血竭总黄酮对小鼠三叉神经节细胞河豚毒素敏感型钠通道电流的抑制作用

目的:观察血竭总黄酮对小鼠三叉神经节(TG)细胞河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道电流的影响,确定血竭对TG细胞电压门控性钠通道电流产生抑制效应的有效部位.方法:酶解法急性分离昆明种小鼠(1月龄)三叉神经节细胞,应用全细胞膜片钳技术记录TG 细胞TTX-S钠通道电流,观察血竭总黄酮对其影响.结果:在钳制电位为-90 mV时,3种浓度(0.001 %,0.01 %,0.1 %)的血竭总黄酮对锋钠电流的抑制率分别为17.02±5.42 %,33.23±5.12 %,49.30±5.14 %(P值均小于0.05),抑制效应呈典型的浓度依赖性,血竭总黄酮对TG细胞TTX-S锋钠电流的半数抑制浓度(IC50)为0.101 3 %.结论:血竭总黄酮是血竭抑制TG细胞TTX-S钠通道电流的有效部位,该研究为血竭有效成分的提取缩小了研究范围.     

云南血竭及血竭素对三叉神经节细胞电压门控性钠通道电流的影响

目的：探讨云南血竭及其提纯物血竭素高氯酸盐对三叉神经节细胞电压门控性钠通道电流的影响．材料与方法：在急性分离的TRG细胞膜上，阻断电压门控性钙通道和钾通道，在-70mV的钳制电位下，从-60mV起，给予10mV步幅递增、80ms步宽的去极化脉冲刺激，进行全细胞膜片钳记录．观察不同浓度的云南血竭及其提纯物血竭素高氯酸盐对TRG细胞电压门控性钠通道电流的影响．结果：各种浓度的云南血竭均显著抑制TRG细胞膜上电压门控性钠通道电流，并呈浓度依赖性，而血竭素高氯酸盐无此效应．结论：除了因消炎而止痛外，云南血竭尚可能通过直接干预TRG细胞的痛觉信息传入而发挥其镇痛作用，其有效作用成分有待进一步探讨．     

西帕依固龈液对IL-1β刺激人牙龈成纤维细胞产生PGE2的影响

 研究不同浓度西帕依固龈液对白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)刺激人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblast,HGF)产生前列腺素E₂(Prostaglandin E₂,PGE₂)水平的影响。采用健康人牙龈组织原代培养的HGF细胞,以1ng/mL的IL-1β作为刺激因子,将HGF细胞按5×10⁴/mL的细胞密度接种到24孔培养板中,每孔200μL的细胞悬液。孵育24h贴壁后,弃原培养液,清洗2次后加药,分组为空白对照组(用含20mL/L的胎牛血清的DMEM培养液),IL-1β组(浓度为1ng/mL),IL-1β+西帕依固龈液组(西帕依固龈液终末浓度分别为12.5、25、50、100、200μg/mL),IL-1β+消炎痛(消炎痛浓度为100ng/mL)。用酶联免疫法测定PGE₂含量,观察不同浓度的西帕依固龈液(分别为12.5、25、50、100、200μg/mL)对HGF培养上清中PGE₂水平的影响。结果显示,5种不同浓度的西帕依固龈液均能显著抑制1ng/mL的IL-1β刺激后HGF产生PGE₂,随着浓度的增加,抑制效果也增加,但5种浓度的西帕依固龈液抑制效果均低于100ng/mL的消炎痛。由此得出,HGF具有合成和分泌PGE₂的功能,IL-1β能有效刺激HGF产生PGE₂;西帕依固龈液对IL-1β刺激HGF合成和分泌PGE₂具有显著抑制作用,其抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性。     

ERK通路对TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

为研究不同浓度TGF-β1、不同作用时间对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响,并在此基础上探讨ERK信号转导通路在TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用.取大鼠胸主动脉,用贴块法进行原代培养,取3～5代细胞.分别施加不同浓度TGF-β1(0、0.01、0.1、1、10ng/mL)作用24h和10ng/mL TGF-β1作用不同的时间(0、8、12、16、20、24h),用MTT法测定各组细胞吸光值,确定TGF-β1作用浓度和时间.再取生长正常的细胞,分四组:对照组,TGF-β1组,ERK阻断剂组和 TGF-β1 ERK阻断剂组.继续培养24h后,用MTT法测细胞的增殖活性.TGF-β1浓度≥1 ng/mL作用24h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05),10ng/mL TGF-β1作用时间≥12h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05),10ng/mL TCF-β1作用时间≥12h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05);与对照组相比,其他三组吸光值均明显降低(P＜0.05),ERK阻断剂组吸光值低于TGF-β1组(P＜0.0 5).TGF-β1呈浓度依赖和时间依赖方式抑制体外培养的血管平滑肌细胞的增殖,ERK信号转导通路可能不参与TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用.     

TGF-β1与乳腺癌中microRNA-21表达的关系

目的:研究乳腺癌中microRNA-21(miR-21)的表达及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)的关系.方法:用不同质量浓度的TGF-β1 0、1.25、2.5、5、10 ng/mL干预MCF-7细胞24 h,以及不同时间(0、6、12、24、48、72 h)TGF-β1干预MCF-7细胞,用茎环实时荧光定量聚合...     

运动性骨骼肌适应的炎症诱导机制研究现状

运动人体科学界、运动医学界普遍认为炎症诱导肌卫星细胞激活的机制是运动性骨骼肌适应的最重要机制。运动肌会因机械损伤、缺血／再灌注、钙离子升高尤其牵拉激活型Ca^2＋通道激活导致的Ca^2＋升高,产生肿瘤坏死因子-α（tumornec rosisfactor,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）等各种促炎症因子。这些细胞因子以内皮细胞为媒介将白细胞尤其是中性粒细胞由血液引向骨骼肌组织导致炎症发生。一定范围内或一定程度的炎症反应过程中,炎症造成的缺氧及炎症募集的ED^2＋巨噬细胞产生的成纤生长因子、胰岛素样生长因子-1会激活卫星,随着卫星细胞内各种肌源性调节因子的程序性合成,卫星细胞并从G0期重返细胞周期,进行细胞的增殖,既实现卫星细胞的自我更新、维持,又有序地进行细胞分化、同损伤肌细胞融合,最终完成骨骼肌的正常生长、损伤肌肉的修复及再生。     

TRAAK离子通道第4次跨膜结构对其机械敏感性的作用

TRAAK通道(KCNK4)是双孔钾通道的成员,在哺乳动物神经系统中表达,其产生的钾电流是能改变神经元兴奋性的背景电流的重要组成部分.TRAAK通道是机械力和温度门控的通道,并且受到电压、胞内pH以及脂质的调节,然而它们的机制在很大程度上仍然是未知的.为了研究TRAAK通道的机械力门控机制,本研究将TRAAK通道的第4次跨膜结构域(the fourth transmembrane domain,M4)和非机械敏感性离子通道TWIK-1之间的同源区域进行替换,构建了3个嵌合突变体,通过全细胞和细胞贴附式记录,发现当TRAAK通道M4的上半部分被TWIK-1的同源序列替换之后,显著降低了通道半激活压力值(P_(50)),极大增强了TRAAK通道的机械敏感性,表明M4的上半部分对TRAAK通道机械敏感性具有重要的调控作用,为研究TRAAK通道的机械力门控机制提供了基础.     

生物填充疗法治疗西藏大骨节病患者血清细胞因子水平和疗效观察

目的：分析西藏大骨节病患者用生物填充剂透明质酸钠膝关节注射治疗前后血清中细胞因子水平的变化与治疗效果。方法：选择西藏拉萨地区尼木县、墨竹工卡县、林周县等大骨节病区患者和病区健康对照组成人共252例为调查对象,依据大骨节病诊断标准,将其分为大骨节病组（KBD组,156例）和健康对照组（96例）,患者平均年龄和性别无差别。KBD组中106例膝关节注射透明质酸钠,50例口服Vc。采用ELISA法测定血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、透明质酸（HA）水平,硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。结果：注射治疗后一周症状明显缓解,且疗效显著优于口服Vc。大骨节病组血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）一氧化氮含量等显著高于对照组人群,但透明质酸含量低于对照组。治疗后三个月血清细胞因子水平有下降趋势,但无统计学显著性。结论：膝关节注射生物填充剂透明质酸钠治疗西藏大骨节病,可缓解临床症状,改善关节功能,其作用可能是通过润滑关节,降低血清滑液中炎性细胞因子如TNF-1α、IL-1β等水平的作用来实现。     

大鼠背根神经节神经元的分离方法及电生理特征探讨

在获取大鼠背根神经节神经元后,全细胞膜片钳技术记录动作电位和钠电流,探讨大鼠背根神经节细胞的分离方法和细胞形态以及电生理特征.结果显示,本实验能得到完整圆形或椭圆长条形的大鼠背根神经节体.正常的单个背根神经节神经元呈圆形或椭圆形,大小不等,胞膜清晰,折光性好,隐约可见细胞核.在背根神经节细胞上记录的动作电位呈正立锐角三角形,静息电位小,动作电位时程短.背根神经节神经元的钠通道最大电流密度为(-62.04±4.45)pA/pF,几乎能被河豚毒素(TTX)完全抑制.本实验分离方法简单易行,背根神经节神经元容易获得和辨认,电生理特征明确,适用于神经系统疾病的电生理特征研究和治疗药物观察.     

β-环糊精对9,10-蒽醌的荧光增敏效应研究

研究β-环糊精和9,10-蒽醌在水相中形成的超分子体系的荧光光谱,得到不同浓度和不同pH值溶液中客体分子的荧光光谱.研究发现,在水相中,β-环糊精和9,10-蒽醌形成了1∶1的超分子体系,包合常数为1.35×102,与单体分子相比,空腔内9,10-蒽醌分子的荧光强度大大提高.在中性水溶液中,β-环糊精的浓度范围为4×10-4~3.2×10-3mol/L,9,10-蒽醌的荧光强度随着β-环糊精浓度的增加而增强.客体分子的荧光强度在酸性水溶液中具有很强的增强效应,而在中性和碱性介质中,其荧光增强效应大大降低.其中在pH=4.12的溶液中,客体分子9,10-蒽醌在β-环糊精空腔的荧光强度最大.9,10-蒽醌在4.99~66.56ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,回归方程为F=7.82C(ng/mL)+218.6,相关系数为0.998 5.利用荧光增强效应,得到该超分子体系对9,10-蒽醌的检测限为0.04ng/mL,该数量级是已经报道检测限(0.2μg/mL)的万分之一.     

Amyloid β-protein differentially affects NMDA receptor- and GABAA receptor-mediated currents in rat hippocampal CA1 neurons

Although the aggregated amyloid β-protein (Aβ) in senile plaques is one of the key neuropathological features of Alzheimer's disease (AD), soluble forms of Aβ also interfere with synaptic plasticity at the early stage of AD. The suppressive action of acute application of Aβ on hippocampal long-term potentiation (LTP) has been reported widely, whereas the mechanism underlying the effects of Aβ is still mostly unknown. The present study, using the whole-cell patch clamp technique, investigated the effects of Aβ fragments (Aβ25–35 and Aβ31–35) on the LTP induction-related postsynaptic ligand-gated channel currents in isolated hippocampal CA1 neurons. The results showed a rapid but opposite action of both peptides on excitatory and inhibitory receptor currents. Glutamate application-induced currents were suppressed by Aβ25–35 in a dose-dependent manner, and furtherN-methyl-D aspartate(NMDA)receptor-mediated currents were selectively inhibited. In contrast, pretreatment with Aβ fragments potentiated γ-aminobutyric acid (GABA)-induced whole-cell currents. As a control, Aβ35–31, the reversed sequence of Aβ31–35, showed no effect on the currents induced by glutamate,NMDAor GABA. These results may partly explain the impaired effects of Aβ on hippocampal LTP, and suggest that the functional down-regulation of NMDA receptors and up-regulation of GABAA receptors may play an important role in remodeling the hippocampal synaptic plasticity in early AD.     

Effect of ytterbium on sodium current and its kinetics in rat hippocampal neurons

This study addressed the effects of Yb3＋ on voltage-gated sodium currents in rat hippocampal neurons using the whole-cell patch-clamp technique. Voltage-clamp recordings in single neurons were filtered and stored in a computer. Yb3＋ increased the amplitude of sodium currents in a concentration-dependent and voltage-dependent man- ner. The 50 % enhancement concentration of Yb3＋ on sodium currents was about 8.97 μmol/L, which was dif- ferent from the inhibitory effects of Yb3＋ on potassium current. The analysis on the activation and inactivation kinetics of Na＋ current showed that 100 μmol/L Yb3＋ did not change the process of activation and inactivation. In addition, the times reaching the peak of current （t） and inactivated time constant （τ） were voltage dependent. 100 μmol/L Yb3＋ significantly prolonged the time to peak at -70 and -80 mV. The effect disappeared at the positive direction of -70 mV. Furthermore, Yb3＋ decreased r val- ues to more positive values than -80 mV. In total, Yb3＋ did not change the process of activation, but impelled inacti- vated process. Yb3＋ mainly increased the Na＋ current through changing its conductance. It might be one of the mechanisms that Yb3＋ affected the hippocampal neurons.     

超高效液相色谱-质谱法同时测定肉制品中8种β-受体激动剂

目的建立动物源性食品中8种β-受体激动剂的LC-MS/MS检测方法。方法使用乙酸-乙酸铵溶液调节pH为5.2,β-盐酸葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶提取,经固相萃取柱净化、浓缩、定容后采用LC-MS/MS进行分析。结果 5~100ng/mL浓度范围有良好的线性关系,各组分相关系数r0.998,加标回收率范围75%~94%。结论该方法灵敏度高、准确、重现性好,适用于肉制品中β-受体激动剂的残留量检测。     

多孔钛植入体表层孔隙内TGF-β1缓释明胶微球涂层的工艺优化

采用正交试验法优化载转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)缓释明胶微球多孔钛植入体制备工艺,探讨多孔钛植入体孔隙内微球涂层的载药、释药特性.采用粉末注射成形(Metal Injection Molding, MIM)技术制备多孔钛植入体,选用明胶为TGF-β1缓释载体材料,乳化冷凝聚合交联法制备明胶微球,检测微球粒径与形貌以及载TGF-β1微球的包封率、载药率,采用渗涂法制备多孔钛表层孔隙内载TGF-β1明胶微球涂层,释放试验检测涂层的释药特性.实验结果表明,MIM技术制备的多孔钛植入体的孔隙度为(62.02±1.82)%,孔径为50～300 μm,抗压缩强度为(63.23±12.81) MPa,弹性模量为(0.95±0.61) GPa.明胶微球粒径随明胶浓度的减小、搅拌速度和交联时间的增加而减小,交联剂用量对微球粒径影响无显著性差异.制备的TGF-β1明胶微球为球形,平均粒径为(21.42±3.67) μm,载药量为(0.91±0.02) μg/g,包封率为(91.41±1.82)%.TGF-β1微球涂层体外14 d,时的TGF-β1释放率为(94.2±3.4)%;粒径为(21.42±3.67) μm的明胶微球的最佳工艺参数如下:明胶浓度为10%,搅拌速度为800 r/min,交联剂用量为0.1 mL,交联时间为2 h.多孔钛植入经5%(质量分数)明胶溶液预处理后用20 g/L微球渗涂可在表层孔隙内形成均匀微球涂层,且不阻塞表层孔隙,微球涂层TGF-β1释放时间为14 d.     

定量研究环糊精聚合物包合作用的新方法

通过聚合物接枝改性的方法制备了β-环糊精改性聚丙烯酸(PAAβCDen)和丹磺酰基团改性聚丙烯酸(PAADSen),并用二维氢核磁、流变学、紫外-可见分光光度法等方法对接枝于聚合物上的环糊精主客体相互作用进行了定量研究。结果表明:接枝于聚丙烯酸链上的β-环糊精和丹磺酰基团之间能够形成主客体包合结构,从而使PAAβCDen和PAADSen之间产生交联,并且首次采用紫外-可见分光光度法测得接枝于不同聚合物链上环糊精基团和丹磺酰基团之间的结合常数为(27.5±3)L/mol,远小于自由状态下β-环糊精与丹酰胺之间的结合常数((103±5)L/mol)。     

吸入白细胞介素-5对支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞数及其活化状态的影响

随机选择8例哮喘患者雾化吸入人重组IL-5,分别吸入前、吸入后2 h、24 h和48 h进行外周血有核细胞计数和分类,以放射免疫法测定血清中嗜酸性阳离子蛋白(ECP)及总IgE水平.结果,吸入IL-5后嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比、EOS绝对细胞数以及ECP水平均随时间而明显升高,至24 h达最高值,48 h后仍维持在较高水平;IL-5在整个实验过程中对血清总IgE水平无明显影响.表明,吸入IL-5不仅可以促使循环中EOS数明显增多,且还能招致其活化从而参与哮喘的发病过程.     

Transforming growth factorβ1 and epidermal growth factor decrease the expression of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 in endometrial carcinoma cells

Estradiol (E2) is the major molecular form of estrogens. Its biological effects are determined by estrogen receptors and intracellular E2 concentration in target cells. Regulation of intracellular E2 concentration involves the action of 17β(-hydroxysteroid dehydrogenase (17HSD) type 2, the enzyme inactivating E2 to estrone. It has been demonstrated that 17HSD type 2 is expressed in normal endometrial epithelia and emdometrial carcinoma cells (RL 95-2). However, the regulatory mechanism of 17HSD type 2 expression in emdometrial cancer cells remains unknown. In the present study, the effects of transforming growth factor-(1 (TGF-β1) and epidermal growth factor (EGF) on 17HSD type 2 expression in RL 95-2 cells have been investigated using enzyme activity assay and Northern blot analysis. After stimulation with TGF-β1 or EGF, the in vivo oxidative 17HSD activity in RL 95-2 cells was significantly decreased. It appeared that the inhibitory effect of TGF-β1 and EGF on the enzyme activity of 17HSD type 2 is dose- and time-dependent. Northern blot analysis further revealed that treatment of cells for 48 h with 10 ng/mL TGF-1β And 50 ng/mL EGF reduced the expression 17HSD type 2 mRNA to 30% and 20% of the control level, respectively. The data demonstrate that 17HSD type 2 expression in endometrial carcinoma cells is down-regulated by certain growth factors.     

β-环糊精交联树脂富集氢化物发生-原子荧光光谱法测定水样中的苯基汞

提出利用β-环糊精交联聚合树脂富集环境水样中的苯基汞,选用乙醇洗脱富集的苯基汞,并使用氢化物发生-原子荧光光谱法对其消解物进行定量分析的方法,通过实验优化其化学和仪器条件。讨论了溴化剂用量、溴化时间对消解率的影响,振荡时间对吸附率的影响,洗脱时间对洗脱率的影响,以及共存离子干扰、精密度与检出限等因素,对样品进行了分析并绘制了标准曲线。该方法灵敏度高、选择性好、精密度高,检出限为0.36 ng/mL,相对标准偏差RSD为2.29%(n=10,c=4 ng/mL)。