应用 pH=9.4的硼酸钠-硼酸缓冲溶液可获得分离效果较理想的兔房水毛细管电泳峰图.加入房水24 h后 CCK8检测吸光度增高(P＜0.05),角膜基质细胞生长良好.结论:HPCE可快速有效方便检测兔房水蛋白成分,体积分数为10%的兔房水可促进培养的兔角膜基质细胞生长与增殖.     

山芝烯二醇对体外培养成骨细胞成骨活性的影响

为研究玉柏石松提取物山芝烯二醇对体外培养小鼠颅骨成骨细胞活性的影响,采用MTT法、碱性磷酸酶（ALP）试剂盒、荧光定量PCR检测不同浓度药物作用不同时间后成骨细胞增殖、ALP活性和成骨活性相关基因,如原癌基因（c-jun、c-fos）、成骨转录因子（Osterix）、碱性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、骨钙素（OC）表达.结果显示：山芝烯二醇处理早期（3 d）促进成骨细胞增殖,促进c-jun、c-fos基因表达,先抑制后促进Osterix基因表达;晚期（9 d）促进ALP活性和ALP、Col-Ⅰ基因表达,对OC基因无明显影响.说明山芝烯二醇可以促进成骨细胞的增值,ALP活性及部分骨相关基因表达,是玉柏石松促进骨愈合的有效成分之一.     

绿原酸对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究接骨草成分之一绿原酸(CGA)对成骨细胞MC3T3-E1活性的影响,采用MTT法检测11.02,22.05,44.09,88.19μmol/L CGA对成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测成骨细胞ALP活性,实时定量PCR检测成骨细胞骨相关基因的表达.结果表明:11.02～88.19μmol/L CGA对成骨细胞增殖具有明显的促进作用.培养2d,44.09μmol/L CGA能促进ALP表达上调;22.05,44.09μmol/L CGA能促进ALP、Runx2、Osterix、c-jun和c-fos基因的表达;培养6 d,44.09μmol/L CGA能促进c-fos基因的表达;在整个培养过程中,I型胶原(Col-I)基因的表达具有浓度和时间依赖性.故CGA具有一定的成骨活性,是接骨草的成骨活性成分之一.     

重金属 Cu 对土壤碱性磷酸酶活性的影响?

采用室内恒温恒湿培养方法,研究不同深度(表层、50、100cm)土壤样品中重金属Cu对碱性磷酸酶(ALP)活性及其动力学特征的影响.结果表明:ALP活性随着培养时间的延长而增加;相同培养时间条件下,随着Cu质量分数w的增加,表层、50cm样品的土壤ALP活性呈现先升高后降低的变化趋势,100cm样品的土壤ALP活性减小;不同土壤ALP活性变化存在差异,这与各土壤样品的理化性质,尤其是有机质含量不同有关;w(Cu)与ALP的Vmax、Vmax/Km显著相关,可以考虑将ALP催化动力学参数Vmax、Vmax/Km值作为辅助参考指标用作考察土壤重金属Cu污染水平;金属Cu对ALP的作用先是非竞争性抑制,后是竞争性抑制,表现出一种混合抑制类型.     

前交叉韧带组织工程种子细胞筛选的初步研究

为组织工程方法构建前交叉韧带筛选一种理想的种子细胞。用体外分离培养兔前交叉韧带（ACL）、内侧副韧带（MCL）、跟腱（AT）、皮肤成纤维细胞（SK）,比较四种细胞的生长状态、增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量。在含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液中,四种细胞生长良好、细胞形态相似,但以SK细胞生长最快,AT细胞次之,MCL细胞和ACL细胞生长最慢。SK、MCL、ACL细胞均分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原,AT细胞只分泌Ⅰ型胶原。SK细胞Ⅰ型胶原染色密度较MCL、ACL、AT细胞高,SK细胞Ⅲ型胶原染色密度较MCL、ACL细胞高。说明SK细胞增殖活性高,分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原多,取材简便,是理想的前交叉韧带组织工程种子细胞。     

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.     

Palaeobiology: calcification of early vertebrate cartilage

Hagfish and lampreys are unusual for modern vertebrates in that they have no jaws and their skeletons are neither calcified nor strengthened by collagen the cartilaginous elements of their endoskeleton are composed of huge, clumped chondrocytes (cartilage cells). We have discovered that the cartilage in a 370-million-year-old jawless fish, Euphanerops longaevus, was extensively calcified, even though its cellular organization was similar to the non-mineralized type found in lampreys. The calcification of this early lamprey-type cartilage differs from that seen in modern jawed vertebrates, and may represent a parallel evolutionary move towards a mineralized endoskeleton.     

Preparation of PLGA-collagen hybrid scaffolds with controlled pore structures for cartilage tissue engineering

Scaffolds used for cartilage tissue engineering should have high mechanical strength and well-controlled pore structure to provide suitable microenvironments for functional tissue regeneration. In this study, hybrid scaffolds which had open and interconnected pore structure and high mechanical property were prepared by hybridization of PLGA mesh and collagen using ice particulates as porogen templates. Embossing ice particulates template was used to form open pore structures on the scaffold surfaces. Free ice particulates were used to generate interconnected bulk pores in the scaffolds. Hybridization with PLGA mesh provided the scaffolds with high mechanical property. Bovine articular chondrocytes were cultured in the hybrid scaffolds. The unique pore structures facilitated the homogeneous distribution of chondrocytes and cartilaginous matrices throughout the scaffolds. Subcutaneous implantation demonstrated cartilage-like tissue regeneration. The hybrid scaffolds should have a high potential for cartilage tissue engineering.     

The Effect of Cyclic Stretching on Matrix Production, Mineralization and Differentiation of Osteoblasts

A four-point bending apparatus is used to investigate the effects of stretching on collagen synthesis, mineralization and differentiation of osteoblasts. Cells are stretched at 1500με for 24 hours. The responses of osteoblasts to mechanical signal of physiological stretching are evaluatedfrom three aspects: collagen production, extracellular inorganic calcium secretion and ALP activity. The results show that osteoblasts decrease the collagen synthesis, calcium secretion and ALP activity compared to the control cells (65.82 %, 73.51%, 48.10 96 respectively ), confirming that cyclic stretching at 1500με inhabits the ohvsiological activity of osteoblasts.     

Effect of La^3＋ on osteoblastic differentiation of rat bone marrow stromal cells

Lanthanides are increasingly used in industry and agriculture in recent years. These applications increase the accumulation of lanthanides in the human body, especially in bone[1]. Thus, people paid extensive atten-tion to the effect of lanthanides on bon…     

腺病毒介导BMP-4转染兔SMSCs软骨分化研究

目的 研究腺病毒介导BMP-4并带有绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染兔滑膜间充质干细胞(SMSCs)向软骨细胞分化的可行性。方法 兔膝关节腔取材,用Ⅰ型胶原酶消化分离获取SMSCs,采用流式细胞技术检测表面标记物。构建包含BMP-4基因和EGFP基因的腺病毒载体(Ad-BMP-4)并包装病毒。用不同感染复数(MOI分别为50、100、200、300、400、500)的病毒感染SMSCs,观察各组转染效率及检测不同MOI条件下细胞生长曲线,确定最合适的病毒感染滴度。进而应用ELISA检测分析染后的SMSCs是否进入软骨细胞分化谱系。结果 经分离纯化后获取的SMSCs形态学表现出间充质干细胞应有的结构,表面标记蛋白CD44、CD90高度表达,但CD34、CD45基本不表达,符合SMSCs的特征。分别以50、100、200、300、400、500MOI感染后,感染效率分别为54.3%、72.2%、77.8%、85%、86.6%、89.3%,而且感染效率依赖MOI高低,结合生长曲线300MOI为最佳感染滴度。ELISA法检测发现BMP-4显著高表达,同时软骨基因相关蛋白SOX9、COLⅡ及AGC蛋白也高表达。结论 应用300MOI重组腺病毒感染兔SMSCs细胞,能维持细胞正常增殖水平,且能快速高效地表达BMP-4并激活其他软骨相关基因,可促使SMSCs向软骨细胞分化。     

茅苍术多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠的治疗作用及机制研究

目的探讨茅苍术多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠的治疗作用及机制.方法给予Ⅱ型糖尿病模型大鼠不同剂量的茅苍术多糖,通过对模型大鼠体质量改变情况、空腹血糖含量、胰岛素水平及调节血脂代谢紊乱能力的观察,评价其治疗作用;通过对各组大鼠肝脏组织中MDA含量及CAT,SOD酶活性的测定,评价其抗氧化能力.结果茅苍术多糖可以改善糖尿病大鼠体质量下降情况,能够降低空腹血糖含量,提升胰岛素水平;茅苍术多糖也可以降低MDA含量,增加CAT和SOD活性.结论茅苍术多糖具有抗糖尿病作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关.     

鲟鱼软骨对小鼠生长及肝损伤的保护作用研究

鲟鱼软骨按0%、1%和3%的添加比例制成3种试验饲料.用健康的雄性昆明小白鼠为实验对象,分别进行4周的生长试验和CC l4染毒试验.CC l4染毒试验于28 d时,对照组腹腔注射精制豆油,其余各组以10 mL.kg-1剂量注射0.2%CC l4精制豆油溶液造成肝损伤,36 h后眼眶取血测定转氨酶活性,并取肝、脑、睾丸,测定超氧化歧化酶(SOD)活性、Na+,K+-ATP酶活性、总抗氧化值(T-AOC)、丙二醛(MDA).小鼠生长试验结果表明,软骨组小鼠体增重增加、耗料增重比降低及组织系数变化均与对照组没有明显差异(P>0.05).但软骨组小鼠血浆AST活性显著升高(P<0.05).小鼠CC l4染毒试验结果表明,与CC l4肝损伤组比较,软骨组小鼠肝、脑和睾丸组织中的Na+,K+-ATP酶活性、SOD活性、T-AOC值呈不同程度的升高,而MDA含量则呈不同程度的降低,但差异不明显(P>0.05).提示,鲟鱼软骨能够对小鼠的生长代谢产生影响并对CC l4所致小鼠肝损伤有一定的保护作用.     

软骨组织工程新进展

软骨组织工程技术为治疗骨、软骨疾病提供了一种新的方法，其主要技术路线是，通过种子细胞和生物活性支架的体外共培养实现软骨组织的再生，并最终完成组织的修复与重建。种子细胞的选择、支架的构建，培养条件的优化对软骨再生有重要作用，从而成为目前软骨工程领域的研究重点。     

Calcium carbonate nanoparticles promote osteogenesis compared to adipogenesis in human bone-marrow mesenchymal stem cells

Rhombohedron-like and fusiform calcium carbonate nanoparticles were fabricated using a new method. Their geometry was controlled by varying the mixing speed and ratio of ethanol versus water in reaction system. The calcium carbonate nanoparticles(CCNPs) have slight effect on viability of human bone-marrow mesenchymal stem cells(hBMSCs) with dose-dependent and shape-dependent, but they can significantly promote osteogenic differentiation of hBMSCs in vitro by 10–37% increase of alkaline phosphatase(ALP) activity, 9–36% growth of collagen secretion and 1.13–1.83 folds upregulation of osteogenesis-related genes, even at lower dose ranges(5–20 μg/ml). The efficacity of promoting osteogenesis depends on the shape and dose of CCNPs. Furthermore,adipogenesis was inhibited by less accumulation of lipid droplets, lower triglyceride(TG) secretion and downregulation of adipogenesis-related genes. These findings improve the understanding of effects CCNPs on hBMSCs fate towards osteoblasts or adipocytes and have meaningful impact for combining use of CCNPs and hBMSCs in tissue engineering and regenerative medicine fields.