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相似文献
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1.
以蓝细菌Plectcnemaboryanum内源小质粒pPbs(1.5kb)和E。coli质粒载体pBR322(4.3kb)为材料,用限制性内切核酸酶ClaⅠ分别消化,经T_4DNA连接酶连接,转化E.coliHB101感受态细胞,在含Amp(Ap)和含Tet(Tc)的LB琼脂培养基上筛选出Amp ̄rTet ̄s的转化子,提取转化子的质粒,用ClaⅠ消化,得1.5kb和4.3kb两片段,表明转化子所含质粒是pPbs和pBR322的重组质粒,定名为pPRS-1。  相似文献   

2.
耐碱细菌NTT36耐碱基因的克隆及表达产物的分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
耐碱芽孢杆菌NTT36总DNA经EcoR1酶不完全消化,与质粒pUC18的EcoRRI酶切产物在体外重组后,转化大肠杆菌HB101,在碱性平板上直接筛选耐碱转化子,转化经检测具有氨苄青霉素抗体,分析表明转化子具有15kb大小的重组质粒,用此重组质粒转化大肠杆菌HB101,DH5a和XL1-Blue,均产生大量同时具有耐碱性和Amp抗性的转化子,通过Southern杂交和点杂交证明此重组质粒(定名为  相似文献   

3.
利用大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8为载体,经HindⅢ-BⅠ完全消化后与HindⅢ-BamHⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色体DNA进行体外连接,转化E.coliHB101感受 含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子。  相似文献   

4.
PheAB基因在棒状杆菌染色体上的整合   总被引:1,自引:0,他引:1  
改造大肠杆菌质粒pLCX31,切除其中的xylE基因得到大肠杆菌质粒pJL01.将源于大肠杆菌分枝酸变位酶-预苯酸脱水酶基因2.3kb BamHI片段克隆到大肠杆菌质粒pJL01中启动子P32的下降,构建成质粒pJL02。再在pJL02的HindⅢ位点接入棒状杆菌染色体的HindⅢ消化的随机片段,构建成带不同棒状杆菌染色体片段而不带棒状杆菌自主复制顺序的棒状杆菌整合质粒pJL03。  相似文献   

5.
蓝细菌新质粒载体pPRS—1的构建   总被引:2,自引:1,他引:2  
以蓝细胞Plectonema boryanum内源小质粒pPbs(1.5kb)和E.cali质粒载体pBR322(4.3kb)为材料,用限制性内切核酸酶ClaI分别消化,经T4DNA连接酶连接,转化E.coli HB101感受态细胞,在含Amp(Ap)和含Tet(Tc)的LB琼脂培养基上筛选出Amp^rTet^s的转化子,提取转化子的质粒,用ClaI消化,得1.5kb和4.3kb两片段,表明转化子  相似文献   

6.
对嗜麦芽假单胞菌P2菌株的质粒pSH1进行了限制酶切分析,确定了Bg1 Ⅱ,EcoR Ⅰ,Pst Ⅰ,Xba Ⅰ,BamH Ⅰ,Bgl Ⅰ,及Pvu Ⅱ共7种限制性内切酶在pSH1,质粒上的切割位点,前4种酶均为单一切点,后3种依次为2,7,5个切点。通过双酶切和部分酶切的方法绘制了pSH1质粒的限制酶切图谱。将pGP1-2质粒上的卡那霉素抗性基因片段插入pSH1,获得了重组质粒pSH2.pSH2  相似文献   

7.
恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱   总被引:1,自引:0,他引:1  
恶臭假单胞菌(PseudomonasputidaG7)携带的质粒NAH7,经限制性内切酶EcoRI切割后,产生含有萘降解酶全部基因(24,6kb)的片段,此片段插入到载体pUC119的多克隆位点,构成了pKAO质粒,此质粒经HpaI,EcoRI酶切获得的5.1kb片段亚屯隆到pUC119中,衍生出pNN1质粒,绘制出内切酶图谱。从pNNI质粒上切下含目的基因nahI、nahN和nahL的kpnI-kpnI片段(2.3kb).正向插入载体BluescriptⅡSK+中获得重组质粒pNN2,反向插入为pNN3,将其转化到大肠杆菌XL1-Blue中,目的基因得以大量增殖。  相似文献   

8.
对本室筛选的高活性B.t.野生株进行了cry 基因检测,Southern杂交证明cryIAc和cry1C位于质粒上.利用接合转移和电穿孔转化等方法对这些菌株进行了遗传改良研究.结果表明:高效野生株7404、HD-1-X和9510 不易获得并表达外源cry 基因,而高效野生株Bti. t-1897 的电转化频率较高,并获得以Btit-1897 为受体,对甜菜夜蛾、棉铃虫、黏虫和淡色库蚊均有毒力,具有cryIAc、cryIC、cryIV及cyt多价基因的广谱工程菌株.  相似文献   

9.
用PCR法构建乳腺特异性表达非乳蛋白基因的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
将PCR法分别从绵羊和人血基因组DNA中扩增出的绵羊β-乳球蛋白基因(BLG)5'端调控区898bp的片段和人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因(hCD14)成熟肽1245bp的片段连接。连接片段插入pUC19 EcoRI-KpnI位点,构建成pBLG-hCD14质粒。该质粒经KpnI及CcoRI-HindⅢ酶切、PCR法扩增BLG和hCD14分析后,进一步用^32P-BLG探针杂交确证。用Ec  相似文献   

10.
利用启动子探针型质粒pKK232-8从卡介苗染色体DAN的BamHI酶切片段中克隆到4个具启动功能的DNA片段,测定各重组子对氯霉素(Cm)的抗性,其中含3.3Kb外源片段的重组质粒pBCG2大肠杆菌转化子在LM培养基上对Cm抗性可达170×10-6g/mL,作了该片段的限制性酶切图谱.对pBCG2利用SalⅠ位点,亚克隆出4种部分重叠的具启动功能的DNA片段,这4种重组质粒分别命名为pBCG2-1,pBCG2-2,pBCG2-6和pBCG2-8,并分析了其中插入片段的大小及其转化子对Cm的抗性.将pBCG2-2的SalⅠ外源片段插入到分枝杆菌启动子探针型穿梭质粒pEQ3,获得一个可在卡介苗中表达lacZ基因的重组子pEB22.斑点杂交实验证明,具有启动功能的DNA片段来源于卡介苗的染色体DNA.结果表明克隆到一个对大肠杆菌和卡介苗均具启动子活性的DNA片段  相似文献   

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