传染性法氏囊病快速诊断技术的建立及其应用

根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列，在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2 variable domain,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物，对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶一聚合酶链式反应(RT—PCR)的检测．结果 12个参考毒株均能扩增出约679 bp的目的片段，而对作为阴性对照的常见5种鸡病病原NDV、IBV、CAIV、E．coli、pM均没有扩增出任何片段；应用建立的技术对疑似IBD的34份临床病料进行检测，并同时在基础RT—PCR扩增的片段内设计另一对引物进行Nested—PCR检测．结果基础RT—PCR方法检测到ll份阳性，Nested-PCR检测到23份阳性．研究的结果表明建立的IBD的RT—PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点．在此基础上设计的Nested—PCR则大大提高了阳性检出率(提高52．1％)．     

巴彦淖尔地区汉坦病毒的分子流行病学调查

目的：对巴彦淖尔地区进行汉坦病毒的分子流行病学调查．方法：采用间接免疫荧光法（IFA）对在野外捕获的鼠肺样品进行初筛,用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）扩增IFA阳性标本中汉坦病毒的S基因片段,以S基因片段（620—999nt）的核苷酸序列构建系统发生树并进行分子进化分析．结果：捕获的200只中有褐家鼠141只（70．5％）,黑线仓鼠40只（20．0％）,小家鼠19只（9．5％）;IFA检出6份阳性标本,均来自褐家鼠,其S基因均为S1亚型．结论：巴彦淖尔地区褐家鼠携带S1亚型汉坦病毒．     

转基因油菜籽多重PCR-DNA芯片联用检测方法的研究

根据转基因油菜中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、FMV35S，PAT基因和目的基因mCP4-EP-SPS，BAR，MS8，RF3以及内源PEP基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片，在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试，结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．1％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率．     

检测微囊藻毒素合成酶基凶mcyH的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT—PCR方法的建立

利用RT—PCR方法从铜绿微囊藻PCC7806 mcy基因中扩增出目的基因片段，用TA克隆方法将基因片段插入pGEMT—T Easy中来制备质粒标准品．通过不同连续稀释倍数的质粒标准品成功构建了16srRNA和mcyH两基因的标准曲线，该法构建的两基因标准曲线r^2分别为0．9916和0．9938，且质粒标准品具有较好的重复性，满足实时荧光定量RT—PCR的要求．     

RT—PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究

草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）为草鱼出血病的病原．本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）方法．该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120nmol／L,最适退火温度为52℃．PCR特异性试验表明：所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA．敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性．用所建立的RT—PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT—PCR检测方法可靠且可行．     

PCR-DHPLC技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术，建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物，PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测，并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性，经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌，是食品微生物快速检测的新技术．     

POR-DHPLO技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术，建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物，PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测，并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性，经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌，是食品微生物快速检测的新技术．     

野葛特异性PCR检测方法的建立与应用研究

一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记.为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,通过对Gen Bank中野葛基因信息的检索分析,筛选出了同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基因作为研究对象.对该基因的特定区域设计引物,建立了野葛特异性定性PCR检测方法.利用该方法对野葛14个不同居群的DNA进行PCR扩增,均能扩增出226 bp的片段.而用相同引物分别对20种其他植物的DNA进行扩增均未出现特异性扩增产物. PCR灵敏度实验结果表明该方法的检测灵敏度达到0.02 ng基因组DNA,对市场上的葛根产品进行检测结果表明该方法可以有效鉴定葛根产品中是否含有野葛成分.该野葛特异性PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于野葛成分的检测与鉴定.     

鸡传染性法氏囊病的RT—PCR诊断方法的研究

在研究鸡法氏囊病毒（HBDV）的A片断cDNA结构的基础上，建立了RT－PCR早期诊断技术，结果表明，使用PrimerDesign引物设计软件，在VP5和VP2的重叠基因区设计的一对引物具有非常高的同源性和保守性，采用的四种IBDV的标准毒株，一种野毒株和一例病鸡标本通过此引物进行RT－PCR检测均得到了明显的阳性扩增结果，而两种其他鸡病病毒和一例健康鸡的法氏囊组织扩增均为阴性结果。     

南方鲇促生长激素释放激素基因的部分cDNA克隆及序列分析

促生长激素释放激素（GHRH）是一种重要的内分泌激素,主要功能是调节脑垂体分泌生长激素（OH）．实验旨在克隆分析南方鲇GHRH基因的cDNA序列．从南方鲇的脑组织中提取总RNA并反转录成cDNA,再根据已知GHRH基因的保守区域序列设计引物,通过反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）实验,获得了一条334bp的片段并进行了测序,序列信息分析表明,该序列与沟鲇的GHRH基因同源,相似性达99％．根据同源性检索结果推测该序列编码110个氨基酸,并基于该编码序列分析了南方鲇GHRH的功能结构域以及南方鲇同其他物种的遗传发生关系,