亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达

酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链(bZIP)结构结合DNA的蛋白质之一，当GCN4二聚体与DNA结合时，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋．为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21，讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件．在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5mL含有50μg／mL氨节青霉素和34μg／mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达，在不同的时间(如：诱导前，诱导2，4，6，8h)取样100μL到1．5mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10％SDS-PAGE检测；在10L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间．结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0．1-0．8mmol的IPTG均可在2-10h内诱导该蛋白质表达；而大量培养时，0．2mmol和0．4mmol的IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达；小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4-6h，诱导剂IPTG的浓度为0．2mmol，大量表达的温度为28℃而不是37℃．     

重组人B淋巴细胞刺激因子原核表达条件的优化

以重组人B淋巴细胞刺激因子(rhBLyS)蛋白表达宿主菌株M15(pQE30a／rhBLyS)作为研究对象，借助SDS-PAGE分析方法，对于用IPTG诱导的重组目的产物的表达进行了优化研究。分析比较了pH值、裂解液种类、诱导时问、IPTG浓度、温度等参数对重组产物表达的影响．实验结果表明，降低温度和IPTG浓度有利于增加靶蛋白的可溶性，27℃和0．075mol／L IPTG为比较适合的表达条件．     

八肋游仆虫信息素在大肠杆菌中的表达

信息素在八肋游仆虫接合生殖过程中起着重要的诱导配对作用，为了进一步研究其诱导机制，根据已知的基因序列，应用PCR技术，扩增信息素G3基因，并将该基因插入表达载体pGEX-6P1中，构建了重组表达质粒pGEX-6P1-G3．重组菌在37℃下，经1．0mmol／L IPTG诱导，12％SDS-PAGE分析，在37kDa处出现明显的特异目的带。     

类人胶原蛋白基因工程茵高密度发酵过程控制

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略，采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果OD600可达150，胶原蛋白的表达量为9g／L。结论20％～30％饱和度的溶解氧和0．1-0．2h^-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达，其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。     

运用均匀设计法优化pST1-K99在原核系统中的表达

运用均匀设计法,对影响pST1-K99在大肠杆菌中表达的因素进行了优化,摸索出了对周质蛋白进行诱导表达的最佳条件,即pH=6．0,装液量30mL,IPTG终浓度0．484mmol／L,IPTG诱导时间6h,诱导温度34℃．在此条件下,所表达的目的蛋白的平均密度从0．14提高到0．20,比优化前提高了43％．     

大肠杆菌生产重组人干扰素-γ培养基的研究

在M9培养基的基础上，优选出重组大肠杆菌生产人干扰素—γ(rhIFN-γ)的优化培养基配方。结果表明：优化的碳源为含量2％的葡萄糖，氮源为蛋白胨和少量的(NH4)2SO4；优化培养基有利于菌体的生长和目标蛋白的表达，使rhIFN—γ的生产能力达0．64g/L，比优化前提高了190．9％。     

几种因素对重组大肠杆菌目标蛋白表达的影响

应用基因工程技术 ,获得能表达蛋白B的重组大肠杆菌 .在摇床条件下 ,研究了几种因素———IPTG浓度、接种不同初始浓度的菌种及培养温度对目标蛋白表达的影响 .结果表明 ,IPTG浓度在常规用量 1mmol/L的基础上降低至 0 .2mmol/L时 ,目标蛋白的表达量无显著差异 ;菌种初始浓度并非越大越好 ,结合表达量 ,作者认为 ,在 1∶80时较适宜 ;培养温度为 37℃对菌株目标蛋白的表达明显好于 30℃ .     

重组大肠杆菌生产rhG-CSF发酵工艺的研究

在5L发酵罐中，研究了溶解氧(DO)、诱导时机、接种量等因素对重组大肠杆菌DH5α／pBV220生产rhG-CSF的影响．结果表明，在ω(D0)≥50％，茵体光密度D600≈4．50，42℃诱导表达4h的条件下rhG-CSF的茵体干重可达6．61g／L，表达量为38．1％．     

不同培养条件对基因工程疫苗菌抗原蛋白表达的影响

基因工程菌的表达条件研究在现代生物高技术产业化的发展中具有重要的意义。影响基因工程菌表达的因素主要有pH值、温度、诱导剂IPTG的浓度、诱导时间等。笔者分别就以上因素对基因工程菌抗原蛋白表达的影响进行了初步研究。在摇床培养条件下，外源基因表达蛋白的最适表达条件为终浓度O．8mmol/L的IPTG，32℃，诱导6h。     

水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建、表达和纯化

利用PCR技术,从水稻品种日本晴幼穗cDNA中扩增磷酸酯酶2A的基因ORF片段,并将其克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中构建重组质粒pGEX-6p-1-PP-2A,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载体pGEX-6p-1-PP2A。转化E.coli JM109并通过终浓度为0．4mmol／L的IPTG诱导,表达出39kD的CST-PP2A融合蛋白,并用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,为下一步的研究打下了实验基础。