蜂毒新多肽部位BV I-2H的分离纯化及其生物学活性

利用蜂毒治疗类风湿性关节炎(RA)已有悠久的历史,并取得了良好的治疗效果.为研究其抗炎机制及确定有效的抗炎成分,利用凝胶过滤层析、肝素亲和柱层析、高效液相色谱等方法分离蜂毒多肽,并观察蜂毒多肽对小鼠脾淋巴细胞细胞周期、细胞因子合成及IκBα蛋白磷酸化的影响.高效液相色谱检测分离得到的蜂毒多肽BV I-2H为单一对称峰,电喷雾质谱检测结果表明BV I-2H是蜂毒多肽混合物,其主要成分的分子量为644.8 u.BV I-2H可抑制ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖和IL-1合成,可使ConA诱导的脾淋巴细胞呈现明显的G2/M期阻滞.此外,BV I-2H可抑制PMA诱导THP-l细胞合成TNFα,抑制TNFαmRNA的表达及IκBα蛋白磷酸化.实验结果提示,蜂毒多肽BV I-2H是蜂毒发挥抗炎作用的重要组成成分.     

蜂毒新多肽部位BVⅠ-2H的分离纯化及其生物学活性

利用蜂毒治疗类风湿性关节炎（ＲＡ）已有悠久的历史，并取得了良好的治疗效果．为研究其抗炎机制及确定有效的抗炎成分，利用凝胶过滤层析、肝素亲和柱层析、高效液相色谱等方法分离蜂毒多肽，并观察蜂毒多肽对小鼠脾淋巴细胞细胞周期、细胞因子合成及ＩκＢα（蛋白磷酸化的影响．高效液相色谱检测分离得到的蜂毒多肽ＢＶⅠ－２Ｈ为单一对称峰，电喷雾质谱检测结果表明ＢＶⅠ－２Ｈ是蜂毒多肽混合物，其主要成分的分子量为６４４．８　ｕ．ＢＶⅠ－２Ｈ可抑制ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖和ＩＬ－１合成，可使ＣｏｎＡ诱导的脾淋巴细胞呈现明显的Ｇ２／Ｍ期阻滞．此外，ＢＶⅠ－２Ｈ可抑制ＰＭＡ诱导ＴＨＰ－１细胞合成ＴＮＦα，抑制ＴＮＦα　ｍＲＮＡ的表达及ＩκＢα蛋白磷酸化．实验结果提示，蜂毒多肽ＢＶⅠ－２Ｈ是蜂毒发挥抗炎作用的重要组成成分．     

蜂毒新多肽部位BVⅠ-2H的分离纯化及其生物学活性

利用蜂毒治疗类风湿性关节炎（RA）已有悠久的历史，并取得了良好的治疗效果，为研究其抗炎机制及确定有效的抗炎成分，利用凝胶过滤层析、肝素和柱层析、高效液相色谱等方法分离蜂毒多肽，并观察蜂毒多肽对小鼠淋巴细胞细胞周期、细胞因子合成及Iκβα蛋白磷酸化的影响。高效液相色谱检测分离得到的蜂毒多肽BV I－2H为单一对称峰，电喷雾质谱检测结果表明BV I－2H是蜂毒多肽混合物，其主要成分的分子量为644．8u。BV I－2H可抑制 ConA诱导的上鼠脾淋巴细胞增殖和IL－1合成，可使ConA诱导的脾淋巴细胞呈现明显的G2／M期阻滞。此外，BV I－2H可抑制PMA诱导THP－1细胞合成TNFα，抑制TNFαmRNA的表达及Iκβα蛋白磷酸化。实验结果提示，蜂毒多肽BV I－2H是蜂毒发挥抗炎作用的重要组成部分。     

33ku蛋白含有相同分子量但不同等电点的多肽

从光系统Ⅱ颗粒分离的３３ｋｕ蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，仅显一条蛋白带。低渗缓冲液透析数小时后再进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，发现３３ｋｕ蛋白被部分降解成若干条低分子量的谱带。表明分离的３３ｋｕ蛋白可能含有某种潜在的蛋白酶。等电聚焦泳分析发现，未经透析的３３ｋｕ蛋白结合的许多不同等点的多肽，双向电泳分析还发现它们的分子量几乎与３３ｋｕ蛋白相同。     

大鼠淋巴细胞中存在神经肽降钙素基因相关肽

降钙素基因相关肽(calcitonin gene-relatedpeptide,CGRP)是于1982年在人和哺乳动物神经系统中发现的一种含37个氨基酸残基的神经肽。它具有广泛的生物学效应,对心血管、消化、呼吸、骨胳肌、泌尿、生殖以及免疫等系统均有调节作用。近年来,在免疫细胞中发现了20余种神经内分泌多肽,但迄今为止尚未见CGRP在免疫系统中合成和释放的报道。本文选用大鼠胸腺和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,通过放射免疫分析和反相高效液相色谱(HPLC)分析,测定这些淋巴细胞中降钙素基因相关肽免疫活性物质(CGRP-like immunoreactivity,CGRP-LI)的含量,并鉴定其化学性质。     

金属-2-(5-溴-呲啶偶氮)-5-二乙氨基酚-溴代十六烷基三甲胺螯合体系的高效液相色谱研究

关于多种配体与相应金属形成螯合物的高效液相色谱(HPLC)研究已有专门综述,但金属-2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚(5-Br-PADAP)螯合物的HPLC研究报道不多。现有文献中通过一次分离来检测多金属离子的报道较少,特别是在色谱流动相中添加表面活性剂和氯化钠时探讨金属螯合物的色谱保留行为的研究至今尚未见报道。     

液相色谱、毛细管电泳及质谱用于蛇毒蛋白的分离与鉴定

现代分析技术的发展为生物大分子的分离鉴定提供了强有力的手段,因而大大加速了生命科学的研究进展.近几年,毛细管区带电泳和飞行时间质谱在分离和鉴定生物大分子方面显示了快速、简便、高效等特点,本文采用毛细管区带电泳和飞行时间质谱,对常压色谱分离得到的蛇毒蛋白中的某些活性组分进行了分离和鉴定,并讨论了三种技术在分离蛇毒蛋白上的差异.     

浅谈高效液相色谱在食品检测中的应用

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,具有高效、高灵敏度、范围广、流动相选择范围宽等优点,因此在生物化学、药物及食品卫生领域广泛应用,是现代分离测定的重要手段.文章针对液相色谱在食品检测中的应用进行了分析.     

乳腺癌特异性多肽介导生物大分子体内外效应

探讨乳腺癌特异性多肽PI携带外源性生物大分子靶向抗肿瘤的作用.将分离纯化获得的融合蛋白PI-EGFP与靶细胞MDA-MB-231体外共培养,探讨融合蛋白与靶细胞的结合能力;将此融合蛋白经尾静脉及肿瘤局部注射入荷瘤裸鼠体内,探讨其在肿瘤部位的聚集程度;利用分子克隆技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk,诱导表达、分离纯化、鉴定获得的融合蛋白PI-HSV-TK,将不同浓度的融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,经更昔洛韦(ganciclovir,GCV)作用后,探讨PI-HSV-tk对细胞的靶向杀伤效应.荧光显微镜下观察,在靶细胞内可检测到绿色荧光信号,经尾静脉及局部注射融合蛋白PI-EGFP后,在不同组织器官可见不同强度的荧光信号,在尾静脉注射组的肾脏和肿瘤部位可检测到荧光信号,而局部注射组仅在肿瘤部位可检测到;成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk;分离纯化获得高效表达的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定融合蛋白的表达正确;CCK-8法及流式细胞仪检测显示,GCV对转导融合蛋白的MDA-MB-231细胞有杀伤作用,IC50值为152.64μg/mL.乳腺癌特异性转导多肽能携带生物大分子进入靶细胞,并携带具有杀伤效应的物质,使其发挥靶向治疗作用,为进一步探讨该多肽作为靶向性载体奠定实验基础和理论依据.     

人参多肽的提纯与氨基酸序列测定

Ando等在研究人参治疗糖尿病的有效成分中,发现人参中含有抗脂肪分解的14肽。曲于人参中该肽含量甚低,分离提纯很困难,制剂中又往往含人参皂甙等杂质,难以供序列分析用,所以至今未报道氨基酸序列。我们在工作中发现人参多肽具有疏水性和耐热性,据此提出一种简便的分离提纯方法,制剂可直接用于氨基酸序列测定。我们用DABITC/PITC双偶合微量手工液相顺序法测定该14肽的氨基酸顺序为E-T-V-E-I-I-D-S-E-G-G-G-D-A。     

嗜热细菌Bacillus caldolyticus 275和Bacillus stearothermophilus N2-3468 DNA碱基组成的分析

DNA的碱基G+C克分子百分数在细菌分类学上已经成为一项有参考价值的数据.我们用纸层析、高压液相层析以及解链温度(T_m)等三种方法分析了三株最适生长温度都不一样的芽孢杆菌(高度嗜热芽孢杆菌     

植物细胞50 ku类角蛋白与β微管蛋白共存

用选择性抽提法从悬浮培养的烟草原生质体中得到类中间纤维蛋白,免疫印迹反应显示其主要成分是分子量分别为64,58,55,54,50,45 ku的6种类角蛋白,其中50 ku蛋白与微管蛋白多抗亦有免疫交叉反应. 双向电泳显示50 ku蛋白包含两种多肽成分. 对分离纯化得到的50 ku蛋白进行部分序列测定,结果表明两种多肽成分分别为新的未知序列蛋白和β微管蛋白. 结合以往的实验结果,证明在植物中间纤维成分中,50 ku 类角蛋白与β微管蛋白相结合,可能由此介导了植物中间纤维与微管共分布.     

高效液相色谱法监测血中氯氮平浓度

氯氮平(clozapine)是一种新型结构的抗精神病药,对各型精神分裂症均有效。国外曾报道用气相色谱分析(GC)和放射免疫方法(RIA)测定该药的血浓,但操作繁琐,花费昂贵,准确性差。我们发展了一种快速简便地测定血中氯氮平浓度的高效液相色谱(HPLC)     

利用化学反应由C_(60)/C_(70)混合物中制备纯C_(60)

自从Kratschmer等人报道了宏观量富勒烯(Fullerene)的制备方法以来,国内外又有许多科学家相继发表了一些改进方法,这些方法都能生产克量级的C_(60)和C_(70)的混合物.由于C_(60)和C_(70)性质相差不大,分离起来比较困难.文献报道方法主要有高压液相色谱料(HPLC)和以中性氧化铝、石墨、活性碳等为填料的柱色谱法.这类方法主要都是利用C_(60)和C_(70)的物理性     

小鼠血清脱氧核糖核酸结合蛋白的研究

细胞内的脱氧核糖核酸结合蛋白(DBP),种类繁多,在复制、转录、基因调控等细胞的主要生命环节中起着重要作用。但细胞外的生物体液中的DBP尚无系统研究。本文以小鼠为动物模型,以脱氧核糖核酸纤维素亲和层析法与聚丙烯酰胺凝胶电泳为主要分离手段,对小鼠血清DBP的含量在上述亲和层析柱上的层析行为、分子量分布范围等进行了观察和分析。小鼠血清取自20克左右瑞士种小白鼠,每批杀鼠20—30只,制备混合血清。DNA纤维     

四种新的气相色谱固定相-苄基取代CD衍生物的合成

环糊精(Cyclodextrin,简称CD)是6个以上D-( )-葡萄糖分子通过a→1.4连接而形成的聚合体.自从1988年Schurig等人成功地将改性CD用于拆分对映异构体以来,约有50多种衍生物CD被合成,并有多种商品柱问世,是目前最引人注目的色谱固定相和高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)的手性分离选择剂.鉴于含苯基的聚硅氧烷具有很好的分离性能,在CD分子中引入芳香环估计也会提高其选择作用.据文献[4]记载,全苯基CD的分离性能不理想,为了进一步研究苯环对CD主体分子分离效果的影响,本文合成了4种新的含苄基CD衍生物,初步研究结果发现产物具有良好的热稳定性、易成膜性,可用做中温毛细     

学术会议简讯

全国脂肪酸分析技术交流会议全国脂肪酸分析技术交流会议于1965午4月25—29日在上海召开。参加会议的有来自全国16个有关单位的代表28名。在会议上宣读并讨论了中国科学院有机化学研究所、中国科学院林业土壤研究所、第一轻工业部食品研究所等五个单位提出的用气体层析、纸层析、X射线衍射等分析方法来分离、分析、纯化以及鉴定脂肪酸的12篇工作报告。与会代表一致认为,气体层析是比较先进的方法。它的分析速度快、分辨能力强、精确度高,但要求应用较为复杂的仪器。纸层析法所需的设备简单,     

柞蚕(Antheraea pernyi)胚胎发育期蜕皮甾类的变化

昆虫胚胎中蜕皮周期的描述促使一些学者去研究胚胎蜕皮是否与幼虫和蛹的蜕皮一样也受激素的控制。Lagueux等1979年指出飞蝗整个胚胎发育期卵中游离蜕皮甾类的变动与胚胎表皮沉积期紧密相关。我们用薄层层析法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)研究了柞蚕胚胎发育期的游离蜕皮甾     

在微流芯片中实现可控PH梯度

介绍以软光刻(soft-lithography)为主要手段的微加工技术制备应用于等电聚焦及高效液相色谱的PH值梯度微流芯片. 此种PH梯度芯片具有容易加工、可根据需要快速得到不同范围的PH值梯度、精度可控制、IEF与分离有机结合为一体、等电聚焦所需电场低、PH值梯度不随时间改变等优点, 将在芯片中样品的制备、分离、分析将有广泛的应用.     

用毛细管电泳法分离氯霉素代谢物2-硝基苯基-2-氨基-3-羟基丙酮的对映异构体

毛细管区带电泳(CZE)以其卓越的分高效能、简易的操作手续赢得了众多科学家的重视,成为生命科学领域不可缺少的分离手段,是气相、液相和超临界色谱不可取代的高效分离工具.