口蹄疫抗原决定簇融合基因转化水稻的研究

将口蹄疫O型抗原决定簇和A型抗原决定簇构成的融合基因O21-O18-A21经农杆菌介导转入粳稻品种日本晴中．经潮霉素筛选．获得再生植株207株．提取它们的总DNA进行PCR检测．其中193株扩增出和阳性对照相同的900bp和450bp两条带．转基因阳性率达93．2％．抽取部分阳性植株进行PCR—Southern杂交检测及报告基因GUS检测．同样证明融合基因已经整合到日本晴基因组中．     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点，具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点．本实验通过农杆菌介导的遗传转化．以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜．通过筛选．获得潮霉素抗性愈伤组织。经胚状体再生得到156棵抗性苗．通过GUS染色检测．GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达．并在部分抗性苗中稳定表达．对部分抗性植株进行PCR和PCR—Southern杂交检测．证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中．     

MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究

研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141～160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景.     

副溶血弧菌K抗原基因决定簇的破译及液相芯片检测方法的建立

副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐致病菌,被认为是多血清型引起的主要食源性致病菌.通过全基因组测序技术,实现对K3、K29、K61菌株的测序.并且使用相关软件对测序数据进行基因预测和功能注释从而实现抗原决定簇的破译.鉴定的3个血清型的K抗原基因簇,表现出高程度的遗传多样性.根据K抗原基因决定簇的特异基因,建立了用于检测和鉴定这3种K血清型的液相芯片检测体系.本研究中破译的副溶血弧菌K抗原基因决定簇以及基于分子技术建立的检测分型体系,为高效的细菌检测提供了可能.     

大肠杆菌O96 O-抗原基因簇的破译和特异基因的鉴定

大肠杆菌O96血清型的大肠杆菌近年来频繁地出现于分离到的致病菌株中,在发展中国家和发达国家均有发现,有造成爆发性流行的可能．本文利用鸟枪法对大肠杆菌O960～抗原基因族进行测序,序列全长9415bp,用生物信息学的方法进行序列分析,共发现7个基因,分别是：吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),O-抗原转运酶基因(wzx),O-抗原聚合酶基因(wzy)和糖基转移酶基因(4个)．本文分析了大肠杆菌O96和K12(016)的O-抗原基因族中吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因和O-抗原转运酶基因的进化关系,确定了吡喃型UDP-半乳糖变位酶的基序;用PCR的方法筛选出了2个针对大肠杆菌O96的特异基因,可以用于基因芯片或PCR方法快速检测大肠杆菌O96。     

人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探

角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor, KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行GUS检测发现有44.7%植株呈阳性,PCR检测的结果也显示有52.6%的植株为阳性植株.     

利用花粉管通道途径获得转基因小麦

将带有NPT-Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农103,共结实1025粒,其中有718粒种子可以萌发出幼苗,在这718株幼苗中,经卡那霉素筛选,得到75棵绿色抗性植株,提取这些抗性植株的叶片总DNA,作NPT-Ⅱ基因的PCR扩增,有37株为阳性,转化率为5.16％,对其中9个PCR阳性植株的Southern杂交检测结果表明它们均为转基因植株.     

禽流感病毒H5HA基因在马铃薯中的表达

将编码禽流感病毒H5N1亚型HA基因(H5HA)的cDNA片段与CaMV35S启动子融合,通过农杆菌介导法转化马铃薯.分别用PCR,RT-PCR和Western斑点杂交方法对重组H5HA基因在马铃薯植株中的表达情况进行分析.实验结果表明,获得的12株转基因植株中,11株为阳性.Western斑点杂交检测表明H5HA重组蛋白已在马铃薯体内表达.这一结果将为利用马铃薯作为生物反应器生产禽流感口服疫苗提供理论依据.     

痢疾志贺氏菌8型O-抗原基因簇的破译和特异基因的筛选

志贺氏菌是引进细菌性痢疾的重要病原菌，尤其对发展中国家卫生条件不平衡的地区，可造成爆发性流行．本研究用鸟枪法对痢疾志贺氏菌8型的O—抗原基因簇进行测序，得到序列全长为9227bp．用生物信息学的方法进行序列分析，共发现7个基因，分别是：单糖合成基因gne，糖基转移酶基因(4个)；O—抗原转运酶基因wzx和O—抗原聚合酶基因wzy．并用PCR的方法筛选出了针对痢疾志贺氏菌8型细菌的特异基因，可以用于基因芯片或PCR方法对痢疾贺氏菌8型细菌的快速检测．