利用GATA-2调控成分制备组织特异性表达GFP的转基因斑马鱼

ＧＡＴＡ－２是在多种血细胞和神经细胞表达的一种转录因子,调控血细胞和神经细胞的分化。利用斑马鱼ＧＡＴＡ－２基因５’侧翼调控序列和绿色荧光蛋白基因,获得了只在中枢神经细胞表达ＧＦＰ,或在神经细胞和表层细胞都表达ＧＦＰ的转基因斑马鱼种质系,同时还进一步证实了ＧＡＴＡ－２基因在胚胎发育中的时空表达谱。     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．     

CNTF信号转导途径上游的新支路

用活细胞内荧光探针Ｆｕｒａ２／ＡＭ检测ＣＮＴＦ对谷氨酸引起的海马神经细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度升高的快速影响,并观察Ｇ蛋白是否参与。结果表明,谷氨酸可引起海马神经细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度快速升高,并在５００μｍｏｌ／Ｌ范围内呈剂量相关性。ＣＮＴＦ对静息条件下海马神经细胞内的游离Ｃａ＾２＋浓度无显著性改变。但ＣＮＴＦ孵育５ｍｉｎ后,可快速压抑谷氨酸引起的胞内游离Ｃａ＾２＋浓度升高,这一过程有ＰＴＸ敏感     

Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达

对Ｗｎｔ５Ａ,Ｗｎｔ５Ａ受体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ５（ｈＦｚ５）及其信号传导系统下游成分－致癌性β－连环蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）在肾癌细胞系ＧＲＣ－１中表达的变化进行了观察,并定量ＲＴ－ＰＣＲ结果表明ＧＲＣ－１细胞系中Ｗｎｔ５Ａ和ｈＦｚ５的ｍＲＮＡ水平明显高于正常肾细胞系,这一发现被原位杂交结果证实,进上步的研究发现β－连环蛋白的含量明显高于正常肾小管细胞（Ｐ〈０．０１）。应用持异性免疫细胞化学和ＳＳ     

修正RNA的错误剪接提高转基因表达水平

建立了ＷＡＰ基因调控序列指导的人Ｇ－ＣＳＦ乳腺表达的转基因小鼠,在检测出转基因低表达的基础上,采用ＲＴ－ＰＣＲ从转基因小鼠乳腺ＲＮＡ中获得人Ｇ－ＣＳＦ基因,序列分析表明基因缺失第４外显子,与人Ｇ－ＣＳＦ基因组基因比较,缺失部分含有内含子剪接的供体和受体位点,推断Ｇ－ＣＳＦ的第３和第４内含子亦缺水。重新构建了转基因注射构件,其中删除了Ｇ－ＳＦ第３和第４内含子,用其所建立的转基因小鼠,其乳腺表达的Ｇ－     

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤,选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物,在人ＣＤＮＡＹ语文加中筛出一长度为１５３５ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆,其开放读码框码３３４个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性属一新发现的ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该 物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞,暗示该蛋白可能与脑     

转导GST-pi基因表达抑制甲基丙烯酸环氧丙酯的致癌作用

环境中的化学致癌物是引发癌症的主要原因,谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）ｐｉ在防止各种内、外源的对细胞的损害方面起关键性作用,ＧＳＴ－ｐｉ基因与反转录病毒载体（ｐＸＴ１）重组后转染３Ｔ３细胞,使该基因在３Ｔ３细胞中整合和表达,研究发现：ＧＳＴ－ｐｉ的表达可以防止化学致癌物甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导的细胞恶性转化,此结果为进一步探讨ＧＳＴ－ｐｉ在癌症预防领域的作用提供了科学依据。     

人外周血单个核细胞不同亚群对猪内皮细胞的粘附作用

细胞介导的免疫应答是异种器官移面临的主要障碍,细胞粘附是细胞间相互识别的第一步。采用流式细胞术粘附测定法研究了人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中单核细胞（Ｍｏ）、自然杀伤细胞（ＮＫ）和Ｔ淋巴细胞（Ｔ）对猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）粘附的差异性,以及人细胞因子γ－干扰素或／和肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）预刺激ＰＡＥＣ２４ｈ对ＰＢＭＣ不同亚群粘附的影响。ＰＢＭＣ不同亚群对ＰＡＥＣ粘附能力大小以Ｍｏ,     

人肝癌细胞系BEL-7404和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析

蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用,也是功能基因组研究的重要组成部分．通过对人ＢＥＬ－７４０４肝癌细胞系和Ｌ－０２正常肝细胞系表达的蛋白质组ＩＰＧ－ＤＡＬＴ双向凝胶电泳和图象分析,发现７个蛋白点只在肝癌细胞中检测到表达,１４个点只在肝细胞中检测到表达,７８个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化（Ｐ＜０．０１）．两种细胞蛋白质组表达反映在差异表达谱上．双向电泳重复性分析表明 ＩＥＦ方向平均位置偏差为０．７３ ｍｍ, ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方向为０．４４ｍｍ,量的变异为１７．６％一１９．２％．双向电泳的重复性已适合于蛋白质组差异表达的研究,蛋白质组差异表达谱可成为疾病诊断、药物作用分析和生命过程等研究的有用工具．     

35ku的PF18-3分子在小鼠胸腺细胞凋亡亚群上的特异表达

ＰＦ１８－３抗体是一株大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体。在以往的共培养研究中发现该抗体可抑制小鼠胸腺树突状细胞系（ＭＴＳＣ４）诱导的胸腺细胞凋亡作用。目的是观察ＰＦ１８－３抗体识别分子（ＰＦ１８－３分子）的特点及其在ＭＴＳＣ４诱导的胸腺细胞凋亡中的作用。利用流式细胞仪对ＰＦ１８－３分子的表达进行了特性分析，发现ＰＦ１８－３分子除表达于ＭＴＳＣ４表面外，还表达于ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞上，但新鲜胸腺细     

沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析

用ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２,丙烯葡聚糖Ｓ３００柱层析,热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白（ＡＦＰ）,获得了电泳纯的分子量约为５０ｋｕ的ＡＦＰ,经Ｓｈｉｆｆ试剂检验为含糖的ＡＦＧＰ,显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定了该蛋白热滞活性（ＴＨＡ）,用ＤＳＣ测定ＴＨＡ在５ｍｇ／ｍＬ时约为０．３５℃．圆二色性（ＣＤ）分析表明,该ＡＦＧＰ中ａ－螺旋为１１％,反     

利用tet-off诱导表达系统研究Akt的功能

用ＢＡ／Ｆ３β细胞建立了含ｔｅｔ－ｏｆｆ诱导表达系统的细胞株ＢＢＴ,并用对ｔｅｔ－ｏｆｆ应答的荧光素酶报告基因检测证实该系统中基因诱导表达的效果极其显著。随后在ＢＢＴ细胞中转入了对ｔｅｔ－ｏｆｆ应答的Ａｋｔ表达质粒,并筛选了稳定株。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,Ａｋｔ可以极显著地被ｔｅｔ－ｏｆｆ诱导表达。选择了诱导效果最好的单克隆ＢＢＡ进行了Ａｋｔ的功能研究。用ＭＴＴ法检测发现Ａｋｔ可以极显著地抑     

大鼠脑内移植雪旺细胞诱导多巴胺能神经纤维定向长距离再生

将培养的外周雪旺细胞移植到实验性的帕金森病鼠的的纹状体,观察外周ＳＣ能否诱导ＰＤ鼠脑内多巴胺能神经再生。经荧光标记追踪,低亲和力神经因子受体和酪氨酸羟化酶免疫组织化学检查证明;被移植的外周ＳＣ,能在ＰＤ鼠脑内存活并表达ＬＮＧＦｒ;这些ＳＣ能诱导ＰＤ鼠脑内ＤＡ能神经再生并沿着移植的ＳＣ柱向状体延伸。     

星形胶质细胞通过溶酶体释放信号分子ATP

星型胶质细胞是神经系统中数量最多的细胞,过去多认为在神经系统中只起被动的营养和支持作用,而不具备信号处理和传递的功能.近年来研究表明,星形胶质细胞不但表达多种受体和通道蛋白,还可分泌多种营养因子和信号分子,对神经系统的发育和功能的调节起着重要的作用,但星形胶质细胞分泌信号分子的机制还不清楚.     

钙调素拮抗剂诱导人肺癌细胞PLA-801凋亡机理研究

用２０μｍｏｌＬ＾－１的ＴＦＰ处理人肺癌细胞ＰＬＡ－８０１,强烈抑制了细胞的增殖。软琼脂实验发现加药组细胞集落形成率为对照组的６３．６％,这表明部分细胞失去了在软琼脂中形成集落的能力。流式细胞光度术显示,加药组细胞Ｇ１期峰前出现了程度性细胞死亡的特征峰,荧光染料Ｈｅｏｃｈｓｔ３３３４２染色后,荧光显微镜下观察,可见到部分细胞凋亡时核凝集,边化,断裂的情形。     

小鼠胸腺髓质CD4-CD8+单阳性细胞表型分析

对胸腺髓质型ＣＤ４＾－ＣＤ８＾＋细胞进行表型分析,发现这群经有型不均一、外周成熟的ＣＤ８＾＋Ｔ有型为ＴＣＲαβＣＤ３＾＋Ｑａ－２＾＋ＨＳＡ＾－３Ｇ１１＾－６Ｃ１０＾－,而胸腺髓质型ＣＤ４＾－ＣＤ８＾＋细胞Ｑａ－２＾＋细胞占２０％,ＨＳＡ＾＝者占３３％,３Ｇ１１＾－者占３０％,６Ｃ１０＾－者占７０％,这４种表面标志表达的不同提示髓质区ＣＤ８单阳性细胞仍需经历一个表型成熟的过程,根据这４种表面标志在细     

转化神经基因组学:解读复杂大

正神经基因组学领域近期的发展正在以史无前例的规模探索大脑的奥秘。基因组学技术的发展同神经生物学工具结合在一起,催生了大量新发现,改变了我们对大脑连接性及其向复杂大脑疾病过渡的认识。重要的例子是:对神经毒性反应性星形细胞的鉴定形成了我们对大脑线路的认识,星形细胞由受激活小神经胶质细胞诱导的,可以导致神经元和少树突胶质细胞的死亡。这些畸变的星形细胞在     

飞秒激光刺激诱导星形胶质细胞调控海马神经元同步钙振荡

大量证据表明星形胶质细胞通过钙信号积极参与脑功能. 在星形胶质细胞的功能研究中, 诱导其产生钙信号是一项关键技术. 然而, 传统的刺激方法不能同时满足非接触、无损、高时空精度的要求, 本研究小组提出的飞秒激光刺激星形胶质细胞的方法能够弥补这些不足. 在此基础上, 验证了该方法在海马神经网络水平上研究星形胶质细胞功能的应用. 混合培养的海马神经网络中, 星形胶质细胞被飞秒激光刺激后: (1) 诱导神经元同步钙振荡; (2) 即时性干预神经元自发同步钙振荡; (3) 调制神经元的高频自发同步钙振荡. 因此, 通过演示光诱导的星形胶质细胞钙信号调控海马神经元同步钙振荡, 证明飞秒激光刺激方法能够为星形胶质细胞在神经网络中的功能研究提供强有力的工具.     

纤溶酶原激活因子和抑制因子在生殖中的作用

综述了由纤溶酶原激活因子（ＰＡ）和抑制因子（ＰＡＩ）所调控的局部定向纤蛋白水解在生殖作用研究中的最新进展。组织型（ｔ）ＰＡ（ｔＰＡ）和Ｉ型ＰＡＩ（ＰＡＩ－１）在卵巢不同细胞中的协同表达参与排卵和黄体（ＣＬ）萎缩调控过程,在早期黄体组织中尿激酶型（ｕ）ＰＡ（ｕＰＡ）和ＰＡＩ－１活性明显增高,ｕＰＡ和ＰＡＩ－１的协同表达可能与黄体形成过程中组织重建和血管发生密切相关。实验证明,ＰＡ系统在精子发生和成熟     

P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞,研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点,构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１,进一步用 Ｇ－４１８筛选,获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ,Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析,表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞,证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型,与对照组相比,Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制,流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明,癌基因ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。