克雷伯氏菌产物耐受突变株的发酵工艺

克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)是1,3-丙二醇(1,3-PD)生产菌。研究了经60Co诱变获得的一株产物耐受突变株KpA6010进行了发酵初期供氧时间、供氧与否和发酵过程中后期维持甘油浓度对1,3-PD生产及副产物形成影响。结果显示,采取全厌氧发酵和中后期维持甘油质量浓度20 g/L的工艺对1,3-PD生产有利。5 L罐全程厌氧补料分批培养结果表明,1,3-PD的产量、摩尔得率和生产强度分别达到70.81 g/L、0.649和2.083 g/(L.h),较出发菌分别提高了54.3%、52.0%和50.7%。     

粗糙脉孢霉瓜氨酸需求型突变株的分离

对粗糙脉孢霉双突变株ａｒｇ－４,ａｒｇ－１３进行了紫外诱变,利用过滤富集法分离了不能利用乌氨酸,能利用瓜氨酸的３个突变株,利用互补针分离的约６０个突变株分成了４个互补群,这可能代表４个独立的基因位点。     

洛巴口蘑突变株抑制真菌作用的研究

采用平板和液体试管培养方法,对洛巴口蘑突变株分泌的胞外物质进行抗灰绿青霉、产黄青霉、黑曲霉的测定.结果显示:洛巴口蘑突变菌株具有明显的抗真菌作用,而原始菌株不具此活性,抗真菌物质的应用价值有待进一步研究.     

应用MATLAB软件构建谷氨酸温度敏感突变株补料分批发酵动力学模型

根据已建立的谷氨酸发酵数学模型，应用MATLAB软件对模型进行最优参数估计和非线性曲线拟合，得到的结果相对误差较小，全局收敛性最小。通过与实际发酵过程比较，较好地反映了谷氨酸补料分批发酵过程。     

烟草雄性不育突变株Y1 2的初步研究

植物雄性不育材料 ,不仅在生产上为育种提供资源 ,同时也是研究植物雄性生殖发育分子机制的有用材料 .雄性不育的材料通常是由自然突变或通过化学及物理诱导等方法获得的 ,这些方法尽管容易得到大量的突变子 ,但所获得的突变基因却不易分离 .目前已经发展了一种基因标签法 ,通过插入已知序列的外源片段或转座子作为标签 ,使突变基因的克隆相对容易 ,该方法已成为某些实验室分离发育基因的常规方法 [1～ 3] .我们报道利用转基因方法获得烟草雄性不育突变株 Y1 2及对其初步研究情况 .1　材料和方法1 .1　材料1 .1 .1　烟草品种　革新 1号 ( N…     

快生型豇豆根瘤菌突变株的筛选

用紫外线照射豇豆根瘤菌５１２并培养,前后连续两次,选出一株快生型突变株,该突变株不仅生长速度大大加快,而且耐盐性和耐酸碱性也有明显提高。     

抗蛋氨酸结构类似物突变株的筛选

以北京棒杆菌AS1.299经诱变后获得的高产蛋氨酸突变株N3-10作为出发菌株, 依次采用蛋氨酸结构类似物亮氨酸、 原亮氨酸和乙硫氨酸平板对
诱变后的突变株进行筛选, 得到蛋氨酸高产菌株依次为L3,LN7和E31. 结果表明, 亮氨酸对突变株N3-10的抑制质量浓度为8 g/L, 原亮氨酸对突变株L3的抑制质量浓度为3 g/L, 乙硫氨酸对LN7突变株的抑制质量浓度为3 g/L, 经紫外诱变和3种蛋氨酸结构类似物的筛选, 最终获得蛋氨酸产量最高突变株E31, 产量为1.479 g/L, 比出发菌株N3 10蛋氨酸产量高0.379 g/L. 经5次传代, 产量稳定.     

关于产生细胞分裂素的紫云英根瘤菌突变株发酵条件的探索

紫云英根瘤菌[Rhizobium sp(Atragalus)突变株在修改后的化学合成培养基和液态常规培养基上都能正常生长,而且分泌细胞分裂素的量都是在菌体生长的稳定期为最大。但以化学合成培养基为更适宜。菌体在其上生长,产生的细胞分裂素更多。培养基的碳源以10g/l甘露醇为宜。氮源以0.5g/l NH_4NO_3和0.75g/l尿素为宜。     

吉它霉素产生菌阻断突变株的筛选

吉它霉素产生菌ＳＫ４－２经亚硝基胍诱变处理，经过分离培养和多次筛选，获得了吉它霉素生物合成阻断的突变株，用生物发酵测定，化学薄层分析及生理特性分析测定，确定了突变株的吉它霉素的生物成途径被阻遏，从而失去了产生抗生素的能力。     

嗜热侧孢霉2441纤维素酶产酶条件优化及突变株选育

为了提高嗜热侧孢霉2441纤维素酶的产量,对产酶条件进行了优化,测定了酶的特性,对选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株进行了探索.实验中酶活力测定以微晶纤维素、CMC-Na和水杨苷为底物,DNS法测定还原糖;产酶条件优化采用正交试验设计,以微晶纤维素酶活为指标;通过NTG诱变和UV诱变选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株.结果表明:产酶条件优化后,嗜热侧孢霉2441的纤维素酶活极显著提高(P0.01);2441的微晶纤维素酶、CMC-Na酶和β-葡萄糖苷酶的最适作用温度分别为60℃、65℃、70℃,最适作用pH值均为5.5,温度高于70℃及碱性条件下,酶活力显著下降;选育的抗葡萄糖效应突变株N20-01,微晶纤维素酶活提高13.203%,CMC-Na酶活提高47.176%,β-葡萄糖苷酶活提高119.517%;选育的中温型突变株U40-03,在32℃培养时与2441在45℃培养时相比,微晶纤维素酶活提高11.411%,CMC-Na酶活提高29.484%,β-葡萄糖苷酶活提高54.759%.     

井冈霉亚基胺A高产突变株的构建

通过接合转移将一个带有阿泊拉抗性基因和双交换臂的穿梭质粒pJTU609导入井冈霉素高产菌株吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hygroscopicus var.jinganggensis)DX546中,将负责井冈霉素A生物合成最后一步糖基转移中的糖基转移酶基因valG置换突变,多聚酶链式反应结果显示valG被阿泊拉霉素抗性基因成功置换,通过高压液相色谱检测证实突变株的发酵产物中井冈霉亚基胺A的产量得到大幅提高.     

一株产谷氨酸菌株的复合诱变选育及突变株的生物学特性

对产谷氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)进行以硫酸二乙酯(DES)和紫外线(UV)相结合的复合诱变,经选育得到一株高产突变株LG - 01.将其接种在含葡萄糖初始浓度为150.0 g/L,初始pH值为7.2～7.6的液体培养基中,于30℃下培养48 h后,其谷氨酸产量达到106.10 g/L,比原始菌株提高了25.74％(同等条件下,原始菌株的谷氨酸产量为84.38 g/L).对该突变株的产谷氨酸代谢特性进行研究,结果表明:其最适初始pH值为7.2,最佳培养温度为30 ℃,以葡萄糖为最佳碳源,其谷氨酸产量最高时相应的葡萄糖浓度为150.0 g/L,其某些生物学特性发生了改变,如延迟期变长,对数期的细胞生长能力较强,对底物的利用率比原始菌株约提高5％等.     

高致病性猪链球菌双组分系统Ihk/Irr双基因缺失突变株的构建

目的构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法首先对双组分系统Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至p ET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游各1 kb的片段扩增,将两个片段连接起来;克隆至温敏型p JRS233的穿梭质粒中;利用两步同源重组法获得突变体;分别提取突变株的基因组DNA,RNA及菌体总蛋白,利用PCR,RT-PCR,Western-blot方法验证突变体.结果成功制备了双组分系统Ihk/Irr可溶性表达的蛋白,成功构建了重组的温敏型ikr-p JRS233重组质粒,成功将重组质粒转入猪链球菌05ZYH33中并获得突变株,基因组PCR,RTPCR及Western-blot分别证实了双组分系统Ihk/Irr双基因被成功敲除.结论成功构建重组温敏型的穿梭质粒,导入到猪链球菌05ZYH33菌株中经两步同源重组获得突变株,在基因组DNA,RNA及蛋白水平上验证了双组分系统Ihk/Irr双基因缺失株的成功构建.     

酿酒酵母的连续复合诱变及其突变株的快速筛选

为了获得高产的工业用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株,利用己烯雌酚(DES)和UV对酿酒酵母菌QD进行连续复合诱变,采用改进的发酵小管集气法结合乙醇定量测定来进行突变株的筛选,并与常规复合诱变及筛选方法进行比较.结果表明:连续复合诱变的正向突变率最大值为18.9%,与常规诱变方法的最大正向突变率15.6%相比提高了21.2%,说明运用该诱变方法能获得较高的正向突变率;改进的筛选方法可以快速筛选出目的突变株,同时,获得了一株高产乙醇的突变株,在甘蔗汁发酵培养基中其乙醇产量达到9 720 mg/100 mL,比常规诱变方法筛选到的突变株乙醇产量(9 170 mg/100 mL)高出6.0%;与常规诱变方法相比,连续复合诱变方法不仅能够得到较高的正向突变率,而且能够获得更加高产的突变株.     

法夫酵母人工诱变及突变株筛选的研究

用硫酸二乙酯对法夫酵母进行了诱变,并用薄层色谱法及高效液相色谱法对突变株进行了筛选鉴定,当诱变剂浓度为1％、诱变温度为20℃时,法夫酵母诱变处理的最适时间约为5min．根据视觉差异分离二苯胺平板上长出的法夫酵母菌落,用薄层色谱法初筛,并用液相色谱法鉴定出了虾青素高产菌株、虾青索低产菌株、类胡萝卜素组成缺陷菌株．     

KM—Id突变株小鼠的模型建立及遗传分析

在饲养剖腹产净化后的ＫＭ（昆明）种群时，我们发现了一些后肢畸形的动物。通过挑选后已成为一个稳定遗传的突变株。由于此群体产生的后代１００％均为后肢畸形动物，因此可以认定为Ｉｄ／Ｉｄ纯合子动物，命名为ＫＭ—ｌｄ小鼠。我们对ＫＭ—Ｉｄ成年小鼠进行了解剖病理学的分析，发现ＫＭ—Ｉｄ后肢畸形主要表现为后肢骨缺失，胫骨无腓骨支撑而弯曲。至使后肢向外翻。趾掌骨无法着地，只能以膝关节着地支撑躯体。少数动物表现为胫、腓骨变短弯曲。多数动物伴有趾骨畸形，这种畸形可以表现在一侧或双侧。通过对１３８只ＫＭ—Ｉｄ小鼠进行解剖观察，发现有４２％的动物在骨骼畸形的同时伴有左侧泌尿系统畸形。可以认定ｋＭ—Ｉｄ小鼠是一种患有骨—肾先天性畸形综合症的动物模型。我们对ＫＭ—Ｉｄ小鼠做了初步遗传学分析：将ＫＭ—Ｉｄ小鼠与近交系ＤＢＡ／２小鼠杂交得到Ｆ１代，再经Ｆ１代互交或双亲回交。通过对后代的形态学观察及遗传方式的分析。发现互交１５窝，产仔１２１只，Ｉｄ畸形为２１只，回交４窝，产仔２７只，Ｉｄ的畸形为１４只。经ｘ统计：其遗传方式符合孟德尔遗传定律，为常染色体羊基因隐性遗传。     

屎肠球菌hyl基因突变株的构建

目的：构建屎肠球菌类透明质酸酶（hyaluronidase,hyl）基因突变株,研究hyl基因的功能。方法：用pETX4577质粒构建屎肠球菌hyl基因重组自杀质粒,通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。结果：经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株＊hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。结论：hyl基因突变株构建成功,hyl基因在生长中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。     

大肠杆菌fadB缺失突变株构建及对聚羟基脂肪酸酯积累影响

应用一种简单的方法构建出一株大肠杆菌脂肪酸降解基因B(fadB)缺陷型菌株KM32B(fadB∷Tet),该方法不需克隆和第二轮PCR，只需要一对各70个碱基的引物,引物的前45个碱基分别与大肠杆菌目的基因的3′和5′互补，后25个碱基分别与抗性(四环素Tet)基因的3′和5′互补，将PCR产物，即抗性基因两侧各带与目的基因3′和5′互补的45个碱基的片段，通过高频电转化入大肠杆菌KM32菌株，重组子经PCR验证整个fadB基因区域因被四环素基因置换而敲除,将两种Burkholderia caryophylli AS 1．2741聚羟基脂肪酸酯合成酶基因，phaClBc和phaC2Bc，在此缺失突变株中进行了表达。结果表明聚羟基脂肪酸酯的合成能力较相同条件下的野生型大肠杆菌有所提高。     

耐盐木霉ST02对番茄种子和幼苗盐耐受能力的影响

木霉菌能够促进植物对盐胁迫的耐受性,研究选用耐盐木霉选择培养基筛选获得的木霉菌株ST02,对其耐盐活性进行检测,具有较强耐盐活性.用ST02木霉菌株的孢子悬液对番茄种子和幼苗进行处理,分析木霉处理对盐胁迫条件下番茄种子萌发,幼苗生长和耐盐生理生化的影响.结果显示:ST02孢子悬液促进NaCl胁迫下番茄种子的发芽率和发芽势,提高200 mmol/L NaCl胁迫下番茄幼苗的存活率、株高和鲜重,以及番茄幼苗的叶绿素含量和净光合速率,影响番茄幼苗的离子渗漏率和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶的活性.说明木霉ST02孢子悬液处理能够通过提高植物的抗氧化防御反应促进番茄对NaCl胁迫的耐受性.     

干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393 upp基因突变株的构建

upp基因可用来作为反向筛选标记基因。利用p ORI温度敏感型双质粒系统敲除干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393的upp基因,构建得到重组菌Lactobacillus casei 393-△upp。重组菌可作为反向筛选标记基因upp使用的宿主菌。