不同浓度氮、磷对杜氏盐藻生长的影响

在实验室条件下,研究了不同氮(0、0.1、0.4、0.8、1.0、1.2 g/L)、磷(0、0.015、0.025、0.030、0.045、0.060 g/L)浓度下杜氏盐藻生长增殖的关系和特征,以及氮磷比(c(N)/c(P))变化等对该藻生长的影响。实验结果表明:杜氏盐藻对氮、磷有着较强的适应能力,浓度增大藻增长率增大,浓度继续增大反而抑制藻的增长,属于营养依赖型藻类。不同氮质量浓度梯度对杜氏盐藻生长具有显著性影响(P<0.05),但对杜氏盐藻生长率K的影响不显著(P>0.05),最适宜的氮浓度为1.0 g/L;不同磷质量浓度梯度对杜氏盐藻的生长和生长率K具有显著性的影响(P<0.05),最适宜的磷浓度为0.025 g/L。当c(N)/c(P)为40时,最适合杜氏盐藻的生长。     

不同水质对杜氏盐藻生长和生理的影响

分析杜氏盐藻(Dunaliella salina)在不同水质中的生长状况,确定适合养殖杜氏盐藻的水源.根据GB17378.4—2007的方法检测天津中心渔港海水、天津北疆电厂冷却水、稀释10倍后的青海柴达木盆地察尔汗盐湖原卤水、老卤水及成矿卤水的水质后,将杜氏盐藻接种于其中,分析水质对盐藻各生理指标的影响.结果表明:除青海柴达木盆地察尔汗盐湖老卤水外,其余4种水样均可以用来培养盐藻.虽然不同水质对盐藻生长及生理的影响不同,但综合来看,利用稀释10倍后的成矿卤水培养的杜氏盐藻培养至第15天时,硝酸还原酶活性为(4.41±0.18)μg/(mg·h),显著高于用海水培养的杜氏盐藻.培养至21,d时,叶绿素质量浓度为(24.9±1.0)mg/L,藻细胞质量浓度为(409.5±21.1)mg/L,与用海水培养的杜氏盐藻间均无显著性差异.净光合速率为(128.6±3.0)μmol/(mg·h),呼吸速率为(28.2±0.9)μmol/(mg·h).证明在同样的培养条件下,利用稀释10倍后的成矿卤水培养的杜氏盐藻与用海水培养的杜氏盐藻积累同样多的干物质.     

杜氏盐藻hsp9O基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至GeneBank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

杜氏盐藻hsp90基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至Gene-Bank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

盐生杜氏藻(Dunaliella Salina)大量培养条件的优化研究

采用正交试验法对盐生杜氏藻的扩大培养条件进行优化研究,结果表明:在培养基pH值为9,温度为32℃,光照强度为10 000lx,接种密度为0.30,培养基配方为J/L培养基的条件下,有利于杜氏藻的生长,可适用于大型工业化培养生产.     

碘酸钾对杜氏盐藻抗氧化能力的影响

以杜氏盐藻为材料,研究碘酸钾对其抗氧化物质含量及清除自由基能力的影响.当在杜氏盐藻培养液中添加不同质量浓度的碘酸钾时,藻体内黄酮、β–胡萝卜素和维生素E含量不同程度地升高.培养液中碘酸钾的质量浓度为4.0,g/L时,藻体内黄酮的含量增幅最大,为对照的126.3%,碘酸钾的质量浓度为0.4,g/L时,藻体内β–胡萝卜素和维生素E的含量增幅最大,分别为对照的121.6%和126.7%.不同质量浓度的碘酸钾处理后,杜氏盐藻提取物清除超氧阴离子自由基(O2.)和羟自由基(.OH)的能力也有不同程度地增强,其中增幅最大的碘酸钾质量浓度是0.4,g/L.以上结果表明,碘酸钾处理可以增强杜氏盐藻的抗氧化能力.     

杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2 基因的克隆及序列分析

根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Mesostigma viride 等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii 92%,Nephroselmis olivacea 88%,Pinus thunbergii 88%,Amborella trichopoda 88%,Chlorella vulgaris 88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A T)含量明显高于(G C)含量.     

盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻，可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油，在甘油代谢途径中，3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶，且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布，我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心，获得盐生杜氏藻的完整叶绿体，用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

绿色荧光蛋白标记S2P在集胞藻6803中的表达

为研究集胞藻6803中两个S2P同源蛋白酶Slr0643和Sll0862的功能,分别在两个蛋白酶的羧基端添加增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签,构建了两株转基因集胞藻psbA2::0643GFP-Cmr/△0643-Kmr和psbA2::0862GFP-Cmr/△0862-Kmr.通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测到egfp基因的转录表达,通过激光共聚焦显微镜检测到转基因集胞藻细胞发出的绿色荧光蛋白荧光,表明带EGFP标签的S2P融合蛋白在psbA2启动子调控下正确表达.     

不同氮源对盐生杜氏藻生长和β-胡萝卜素积累的影响

研究了 Ｎａ Ｎ Ｏ３、 Ｎ Ｈ４ Ｃｌ和脲 ３ 种不同氮源对盐生杜氏藻生长和 β胡萝卜素积累的影响．结果显示,在０．０５～０．５ ｇ／ Ｌ 浓度范围内,较高浓度 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 对杜氏藻生长有利． Ｎ Ｈ４ Ｃｌ对杜氏藻的生长有毒害作用,０．２ ｇ／ Ｌ 的浓度即对杜氏藻生长有明显抑制作用,脲在０．１～１．８ ｇ／ Ｌ 的浓度范围内对杜氏藻的生长有促进作用．但当脲浓度达到 ３．０ ｇ／ Ｌ 时,生长速度又有所下降;杜氏藻细胞中β胡萝卜素积累量与培养基中 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 浓度成反比．在室外强光照下,以 ０．１ ｇ／ Ｌ 低浓度脲和 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 作为氮源,杜氏藻细胞均可积累较高的 β胡萝卜素含量．本文的实验结果提示,低浓度脲有利于杜氏藻细胞生长和 β胡萝卜素积累,可作为良好的氮源．