水稻佳辐占成熟种胚培养及其悬浮细胞系的建立

以优质早籼稻佳辐占成熟种胚为材料．研究外植体大小、激素对成熟种胚愈伤组织诱导率的影响，并高频快速建立起水稻胚性悬浮系．结果表明：在外植体较大并只添加2，4-D-种激素时，就可获得较高的愈伤组织诱导率，2，4-D浓度为1．5mg／L时，诱导率达95％；浓度为2mg／L时．诱导率可达100％．佳辐占成熟种胚组织培养最佳的条件为适当大小的外植体和添加浓度为2mg／L2，4-D．以4周龄的胚性愈伤组织为材料可高频快速建立起均质、分散性好的水稻胚性悬浮系，5周龄以上的胚性愈伤组织较难建立起水稻胚性悬浮系．     

抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织的诱导及增殖

以抗松材线虫病赤松未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段、激素种类及浓度以及碳源等对胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚为胚性愈伤组织诱导的适宜外植体,2,4-D和6-BA是最优激素组合,麦芽糖比蔗糖、葡萄糖更有利于胚性愈伤组织的诱导。抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织诱导率总体较低,以DCR为基本培养基,添加2 mg/L 2,4-D和1 mg/L 6-BA时诱导率最高为5.0%,诱导的胚性愈伤组织在增殖培养基上能够稳定增殖。     

青钱柳幼胚愈伤组织的诱导

以青钱柳幼胚为外植体,研究了不同幼胚期、基本培养基种类、植物生长调节剂种类及其浓度配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,不同发育期的幼胚诱导出的愈伤组织在形态上差异较大,青钱柳种子发育至子叶胚中期较适合愈伤组织的诱导。青钱柳幼胚愈伤诱导时基本培养基以改良DKW效果最佳,诱导率达到了88.89%,且无褐化现象;含2,4-D与KT组合的培养基较适宜愈伤组织的诱导,其中2,4-D(0.5 mg/L)+KT(2.0 mg/L)和2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的组合对青钱柳幼胚诱导愈伤组织效果最佳,诱导率分别为80.00%和78.33%。     

柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导及植株再生

为探索柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导技术,选取柳杉4个家系,采集其尚未完全成熟的种子进行愈伤组织的诱导,并经器官发生再生途径得到再生植株。利用6-BA、2,4-D等激素种类及其浓度的正交设计,研究各因素及其交互作用对柳杉种子合子胚愈伤组织诱导的影响。结果发现:柳杉4个家系的愈伤组织诱导量在8月中旬采种时呈明显上升,至8月底时各家系的子叶胚愈伤诱导率达到最高,其中57号家系愈伤诱导率最高,达92%。柳杉4个家系,在不同激素组合中愈伤诱导率存在着一定的差异。其中57号家系子叶胚在DCR+6-BA1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L培养时,愈伤组织诱导率达到最高,且诱导出来的愈伤组织状态为白色、干燥、无针状突起,结构紧密。愈伤组织在DCR培养基上成功获得再生植株。     

半夏疏松愈伤组织诱导的研究

获得生长快速，疏松型愈伤组织是植物细胞悬浮培养的前提．用半夏叶片作外植体，采用单因子法，在添加不同浓度的2，4-D和BA的MS固体培养基上诱导半夏愈伤组织，比较愈伤组织的诱导率、性状和长势，其中当MS 3.0mg／L2，4-D 0．5mg／LBA时，愈伤组织诱导率和长势最好，为疏松愈伤组织系．结果表明：相同激素，不同浓度配比对愈伤组织诱导率、长势和发生的性状有明显的影响．     

两种激素对康乃馨叶片愈伤组织诱导的影响

本实验主要利用NAA与2,4-D两种激素分别在浓度为0．5mg／L、1．0mg／L下对康乃馨叶片进行愈伤组织诱导培养，得出NAA与2,4-D对康乃馨叶片的愈伤组织诱导结果，从而确定MS培养基中NAA浓度为10mg／L时诱导率为佳。     

普通油茶体胚再生体系研究

为构建农杆菌介导的油茶遗传转化受体系统,选择普通油茶‘长林’4号、53号和166号的幼胚为外植体材料,进行多因素多水平的组织培养试验。结果表明:培养基的p H对愈伤组织诱导率影响不显著,愈伤组织的诱导率受油茶品种影响极显著;‘长林’53号的幼胚极易实现胚性愈伤组织诱导和完整植株再生,MS培养基是最佳培养基,2,4-D和TDZ为幼胚较敏感的植物激素,对愈伤组织诱导影响最大;当MS+2 mg/L 2,4-D+0.5mg/L TDZ处理时,‘长林’53号体胚诱导率为98%;MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+500 mg/L CH处理时,‘长林’53号体胚诱导率为89.6%。在不同2,4-D、KT、TDZ和添加物水平的L9(34)正交试验中,除3个处理外,其他处理组合的‘长林’53号体胚诱导率都达到100%。已分化的胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上,可以实现胚状体的萌发、生长及完整植株再生。     

粳稻成熟胚愈伤组织诱导及其分化培养体系的建立

为了促进新型高产水稻品种的抗病性,以粳稻成熟胚为外植体,通过诱导培养基、继代培养条件、分化培养路线、光照强度和蔗糖浓度的优化,建立了适合新稻18和豫粳6号的高效再生体系.结果表明:选择适宜的培养基是提高愈伤组织诱导率及愈伤组织质量的基础.新稻18和豫粳6号的水稻成熟胚诱导愈伤组织的培养基分别为MB1(MSB5+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L+KT 1 mg/L+ABA 1 mg/L)和MB2(MSB5+2,4-D 3 mg/L+6-BA 1mg/L+ABA 0.5 mg/L),愈伤诱导率分别达95.24%和91.07%;愈伤组织剥离后的继代培养基为MB3(MSB5+2,4-D 3.5 mg/L+6-BA 1.5 mg/L);愈伤组织的分化培养路线为三步分化法MSD0/N6B5D0→N6B5D2→MSD0,适宜的分化培养温度为33℃,光照强度为43.75μmol.m-2.s-1.新稻18和豫粳6号的愈伤分化率最高分别达到99.3%和83.33%.     

新疆海岛棉新海15体细胞胚胎的发生及植株再生

为了扩展可再生棉花的基因型,选取新疆自育海岛棉品种新海15的胚珠为外植体,利用组织培养的方法进行再生体系的建立。结果表明:含0.5mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D的MSB培养基,在暗培养条件下可诱导胚珠,产生初始愈伤;愈伤分化则以含0.05/0.1mg/L KT和0.1mg/L 2,4-D的MSB培养基效果较佳;选取浅黄色、结构疏松的愈伤组织在含较高浓度IBA和较低浓度KT、2,4-D的3种调控培养基上依次继代,以此实现胚性愈伤组织的增殖及细胞状态调控;液体悬浮培养和干燥胁迫处理均有利于胚性愈伤的体细胞胚胎诱导;子叶胚的萌发及植株再生则以含谷氨酰胺和天冬酰胺的1/2 MSB培养基效果较佳。     

日本结缕草茎节和愈伤组织再生体系的优化

分别以日本结缕草的成熟胚和茎节为外植体,建立并优化了2套组培再生体系.实验结果表明:利用成熟胚诱导愈伤组织,适宜诱导培养基为MS基本培养基添加2 mg/L 2,4-D配合0.2 mg/L 6-BA,诱导率为42.5%;继代培养可改善愈伤组织状态,增加胚性,其中增加培养基渗透压,并适当添加ABA(0.2 mg/L),可明显提高胚性愈伤组织比率;继代2次后的愈伤组织在3种细胞分裂素6-BA,KT,ZT适当配比的分化培养基上,分化率可达到50%~75%.在以茎节为外植体的组培体系中消毒处理和预培养是比较关键的环节;预培养时MS培养基效果优于1/2 MS,在MS基本培养基中添加0.25 mg/L KT,1.0 mg/L ZT和0.1 mg/L NAA为比较适合的芽诱导培养基,诱导率可达37.9%.同时,比较了两套再生体系的优缺点,为日后日本结缕草的遗传转化奠定基础.