我国东北地区蝮蛇毒的初步研究

本工作的目的是测定蛇岛和盘石两地蝮蛇毒的半数致死剂量,最低溶血剂量和中枢神经毒性最小剂量以及抗蝮蛇毒血清中和力;同时也比较两地蛇毒的免疫电泳和聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳图谱的不同,为蛇伤防治提供基础数据,并为进一步研究东北地区蝮蛇毒成分提供参考。取得结果如下: (1) 经皮下、静脉和腹腔三种不同注射途径给小白鼠注射蛇毒,其LD50是:蛇岛蝮蛇毒分别为2.5,0.62和0.94毫克/公斤,盘石蝮蛇毒分别为12.25,1.60和0.31毫克/公斤。 (2)最低溶血剂量:蛇岛蝮蛇毒为1.8微克,盘石蝮蛇毒为1.2微克。 (3)中枢神经毒最小剂量:蛇岛为4.38毫克/公斤,盘石蝮蛇毒为0.052毫克/公斤。 (4)抗蝮蛇毒血清中和力:蛇岛为27.7,盘石为57.3。 (5)免疫电泳比较结果:盘石与浙江蝮蛇毒基本相似;蛇岛与浙江蝮蛇毒差别较明显。 (6)聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳比较:三个地区产的蝮蛇毒存在明显差别。     

蛇島蝮蛇(Agkistrodon halys)生态观察

遵照毛主席关于“中国医药学是一个伟大的宝库,应当努力发掘,加以提高”的伟大教导,辽宁省卫生局,于一九七三年组织了蛇岛考察队。在前人工作的基础上,为进一步了解现在蛇岛蝮蛇的蕴藏量和岛上蝮蛇的生态特点,为今后更好地保护与合理使用这一药物资源,以便利用蛇毒为临床治疗服务。于一九七三年五月十一日至二十二日,七月十一日至二十三日,九月二十二日至十月十一日,再次对蛇岛进行了综合考察。在各级党组织的领导下,在中国人民解放军海军某部的大力支持下,胜利完成了此次考察任务。     

蛇岛蝮蛇的生态观察

我们从１９７３－１９８４年对辽宁蛇岛上的蝮蛇的生态习性进行了观察。蛇岛蝮蛇的活动规律、捕食特点、繁殖习性等都适应了蛇岛的特定环境，因而得以生存至今。     

中国东北的蝮蛇分类问题

关于东北的蝮蛇分灰问题，有过多篇报道。有的主张统一一个种为蝮蛇Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ＾〔１，６〕，亦有分亚种的＾〔２，３，４〕经过近十年的观察，发现东北的蝮蛇既不是一个统一的种，亦不仅是亚种关系，蛇岛上的蝮蛇也不是个独立种－蛇岛蝮。因为它们的形态、习性和分布均有不同，所以《辽宁动物志两栖类爬行类》中的蝮蛇分类，以及１９８２年所报的蛇岛蝮应改为短尾蝮Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｂｒｅｖｉａｃ     

小叶三点金醇提物对尖吻蝮蛇毒的抑制作用

研究小叶三点金Desmodium microphyllum醇提物对尖吻蝮蛇Deinagkistrodon acutus蛇毒的抑制作用。将尖吻蝮蛇毒与不同比例小叶三点金醇提物在37℃下孵育30 min,检测对蛇毒中主要酶活力以及体内毒性的抑制作用。小叶三点金醇提物对尖吻蝮蛇毒中蛋白水解酶、磷脂酶A2、透明质酸酶以及纤维蛋白原水解酶均具有明显的抑制作用,对尖吻蝮蛇毒引起的小鼠出血、水肿、组织坏死以及致死毒性具有显著的中和作用,且呈剂量效应关系。首次证实了小叶三点金具有抑制尖吻蝮蛇毒的功效,为小叶三点金在蛇伤治疗中的应用提供了理论依据。     

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究杨章民，王德林，王子浩，方荣盛（陕西师范大学实验中心陕西师范大学生物学系西安７１００６２１第一作者，男，２８岁，硕士）蜂蛇毒是以血循毒为主的混合毒，其成分非常复杂，为酶类、毒素及非蛋白物质构成的混合物，能够使动物出现一系列...     

小叶三点金不同萃取相对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】考察小叶三点金(Desmodium microphyllum)乙醇提取物不同萃取相对尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒主要酶类的抑制作用。【方法】采用不同极性溶剂对小叶三点金乙醇提取物进行萃取,检测各萃取相对尖吻蝮蛇毒中蛋白水解酶、磷脂酶A2、透明质酸酶和类凝血酶的抑制作用,再结合气相色谱-质谱法(GC-MS)对抑制作用最强的萃取相进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相能够明显抑制尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶和类凝血酶的活性,经GC-MS分析检测出26种成分,其中正十六烷酸、十八碳烯酸、豆甾醇和谷甾醇具有抑制蛇毒活性的作用。【结论】小叶三点金醇提物乙酸乙酯萃取相对尖吻蝮蛇毒中主要酶类具有明显抑制作用,能够作为有效部位用于抗蛇毒功效组分的筛选研究。
     

蛇莓乙醇提取物抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性初探

【目的】初步探究蛇莓(Duchesnea indica)对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒蛋白水解酶的抑制作用。【方法】采用不同极性有机溶剂对蛇莓乙醇提取物进行分级萃取,结合硅胶薄层层析(TLC)进行分离,再利用气相色谱-质谱法(GCMS)对抑制蛋白水解酶作用最强的活性部位进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相具有较强的抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性;经硅胶TLC分离从中获得条带1、条带2、条带3和条带4共4个条带,且条带4的尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶抑制活性最强。通过GC-MS分析检测出条带4中存在15种成分,其中2,4-二叔丁基苯酚、正十六烷酸、十八烷酸、十六烷酸,2-羟基-1-(羟甲基)乙酯、硬脂酸-2-羟基-1-(羟甲基)乙酯和10,13-十八碳二炔酸甲酯可能与抑制蛇毒活性相关。【结论】蛇莓中存在抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶的功效组分,可以作为蛇伤药物开发的资源。     

白眉蝮蛇毒几种有效成分研究的新进展

近年来我国东北地区长白白眉蝮蛇毒的应用研究受到了科学工作者的重视，本文对白眉蛇毒的几种有效成分析十年来实验研究方面进行综述。     

蛇岛蝮蛇（Agkistrodon qianshanensis shedaoensis）的生态观察

我们从１９７３－１９８４年对辽宁蛇岛上的蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｑｉａｎｓｈａｎｅｎｓｉｓｓｈｅｄａｏｅｎｓｉｓ）的生态习性进行了观察。蛇岛蝮蛇的活动规律、捕食特点、繁殖习性等都适应了蛇岛的特定环境，因而得以生存至今。     

蛇岛蝮蛇与蝮蛇乌苏里亚种蛇蜕的微量元素分析与比较

本文作者经ICP-AES对蛇岛蝮蛇和蝮蛇乌苏里亚种蛇蜕作了定性定量分析,发现两种蝮蛇蛇蜕中均含有Zn,Cu,Fe,Mn,Mo,Se,Sr,Rb和Ge等21种微量元素以及Ca,P,Mg,K等4种宏量元素。但其含量因生态环境和生活习性的不同而有差异。似乎说明利用ICP对蛇蜕等的定性定量分析,可以做为蛇类鉴定的一种新的鉴别方法。     

尖吻蝮蛇毒对人卵巢癌A278O细胞的抑制作用研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒对人卵巢癌A2780细胞(后简称A2780细胞)形态学特征、细胞增殖活力及粘附能力的影响。【方法】采用倒置荧光显微镜观察在不同质量浓度和时间条件下,尖吻蝮蛇毒对A2780细胞形态学特征的影响;采用CCK-8法检测细胞增殖率的变化,使用细胞计数法检测尖吻蝮蛇毒对细胞粘附能力的影响。【结果】当尖吻蝮蛇毒质量浓度为3.125μg·mL-1时,A2780细胞出现少量皱缩、变圆、凋亡的现象;随着尖吻蝮蛇毒质量浓度增加,细胞凋亡的现象愈加明显。当用50μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞1h后,被处理细胞出现少量皱缩、变圆现象;12h后,被处理细胞粘连成团,出现大量凋亡现象。在3.125～200μg·mL-1范围内,随着尖吻蝮蛇毒质量浓度的增加,A2780细胞增殖活力逐渐减弱,且呈明显剂量依赖关系。当用3.125μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞时,细胞粘附率降为78.26%;当蛇毒质量浓度为25μg·mL-1时,细胞粘附率降为不足10%。【结论】尖吻蝮蛇毒可明显影响A2780细胞的形态学特征,抑制该细胞的增殖活力以及粘附能力。     

卵源性多价抗蝮蛇毒IgY的制备及检测

采用短尾蝮(Gloydius brevicaudus)、乌苏里蝮(Gloydius ussuriensis)、岩栖蝮(Gloydius saxatilis)、原矛头蝮(Protobothrops mucrosquamatus)和菜花原矛头蝮(Protobothrops jerdonii)5种蛇毒的混合物制备类毒素,免疫20~22周龄莱航母鸡并收集鸡卵,用冻融法、水稀释法和PEG法提取卵黄多价抗蝮蛇毒IgY,并用酶联免疫法和蛋白印迹法对所得IgY效价进行检测.结果表明:母鸡在免疫期间产下的鸡卵中,均存在可有效中和上述5种蛇毒的卵黄抗体IgY,且诱导量随免疫强度的提高而增加;不同方法所得有效抗体的含量存在一定差异,且同一提取法所得抗体对不同蛇毒的交叉中和能力也不同,这可能与动物对5种蛇毒的免疫应答存在差异有关.     

陕西蝮蛇蛇毒的比较研究

对陕西分布的日本蝮蛇短尾亚种（Agkistrodon blomhoffii breuicaudus)，秦岭蝮（A.qinlingensis)及中介蝮（A.intermedius)的蛇毒进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳研究，结果表明，蝮蛇蛇毒电泳具有种的特异性，三种蛇毒泳图谱无论在带的数目，含量及分布特征方面均存在明显差异，三者之间应为种间关系。     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】探究中草药黑老虎(Kadsura coccinea)醇提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用。【方法】用体积分数为75%的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到醇提物；通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制作用。【结果】黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶具有明显的抑制作用。当蛇毒与醇提物的质量比分别为1∶100，1∶10和 1∶5时，后者能抑制蛇毒中98%磷脂酶A2活性、79%蛋白水解酶活性和65.14%透明质酸酶活性。同时，醇提物能够明显抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原和类凝血酶的活性。【结论】研究结果证实了黑老虎醇提物能有效抑制尖吻蝮蛇毒中的主要酶类，为深入研究黑老虎药材的抗蛇毒机制提供了理论依据。     

短尾蝮蛇毒金属蛋白酶和磷脂酶A_2的分离纯化及磷酸化修饰检测

利用阴离子层析、凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱从短尾蝮蛇毒中分离金属蛋白酶和磷脂酶A2,用蛋白印迹法检测两种组分的磷酸化修饰信号,结合LC-MS质谱鉴定并预测磷酸化修饰位点.结果表明,利用3种色谱法串联组合,最终分离获得两种条带单一且纯度高的短尾蝮蛇毒蛋白,经LC-MS质谱鉴定分别为蛇毒金属蛋白酶和磷脂酶A2.免疫印迹检测发现这两种蛇毒蛋白受到明显的磷酸化修饰,解析质谱图发现蛇毒金属蛋白酶有4个氨基酸位点受到潜在的磷酸化修饰(含1个丝氨酸和3个苏氨酸),磷脂酶A2仅有1个酪氨酸位点受到潜在的修饰.所得结果是磷酸化位点修饰抗体在蛇毒蛋白磷酸化修饰信号检测中的一次尝试,基于修饰位点的预测可为蛇毒蛋白功能受磷酸化修饰影响的研究提供基础.     

蝮蛇短尾亚种冬眠期血乳酸、血糖和糖原的初步研究

蝮蛇短尾亚种(Agistrodon blmhoffiibrericaudus stejneger,后文简称蝮蛇)是日本蝮蛇科的一个亚种,我们对处于冬眠期蝮蛇的一些生化指标进行了测定分析,以便为人工饲养蝮蛇和提取蛇毒提供科学依据,并且为进一步探讨蝮蛇亚种之间的亲缘关系提供一定的理论旁证.1 实验     

蛇岛蝮蛇的选择与适应

蛇岛蝮蛇 (GloydiusshedaoensisZhao)之所以在一个孤岛上繁衍生息上万年间 ,首先是蝮属蛇类都具有捕食鸟类的精良武器———毒牙与颊窝 ,捕食时能选择有利地形并采取拟态伪装和“守株待鸟”的对策 ,当食物淡季来到时便以“夏眠”的方式渡过炎热的夏季 ,以减少能量消耗 .蛇岛蝮蛇的食物很有限 ,捕食季节也很短 ,可它的能量转化率很高 ,并能将剩余的能量以脂肪的形式储存在体内 .它们还有很强的耐饥力和耐渴力 ,即使错过了一个捕食期 ,只要在下一个捕食季节获得一定的食物就足够了 .在种群生殖上它们选择了降低生殖数量、提高生殖质量的策略 ,刚出生的小蛇就能捕食小鸟 ,使之长期保持一个健康的种群 ,这就是自然选择与适应的结果     

尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺研究

尖吻蝮蛇凝血酶是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的一种类凝血酶,属于止血一类新药。建立了尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺,采用切向流过滤技术,用两步离子交换层析分离得到高纯度的尖吻蝮蛇凝血酶,再采用两步凝胶排阻层析去除热原和脱盐。该工艺具有简便高效的特点,适合大规模工业化生产。     

中介蝮蛇毒神经毒素对家兔隔神经放电的影响

用记录脶神经和脶肌的呼吸性发放的方法，对新疆中介蝮(A．intermedius Strauch)蛇毒急性中毒引起的呼吸麻痹，分别用家兔和大白鼠进行了实验分析。将稍大于最小致死量(0．1mg／kg体重)的中介蝮蛇毒，经静脉或肌肉注入动物体内，一般经数小时后出现软瘫性呼吸麻痹，若及时地给予人工呼吸，则在膈肌的呼吸性发放完全停止的情况下，心电和膈神经的呼吸发放都尚可维持相当长的时间。若将蝮蛇毒直接注入侧脑室内，甚直达每公斤体重30-50微克，不引起动物出现明显的呼吸困难。若将脑室注射量加大每公斤体重100mg以上，则动物经一定时间出现4肢僵直，头后仰，抽搐等症状而死亡。在离体标本上，蝮蛇毒具有不可逆地阻遏接头传递的阻遏过程相似。