伏安酶联免疫分析中一类新的HRP底物体系的初步研究

提出了以酚红、1,2,5,8－四羟基蒽醌、1,8－二羟基蒽醌三种染料类物质作为电化学酶免疫分析中辣根过氧化物酶（FRP）催化氧化反应的底物,这三种具有电化学活性物质,在HRP的催化作用下,被H2O2氧化生成非电活性的产物,导致测定的电流下降,其减少程度和HRP的浓度有一定的关系,从而建立了三种底物测定HRP的新体系,比较了它们测定HRP的灵敏度,对酶催化反应机理进行了初步的探讨。     

基于PEDOT:PSS 和HRP 的电化学酶传感器的制备与电催化应用

利用聚（3,4-乙烯二氧噻吩）/聚乙烯苯磺酸（PEDOT：PSS）和辣根过氧化物酶（HRP）制 备了一种电化学酶传感器。采用离子液体N-己基吡啶六氟磷酸盐（HPPF6）修饰碳糊电极（CILE） 作为基底电极,将PEDOT：PSS 和HRP 的混合材料修饰于电极表面得到电化学酶传感器（PEDOT： PSS-HRP/CILE）。利用红外光谱法和紫外光谱法对HRP 的活性进行了分析,采用循环伏安法（CV） 对该酶传感器的直接电化学和电催化行为进行了测试。结果表明：PEDOT：PSS-HRP/CILE 对三氯 乙酸（TCA）和亚硝酸钠（NaNO2）有明显的电催化行为,当TCA 浓度在0.0～300.0 mmol/L 的范围时 还原峰电流值与浓度的变化成线性关系,检测限为0.67 mmol/L（3σ）。使用此传感器成功地对药物 样品中TCA 含量进行了测定,加标回收率为94.0%～105.6%。     

基于聚硫堇/纳米金固定酶的过氧化氢生物传感器

将电子媒介体硫堇（Thi）聚合于玻碳电极（GC）表面形成带正电的多孔聚硫堇（PTH）复合膜,再利用共价结合和静电吸附将纳米金（nano-Au）和过氧化物酶（HRP）修饰于电极上,从而制得HRP/nano-Au/PTH/GC传感器.用循环伏安法和计时电流法考察该修饰电极的电化学特性,发现该修饰电极对过氧化氢（H2O2）的还原有良好的电催化作用.实验结果表明：该传感器对H2O2的线性响应范围为1.4×10-6～4.26×10-3mol L,线性相关系数R=0.9993（n=23）,检测下线为4.0×10-7mol L（S N=3）,并具有选择性好、灵敏度高、响应快等优点.     

基于聚硫堇/纳米金固定酶的过氧化氢生物传感器

将电子媒介体硫堇（Thi）聚合于玻碳电极（GC）表面形成带正电的多孔聚硫堇（PTH）复合膜,再利用共价结合和静电吸附将纳米金（nano-Au）和过氧化物酶（HRP）修饰于电极上,从而制得HRP/nano-Au/PTH/GC传感器.用循环伏安法和计时电流法考察该修饰电极的电化学特性,发现该修饰电极对过氧化氢（H2O2）的...     

壳聚糖-碳纳米管复合物修饰的过氧化氢生物传感器

以玻碳电极为基底,将壳聚糖-碳纳米管（CS-MWNT）复合物修饰于电极表面,然后利用氯金酸电沉积纳米金（nano-Au）,最后吸附过氧化物酶（HRP）,从而制备出性能良好的HRP/nano-Au/CS-MWNT/GCE过氧化氢生物传感器.用循环伏安法和计时电流法考察该修饰电极的电化学特性,发现该修饰电极对过氧化氢（H2O2）的还原有良好的电催化作用.实验结果表明：该传感器在7.0×10^-6mol/L-1.29×10^-2mol/L范围内对H2O2有良好的线性响应,线性相关系数R=0.9989,检测下限为2.3×10^-6mol/L（S/N=3）.此外,该传感器还具有较快的响应速率、较好的稳定性和重现性.     

辣根过氧化物酶直接电化学行为的研究

制备了十八烷基胺六方介孔二氧化硅（0DA—HMS）／辣根过氧化物酶（HRP）聚乙烯醇凝胶膜化学修饰电极,考察了HRP在裸玻碳电极上和ODA—HMS聚乙烯醇凝胶膜修饰电极上的直接电化学行为,探讨了不同修饰方法包埋HRP对其直接电化学行为的影响。实验结果表明：HRP在裸玻碳电极上和滴涂法所制备ODA—HMS聚乙烯醇凝胶膜中的直接电化学行为较差,只呈现一不可逆的还原峰,且峰电流随着扫描次数的增加不断减小,无法达到稳定。而通过吸附包埋法所制备的ODA—HMS／HRP化学修饰电极上,HRP可以呈现出良好的,可逆的直接电化学行为,其氧化峰和还原峰的峰电流在数次扫描后能达到稳定。探讨了该修饰电极对双氧水的电催化还原作用。     

电位控制辣根过氧化物酶在玻碳电极上的组装及H2O2的检测

研究了一种在聚硫堇修饰玻碳电极上利用电位控制组装辣根过氧化物酶(HRP)的新方法.首先将硫堇(TH)电聚合到玻碳电极(GCE)表面,形成均匀的带正电荷的导电聚合膜,再通过调节溶液的酸度使HRP带负电荷,利用电位控制的方法在硫堇聚合膜(PTH)上组装HRP, 通过循环伏安法和电化学交流阻抗法对HRP的整个组装过程进行表征.在优化的实验条件下,采用计时电流法将HRP修饰电极用于H2O2检测,结果表明,在2×10-5～2×10-2 mol·L-1范围内HRP修饰电极的响应电流与H2O2浓度呈良好的线性关系,该研究对各类酶传感器、免疫传感器的设计与制备具有重要意义.     

化学发光酶联免疫分析测定血清中乙型肝炎表面抗原

提出了曙红（Eosin)-H2O-HRP-Luminol化学发光体系测定HRP（辣根过氧化物酶）及HRP标记物的方法。将该方法与免疫分析技术相结合成功地用于测定病人血清中乙型肝炎表面抗原的含量，测定结果与经典的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性好。     

混合溶剂对可溶性聚酰亚胺电化学行为的影响

用电化学循环伏安法研究了可溶性聚酰亚胺BTDA－DMMDA在N－甲基－2－吡咯烷酮（NMP）及不同体积比NMP／甲苯混和溶剂中的电化学行为，发现溶剂对BTDA－DMMDA的电化学性质有明显的影响。     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶研究

用纯化的罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）肝胰腺（hepatopancreas）几丁质酶，研究了酶的抑制剂。酶活力受Fe^3 ,Hg^2 ,Ag^ Z强烈抑制，SDS低浓度时有激活作用，EDTA对酶影响不大，证明该酶不需金属离子。对酶作用方式的探讨证明该酶为内切酶，对不同N－乙酰化度几丁质的水解速度差异很大。     

一步电化学还原氧化石墨烯-壳聚糖复合膜固定的辣根过氧化物酶的直接电化学及对过氧化氢的传感检测

为构筑出一种新的辣根过氧化物酶(HRP)第三代电化学生物传感器并将其用于H_2O_2的有效检测,采用循环伏安法将滴涂于玻碳电极(GCE)表面的壳聚糖(CS)-氧化石墨烯(GO)复合膜一步还原成壳聚糖(CS)-电化学还原氧化石墨烯(ErGO)复合膜,然后结合一层CS-辣根过氧化物酶(HRP)复合物,制备出CS-HRP/CS-ErGO/GCE,其中内层CS用于吸附HRP,外层CS用于阻止HRP泄漏。利用复合膜中Er GO良好的导电性和电催化性能,实现HRP与电极表面的直接电子转移。此外,CS/CS-ErGO还为HRP提供一个生物相容性微环境,使得修饰在电极上的HRP能保持其生物活性。结果表明:该修饰电极在空白磷酸盐缓冲液(PBS)溶液中出现一对氧化还原峰,式量电位为-0.11 V(vs.Ag/Ag Cl),说明包埋在CS/CS-ErGO膜中的HRP与玻碳电极之间发生了直接电化学行为。此外,该修饰电极对H_2O_2的还原具有电催化作用,能快速、灵敏地响应H_2O_2的浓度变化,其线性范围为1.0×10~(-5)~7.0×10~(-4)mol/L,检测限为3.0×10~(-6)mol/L(3S/N)。该传感器具有制备方法简单、成本低廉且稳定性良好的特点。     

二苯胺—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶（HRP）的方法.通过线性扫描二阶导数极谱法测定HRP催化H     

高纯度烟草过氧化物酶的酶学特性研究

从K326的烟叶中采用除植物褐色素新技术，经分离纯化，得到单一过氧化物酶I（TOP I），该酶是一种以血红素为辅基的含铁蛋白质。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOF－MS）测得TOP I分子量为21888．5Da，等电点pI为3．5；酶反应的最适pH为6．0，最适温度为45℃，70℃保温15min残余活力为50％，具有良好的热稳定性，动力学分析表明：烟草中的过氧化物酶I与愈创木酚（一元酚）结合力最强，邻苯二酚（二元酚）次之，焦性没食子酸（三元酚）作用较小。TOP I和Km(愈创木酚）为0．132mmol/L;Km(H2O2)为0．598mmol/L.N3^-,CN^-1,Fe^3 ,Fe^2 和Sn^2对酶有较强烈的抑制作用，重金属离子Ag^ ,Pb^2 ,Cu^2 对该酶的活性有激活作用，而NO2^-、Hg^2 ,Cr^3 对酶活力无显著影响。     

水相胶束体系对辣根过氧化物酶活性及构象的影响

报道不同胶束体系中辣根过氧化物酶（HRP）的活力变化．实验表明，HRP在水相胶束体系中活力半衰期比在有机相中长；在聚合过程中可以保持较高活力，使酶用量减少．胶束体系不同，对酶分子构象影响也不同，其影响程度低于非水有机相．     

固定化单宁酶的研究

讨论了聚阳离子聚2－羟基－N，N－二甲基氯丙胺对固定化酶的影响，PH值对固定化酶的影响及固定化酶的稳定性，采用聚阳离子复合物加固对酶的包埋程度，防止了使用过程中酶的渗酶，可使该酶的延长使用寿命并提高稳定性。     

辣根过氧化物酶的提取

辣根过氧化物酶(HRP)属血红素蛋白质,是目前酶工业中使用最普遍的一种酶,它既可用于定位检测,又能用于定量测定。精制HRP售价达2200元/克。HRP广泛分布于植物体中,尤其在鲜辣根(十字花科蔬菜)中含量极高。我国辣根资源极为丰富,本方法即介绍以新鲜辣根或辣根皮为原料提取HRP技术。     

生物酶催化聚乙烯膜接枝的改性方法

目的 研究以辣根过氧化物酶（HRP）为催化剂，邻甲氧基酚为底物，H2O2为氧化剂的自由基引发体系，高密度聚乙烯膜（HDPE）接枝丙烯酰胺的反应过程。考察催化反应各参数对HDPE膜亲水性和染色性能的影响。方法用SEM，UV-Vis分析聚合物膜的组成和表面结构。测定改性HDPE膜的接触角和染色后膜的UV-vis吸光度，分析溶剂浓度对改性效果的影响。结果最佳处理条件是反应时间为1．5h，H2O2的浓度为0．03％（质量分数），邻甲氧基酚的浓度为0．5％（质量分数），反应液中丙酮的最佳浓度为30％（体积分数）。结论HRP催化接枝处理HDPE膜明显改善了其亲水性和染色性能。     

凝固酶测定试验鉴定葡萄球菌的影响因素

目的 探讨玻片法和试管法检测大酶的影响因素方法。方法 按标准方法操作比较两种血浆（人血浆和兔血浆）及三种抗凝剂（ＥＤＴＡ－Ｎａ２，ＥＤＴＡ－Ｋ２，柠檬酸钠）对结果的影响。结果 使用柠檬酸钠和ＥＤＴＡ－Ｎａ２抗凝的兔血浆和人血浆，８株金黄色葡萄球菌均产生葡萄球菌凝固酶和聚集因子，而其它２６株葡萄球菌包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、腐生葡萄球菌和人葡萄球菌不产生葡萄球菌凝固酶和聚集因子。结论 柠檬酸钠     

植酸钛纳米材料固定酶制备过氧化氢传感器

利用植酸盐分子中磷酸基团与部分金属离子的强络合能力,通过微波合成法合成植酸钛纳米材料,并运用这种材料结合混合滴涂的方法将辣根过氧化物酶成功修饰到玻碳电极表面.运用紫外-可见光谱和电化学,实验结果证明了这种材料具有良好的生物相容性,有利于防止酶在固定化过程中生物活性的损害.此法制备的生物传感器实现了辣根过氧化物酶(HRP)和玻碳电极之间的直接电子转移,且对过氧化氢呈现出良好的催化还原作用,对H2O2检测的响应电流线性范围是6.67×10-7~4.73×10-5mol·L-1,线性相关系数R=0.9988(n=20),检测限为4.0×10-7mol·L-1(S/N=3),米氏常数(Kapp M)为0.036 mmol·L-1.所制得的生物传感器呈现出良好的重现性和稳定性.     

桉木硫酸盐浆LMS生物漂白的研究

进行了桉木硫酸盐将漆酶一介体系统（LMS）生物漂白的研究,漆酶由白腐菌Panus conchatus固体发酵并分纯化而制得;一种新的介体－－N－羟基乙酰苯胺（NHA）自行合成,采用L／MQP漂白流程,仅用2％（质量分数）的H2O2就将桉木常规硫酸盐浆（EMCC－O）可达到87．6％ISO的白度,生物漂白的CK浆和EMCC－O浆的粘度都很高,说明漆酶／NHA生物漂白的脱木素选择性很好。