外周血干细胞采集中血管的选择探讨

外周造血于细胞移植（PBSCT）治疗血液系统恶性肿瘤及实体瘤已取得了很大的进展。但在采集过程中，于细胞数量收集的多少，对PBSCT的成功起着重要的决定作用．笔者就本站2例4次外周血造血干细胞采集．动脉血和静脉血收集过程中CD34细胞的变化作一对照。1．临床资料：急性淋巴细胞性白血病1例．男性29岁；乳房Ca术后复发．肝脾脏转移1例，女性51岁。两例均采用大剂量化疗加惠尔血动员．2材料与方法：外周血造血于细胞的收集采用美国Baxter公司Cd－3000Plus血细胞分高规，双针法，用小容量细胞收集夹（4R5437）和粒细胞分离夹。选择特…     

一种高倍扩增细胞因子诱导杀伤细胞方法

CD3单克隆抗体分别以包被和悬浮的方式刺激人外周血单个核细胞,并以不同的基本培养基(RPMI-1640、IMDM、DMEM/F-12 (1:1)和M199)以及抗氧化剂(2-巯基乙醇和亚硒酸钠)培养细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞,分别测定细胞的扩增、表型(CD3CD56和CD25)和非MHC-限制性毒性(NK 毒性和LAK毒性).结果显示高浓度CD3单克隆抗体包被刺激方式的细胞集落和细胞扩增倍数大于悬浮刺激方式.基本培养基DMEM/F-12 (1:1)的扩增倍数优于其他3种基本培养基.抗氧化剂2-巯基乙醇和亚硒酸钠均有促进CD25抗原形成的作用,亚硒酸钠能提高CIK细胞的毒性,而2-巯基乙醇对于细胞的扩增有促进作用.建立了一种高倍扩增CIK细胞的方法,20 d细胞平均扩增倍数可以达到千倍以上.     

补肾和解复方对再障患者CD34+细胞造血干/祖细胞调节作用的实验研究

目的:探索补肾和解方对再障患者CD34 造血干/祖细胞的刺激增殖和诱导分化作用.方法:采用免疫磁珠法(MACS)分离纯化再障患者骨髓CD34 细胞,造血细胞半固体和液体培养体系加入不同度补和解方制剂,检测对CD34 造血干/祖细胞增殖,形成祖细胞集落的提高率,并用流式细胞仪检测液体培养后细胞表面标记的变化.结果:补肾和解复方制剂(5～100μg.mL)能提高BFU-E、CFU-E、CFU-GEMM集落产率,补肾和解复方制剂50μg/mL是液体培养刺激CD34 细胞体外增殖的最佳浓度.补肾和解复方制剂诱导细胞14天后,细胞表面表达CD334 细胞随补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂100μg/mL时以CD15 细胞数最高,CD71 细胞和G-A 细胞数仅在50μg/mL高于未加补肾和解复方制剂的对照组.结论:补肾和解复方制剂不但能促进再障患者CD34 造血干/祖细胞的增殖,并且能诱导定向分化,具有类生长因子和协同生长因子的作用.     

人脐血造血干细胞在转瓶中的悬浮培养

考察经分离纯化后的人脐血CD34+富集细胞在转瓶中的扩增特性,细胞因子为SCF+IL-3+IL-6。实验发现,无论24孔板静态培养还是转瓶悬浮培养,孔板和转瓶内总细胞数分别扩增了(658.7±98.0)倍和(107.3±15.0)倍,说明CD34+具有很大的扩增潜能。对比两种培养体系下细胞集落扩增倍数发现,培养初期孔板内的集落形成能力要大于转瓶,但到培养后期,孔板内集落形成能力下降速度远大于转瓶。孔板中的CFU-GM(粒细胞-巨噬细胞集落形成单位)扩增倍数在第14天为(5.6±0.4)倍,第21天为(1.7±0.5)倍,转瓶中在第14天为(2.1±0.7)倍,第21天为(1.8±0.5)倍。对比两者的CD34+扩增情况,孔板在第14天CD34+含量达到最大值,而到第21天则大大降低,而转瓶内CD34+含量仍可保持在原第14天的水平,转瓶内的CD34+细胞的扩增也比孔板保持较长时间。     

微囊化基质细胞对脐带血造血干/祖细胞扩增支持

将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养,在添加常规剂量造血生长因子的培养液中,总有核细胞扩增了(15±2.85)倍,CD34+细胞扩增了(5.33±0.32)倍,CFU-Cs扩增了(5.6±1.21)倍.微胶囊可以作为一种新的共培养隔离手段,微囊化兔骨髓间充质干细胞在添加适量血清或者造血生长因子组合的条件下对于脐带血造血干/祖细胞在静态下的扩增有明显的促进作用.     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床研究(附2例报告)

目的:观察自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床疗效.方法:自2006年4月至2007年3月对确诊的2例自愿接受骨髓干细胞移植治疗的糖尿病足患者,在硬膜外麻醉下进行骨髓采集200ml,分离出干细胞,配成干细胞混悬液,按1.0cm×1.0cm距离移植于患肢小腿肌肉处,同时进行足部坏疽部伤口清创.结果:移植后1周患肢冷感、麻木、疼痛、间歇跛行明显好转,2周显著好转,1月后症状缓解,切除坏疽处伤口完全愈合,未出现并发症或不良反应.结论:自体骨髓干细胞移植是治疗糖尿病足的有效方法,且简便,安全,值得临床推广.     

神经网络模型对造血干细胞体外扩增效果评价及预测

采用神经网络技术对造血干细胞HSCs体外扩增能力建立了评价及预测模型.总结了前人的实验结果,共获得341组数据.选取细胞接种密度、细胞因子组合、细胞来源、血清、基质细胞、反应器类型和培养时问等7个影响因子作为网络输入特征参数,分别对有核细胞(nUClear cells,NCs)、CD34 细胞和成集落细胞(colony-forming units,CFU-Cs)进行体外扩增能力的拟合评价及预测.选取124、90及86组实验数据分别用于NCs、CFU-Cs和CD34 细胞为评价指标的神经网络训练;而17、10及14组实验数据分别用于NCs、CFU-Cs和CD34 细胞为评价指标的神经网络预测.结果表明.对NCs、CFU-Cs和CD34 细胞的区间训练准确率分别为85.5%、86.7%和86.1%;区间预测准确率分别为82.4%、70.0%和71.4%.由此可知.人工神经网络的非线性模拟使定量描述HSCs体外扩增效果与培养条件问的关系及预测HSCs的最佳体外扩增条件成为可能.     

干细胞冷冻中细胞浓度对冻存效果影响的观察

目的：观察细胞浓度对造血干细胞冻存效果的影响。方法：使用速率降温仪对１３份由病人采集的外周血干细胞及７份骨髓造血干细胞进行冷冻,观察推荐浓度的细胞（×１０７／ｍｌ）和高浓度的细胞（×１０８／ｍｌ）冷冻复温后有核细胞回收率、台盼蓝拒染率,ＣＦＵ－ＧＭ存活率。结果：推荐浓度的细胞与高浓度的细胞在冷冻复温后有核细胞回收率、台盼蓝拒染率和ＣＦＵ－ＧＭ存活率无明显差异。结论：可适当提高冷冻时的细胞浓度,减少回输悬液量,以减轻临床副作用。     

粒细胞集落刺激因子（G—CSF）对心肌梗死后心室重构与心脏功能的影响

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)能够将骨髓干细胞动员到缺血组织参与组织修复,因而具有治疗心肌梗死的潜力.但是目前国际上对该疗法的效果尚存在争议.为了研究心肌梗死急性期内注射G-CSF对心肌纤维化及心脏功能的影响,将SD大鼠冠状动脉左前降支结扎3h后,皮下注射G-CSF(50 μg/kg/d,共5d)或等量生理盐水.结果显示G-CSF注射5d后,外周血白细胞数量显著增加.3个月后,G-CSF注射显著增加了梗死范围和左心室胶原含量,损害了心脏功能.由以上可见,心肌梗死急性期内给予G-CSF治疗促进了心肌组织纤维化,并导致了心室扩张和心脏功能恶化.     

恶性肿瘤患者住院期间的情绪问题及康复策略

恶性肿瘤患者极易出现不良情绪和心理障碍，影响其转归和预后。中医认为情志为病是肿瘤发生的原因之一，心理康复是临床工作中需重点关注的环节。以恶性肿瘤患者为研究对象，比较了常规心理干预与常规心理干预结合中医综合康复（八段锦、芳香疗法）对患者住院前后情绪、睡眠、心理健康及肿瘤免疫功能的影响，评定指标包括：蒙哥马利抑郁评分（MADRS）、焦虑自评量表（SAS）评分、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、领悟社会支持量表（PSSS）评分、外周血CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴细胞计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果显示，综合康复组出院时的MADRS下降程度、CD4+CD25+T细胞计数的降低程度大于对照组，SAS及PSQI升高程度小于对照组，PSSS的提高程度显著大于对照组，外周血TNF-α的降低程度小于对照组。说明中医综合康复策略有利于改善恶性肿瘤患者抑郁、焦虑、睡眠质量、社会支持感受能力以及抗肿瘤免疫功能。