加工番茄多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的cDNA克隆

以加工番茄８７－５为材料,运用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地将ＰＧ基因的ｃＤＮＡ序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,并利用酶切及ＰＣＲ进行了初步鉴定。     

果实成熟与多聚半乳糖醛酸酶基因的研究进展

对与果实成熟相关基因多聚半乳糖醛酸酶 (PG)基因的筛选、鉴定、表达及基因工程的研究进展作一个简要评述     

草莓多聚半乳糖醛酸酶基因RNAi植物表达载体的构建及表达鉴定

从草莓叶片中克隆到多聚半乳糖醛酸酶基因的1个281bp片断,构建含该正、反向互补重复序列DNA片段的中间载体,经测序证实连接正确后,克隆到植物表达载体p2300121中的GUS基因位置并经双酶切证实,得到RNAi表达载体。采用直接转化法将PG2300121导入根癌农杆菌菌株EHA105,并用新构建的工程菌对普通烟草进行了遗传转化研究。在Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株,经PCR方法鉴定,证实了该基因已导入烟草基因组中。     

还原糖法测定多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白活性的研究

研究了一种测定ｅｎｄｏ－ＰＧ和ＰＧＩＰ活力的方法－３，５－二硝基水杨酸试剂定糖法，并发现硫酸铵、ＥＤＴＡ对３，５－二硝基水杨酸试剂显色反应有抑制作用，ＮａＣｌ对ｅｎｄｏ－ＰＧ有抑制作用，同时还研究了某些因素对还原糖法测定ＰＧＩＰ活力的影响。     

果实成熟与多聚半乳糖醛酶基因的研究进展

对与果实成熟相关基因多聚半乳糖醛酸酶（PG）基因的筛选、鉴定、表达及基因工程的研究进展作一个简要评述。     

高压脉冲电场对多聚半乳糖醛酸酶活性及构象影响

本实验旨在研究高压脉冲电场(PEF)对多聚半乳糖醛酸酶(PC)活性及构象的影响.PG的活性随电场强度和脉冲个数的增加而降低.荧光光谱分析表明:PEF处理后PC蛋白的荧光发生不同程度的荧光淬灭,在高电场条件下将发生荧光峰的位移.另外,PG酶活性下降和荧光淬灭趋势一致,但呈非线性关系,说明酶构象改变与酶活性变化间存在密切的关系.     

河套蜜瓜ACC氧化酶基因cDNA部分片段的克隆和序列分析

以河套蜜瓜(Cucumis melo L．ev Hetao)成熟果实为材料，用硫氰酸胍法提取总RNA，以oligo(dT)15为引物，反转录合成cDNA，利用一对甜瓜ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-earboxylate oxidase，ACO)基因cDNA的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。获得了预期大小的cDNA片段．将此片段克隆于pUCl9质粒中，进行DNA序列分析．序列分析结果表明该片段为545bp，编码甜瓜ACO的第126至第306个氨基酸．该河套蜜瓜ACO基因cDNA序列与Andes甜瓜、Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的相应序列进行比较，其核苷酸序列与Andes甜瓜的同源性为99．4％；与Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的同源性均为99．6％。与其对应的氨基酸序列的同源性均为99．4％．     

超高压对果胶聚半乳糖醛酸酶的影响

研究测定了超高压 (4 0 0MPa以下 )对果胶半乳糖醛酸酶PG的影响 .从pH值、温度、加压时间、酶活力再生情况等几方面对PG酶的影响作了探讨 ,随压力升高 ,加压时间延长 ,酶活力下降 .经 4 0 0MPa,30min处理 ,下降约三分之一 ;经超高压处理后酶活力不会再生 .为高压处理果酱的生产提供理论依据     

河套蜜瓜成熟软化中PG、果胶质和细胞壁超微结构的变化

随着河套蜜瓜的成熟软化，原果胶含量降低，可溶性果胶含量增高；与之相应的ＰＧ（多聚半乳糖醛酸酶）比活力显著增加，而ＣＸ（纤维素酶）比活力则变化不大．乙烯利处理果实后，ＰＧ活力相应升高与果实软化呈明显的负相关．不同时期果实细胞壁超微结构观察表明，果胶层逐渐降解，胞壁纤维松驰，细胞器完整．     

甜瓜果实特异性表达黄瓜素基因启动子区的克隆和序列分析

黄瓜素(cucum is in)是甜瓜类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶,其表达具有果实特异性.应用PCR方法从甜瓜基因组DNA中扩增出该基因自转录起始位点至上游一段长310 bp片段,并将其克隆到pUC 19载体中,序列分析表明该序列与已报道的相应序列完全相同,且具有TATA-box、CAAT-box、G-box、I-box-like和增强子元件TGTCACA等功能域,具有典型的果实特异性启动子特征.成功获得甜瓜果实特异性表达基因的启动子,为下一步实现外源基因在甜瓜果实中特异表达奠定基础.     

激光照射对白兰瓜种子萌发期淀粉酶活性的影响

用532.0 nm、632.8 nm、650.0 nm3种不同波长的激光照射白兰瓜种子,发现632.8 nm的激光处理可以极大的提高淀粉酶的含量和活力,并在48小时处淀粉酶同工酶有新的酶带出现,说明632.8 nm波长的激光能有效的激活白兰瓜种子萌发期的淀粉酶,加速物质和能量的代谢,提高种子的萌发活力.     

农杆菌介导人肝再生增强因子转化河套蜜瓜的研究

利用三亲融合法将含有人肝再生增强因子(hum an augm en ter of liver regeneration,hALR)的果实特异性表达载体pPZP-CAN导入农杆菌LBA 4404,转化河套蜜瓜子叶外植体,经诱导与筛选获得了抗性再生植株,PCR扩增、PCR-Sou thern和斑点杂交检测证明hALR已整合入河套蜜瓜再生植株基因组中.     

河套蜜瓜(Cucumis melo L cv Hetau)子叶的组织培养和再生植株研究

切取在ＭＳ培养基中生长５ｄ的河套蜜瓜子叶,在ＭＳ＋ＮＡＡ１＋ＢＡ０．１的培养基中予培养３ｄ后转入芽诱导培养基（ＭＳ＋ＺＴ６）诱导生芽,待芽长２ｃｍ左右转入ＭＳ＋ＩＢＡ０．５诱导生根,１０ｄ后再转入沙质土壤的营养缶本中成苗,整个成苗过程约需６０～７０ｄ,再生植株诱导率可达５５％,为该种植物的遗传转化和优种快速繁殖提供了有利的条件     

Cloning a Full—length cDNA Encoding UDP—glucose Pyrophosphorylase from Amorpha fruticosa by PCR—based Methods

A method based on degenerate Oligo-primed polymerase chain reaction(PCR) and randomamplification of cDNA end (RACE) PCR for cloning a full-length cDNA is described.An Amorpha fruticosa cDNA clone encoding UDP-glucose pyrophosphorylase(UGP),a key enzyme producinng UDP-glucose in the synthesis of sucrose and cellulose,is cloned by using this method.We design 5‘ RACE rpimers based on UGPA1 fragment ,which obtains from degenerate PCR.Inverse PCR and nested PCR enable cloning of the remainder 5‘ and 3‘ end fragments of the gene.The deduced amino acid sequence xhibits significant homology with the other UGP genes cloned.This method is more simple and inexpensive than screening cDNA library,and can be easily adapted to clone other genes.     

人锰超氧化物歧化酶cDNA基因的克隆

利用人胚胎肝组织提取总ＲＮＡ,从总ＲＮＡ 中分离纯化出ｍ ＲＮＡ,经逆转录得到ｃＤＮＡ 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行ＰＣＲ 合成人锰超氧化物歧化酶ｃＤＮＡ 基因,将所得ｃＤＮＡ 克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ 上,转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行ｃＤＮＡ 全序列测定     

甜瓜光合特性研究——I单叶面积动态与光合性能

在田间生长条件下对甜瓜单叶光合特性进行了研究,结果表明：甜瓜叶片展出后叶面积呈对数模式扩展,幼叶光合能力也随叶龄呈对数型增长,单叶高效光合寿命期约4周;甜瓜单叶光合速率日变化曲线呈双峰型,品种间光合“午休”出现时间、成龄叶最大光合速率和光合水分利用效率有明显差异,气孔限制不是甜瓜光合“午体”的主要调节因素;扩大库容有利于提高甜瓜单株光合能力,但可能缩短叶片寿命。     

中国人磷酸核糖焦磷酸合成酶-1假基因的克隆与测序

自从第一个假基因被鉴定以后[1] ,有关假基因的性质与发生正在被阐明 .假基因基本上分为两类 :非加工的假基因和被加工的假基因 .被加工的假基因通常与活跃基因序列比较同源性高达 90 %～ 99% ,不含内含子 ,具有ｐｏｌｙ (Ａ)尾巴 ,可以转录 ,但由于在它们内部有许多终止子、插