石斛共生真菌木霉菌拮抗作用的初步研究

为探讨拮抗真菌及其次生代谢产物对石斛病原菌生长的影响,从药用植物石斛中分离、鉴定和筛选出对常见病原真菌镰刀菌(Fusarium)有拮抗作用的木霉菌(Trichoderma).通过平板对峙培养,观察其对镰刀菌生长的影响;通过几丁质水解圈实验,检测木霉几丁质酶的活力.该研究所筛选获得的木霉生防菌株,可应用于石斛的栽培管理,...     

凤梨内生菌筛选鉴定及拮抗效果评价

以凤梨叶片为筛选材料,通过平板对峙培养法筛选出3株对蔬菜软腐病菌菊迪基氏菌有拮抗效果的生防细菌,结合生理生化及分子生物学鉴定,以及拮抗效果评价试验,结果表明,这3株内生菌分别为:Bacillus amyloliquefaciens F-2,Bacillus megaterium F-3-1,Bacillus subtilis F-3-2,皆为革兰氏阳性菌。其中F-2对菊迪基氏菌和丁香假单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈分别为24. 67 mm和28. 83 mm; F-3-1对病原真菌燕麦镰孢菌、胶孢炭疽菌、互隔交链孢霉,抑菌率分别为70. 83%、91. 67%、65. 56%. F-3-2对丁香假单胞菌和黄单胞菌属的抑菌效果最好,抑菌圈分别为20. 75 mm和20. 00 mm。另外,通过生化鉴定研究发现,这3株优良内生菌还具有很好的解磷固氮和产纤维素酶能力,这对内生菌的筛选及内生菌对植物抗病促生作用的研究提供了一定的参考价值。     

新疆块根芍药内生细菌XJU-PA-4的鉴定及特性分析

采用琼脂扩散法检测了从新疆块根芍药（Paeonia anomala）中分离获得的内生菌XJU-PA-4对植物及动物病原菌的抑菌作用,并对其进行鉴定及特性分析。实验结果表明：（1）XJU-PA-4对玉米小班病菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性,抑菌圈直径分别达到25mm及18mm。（2）XJU-PA-4的16S rDNA序列与Bacillus subtilis strain WL-6的同源性为99％,G＋Cmol％含量为53．5％。结合形态学观察及生理生化特性,最终将XJU-PA-4鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,在GenBank数据库的注册号为EU714296。     

碱蓬内生真菌JP3的分离、鉴定及促生作用研究

为研究盐生碱蓬(Suaeda glauca)植物体内生菌及其产生的生物学活性物质对植物的促生长作用,利用组织分离法对碱蓬内生菌进行分离;用水培法测定碱蓬内生真菌对水稻幼苗株高、干重、叶绿素含量等生理指标的影响;对具有明显促生活性的菌株根据形态、培养特征和18SrDNA测序分析进行分类鉴定。从健康碱蓬植株的根、茎、叶中分别分离出19株、70株和49株,共138株内生菌,其中细菌13株、真菌122株、放线菌3株;筛选出对水稻幼苗具明显促生活性的真菌JP3,由该菌处理的水稻幼苗与对照相比其干重增加12.23%,株高增加15.6%(P0.05),总叶绿素含量增加了13.2%;18SrDNA测序和比对结果显示JP3属Glomerella cingulata,相似性大于97%。研究表明:碱蓬植物内生菌具有丰富、多样的特点,是产生促生物学活性物质的重要微生物资源,可为开发新的植物促生剂提供生物源物质。     

半夏中一株高产纤维素酶内生真菌的分离、鉴定及活性分析

以羧甲基纤维素钠为主要碳源,采用刚果红染色法从半夏中筛选出一株高产纤维素酶的内生真菌,通过形态学观察及分子生物学技术对其进行鉴定,并对该菌株发酵产物进行抑菌、抗氧化活性测定。结果表明: 高产纤维素酶的内生真菌bxg1被鉴定为曲霉属真菌(Aspergillus chevalier)。该菌株透明圈直径D与菌落直径d比值高达2.5。菌株抑菌实验发现,该菌株对供试病原菌均有抑菌效果,对革兰氏阴性菌具有较好的抑菌活性,其中对铜绿假单胞菌的抑菌圈约为1.2 cm;抗氧化实验发现,该菌株对DPPH自由基的清除能力最强,IC₅₀值为0.056 g/L。     

一株柏树内生真菌产生抗肿瘤药物紫杉醇

报道了一株从柏树中分离到的产抗癌药物紫杉醇的菌株,样品采自江苏,是第一例柏树内生菌产紫杉醇的报道,表明产紫杉醇真菌的多样性.简化和改进了提取紫杉醇的方法,可以快速得到一定量的紫杉醇满足TLC分析的需要,该方法提高了处理样品的速度,节省了时间和试剂消耗等,适用于大量样品的初筛.     

一株珙桐耐铅、镉内生真菌的分离鉴定及生物学特性分析*

从珙桐2年生健康实生苗的茎段中分离到一株耐铅、镉内生真菌。经形态学观察,该菌初步鉴定为链格孢属真菌。该菌的最佳培养基为PDA培养基。温度、p H、碳源和氮源对其生长有一定影响。在温度为15~35℃时均能生长,最适温度为25~30℃。该菌能适应较宽的p H值范围,在p H值5~9的条件下生长旺盛。多种碳源和氮源均能促进该菌生长,最佳的碳源为葡萄糖、可溶性淀粉、甘露糖和蔗糖,最佳的氮源为硝酸钠。该菌能在含1 000 mg/L Pb(NO2)2或100 mg/L Cd Cl2.2.5H2O培养基上生长,表明该菌在铅、镉胁迫下仍有较强的生长能力。     

蛇足石杉内生真菌Shiraia sp. Slf14中III型聚酮合酶的表达、纯化及生物信息学分析

竹红菌素是我国特有的一类苝醌类光敏色素,在开发新型抗肿瘤抗病毒药物、光敏活性农药及新型光电转换材料等方面应用前景广阔.聚酮合酶（ Polyketide synthase,PKS）是合成竹红菌素的一种关键酶,通过全基因组测序及分析发现在Shiraia sp. Slf14中存在一个III型聚酮合酶基因.利用RT-PCR技术,以其总RNA为模板,扩增得到目的片段,并成功构建表达载体pET-22b（+）-PKSIII,采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,在大肠杆菌BL21（ DE3）中成功表达出了目的蛋白,SDS-PAGE结果显示表达重组产物分子质量约为43 kDa,与理论值一致,为III型聚酮合酶的催化活性研究提供理论依据.     

蛇足石杉内生真菌的分离和抗植物病原真菌活性

采用内生菌常规分离法对健康的蛇足石杉植株体内的内生真菌进行了分离和筛选.结果表明:从蛇足石杉的不同部位所分离到的内生真菌的数目有所不同,茎部最多,有100株;其次叶部73株;根部最少,仅7株.经初步鉴定,这180株菌分属于13属,即交链孢属(Alternaria)、头孢霉属(Cephalosporium)、球座菌属(Guignardia)、青霉属(Penicillium)、间座壳属(Diaporthe)、木霉属(Trichoderma)、茎点霉属(Phoma)、曲霉属(Aspergillus)、镰刀菌属(Fusarium)、轮枝孢属(Verticilliun)、组丝核菌属(Phacodium)、瓶梗青霉属(Paecilomyces)、刺盘孢属(Colletotrichum).采用抑制率法对所分离到的菌株稀释十倍的发酵液进行抗植物病原真菌实验,结果表明:部分菌株对病原菌有不同程度的抑制作用,其中对油菜菌核病菌抑制率达100%的有37株,对苹果炭疽病菌抑制率达100%的有27株.     

木麻黄（Casuarina equisetifolia）内生真菌的分离与促生菌株的筛选

采用组织分离法从福建省大鹤林场不同年龄木麻黄各组织器官中分离与纯化得到65株内生真菌.研究木麻黄内生真菌在其器官构件内的分布规律,同时按水培和盆栽两种方式侵染无性系苗,测定接菌苗木的新梢长度,筛选出促生长的菌株.结果表明:木麻黄内生真菌主要分布于植株的鳞状叶小枝和根中,分别占筛选出菌株数量的40.0%和41.5%,且随着树龄的增大,内生真菌的数量减少;在水培苗浸泡菌液方式下的接菌处理能显著增加苗木的平均抽梢量,促进水培苗生长.其中,菌株18处理下苗木的平均抽梢量为54.85 cm,是对照苗木的7.62倍.     

南方红豆杉内生菌及紫杉烷类产物的初步鉴定

从南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒｍａｉｒｅｉ）的主干和侧枝树皮及皮下部分,分离、筛选得到９１个纯化的微生物菌株．经过摇瓶培养和静止培养,再用二氯甲烷萃取抽提,抽提产物经以ｔａｘｏｌ、ｂａｃｃａｔｉｎⅢ和ｃｅｐｈａｌｏｍａｎｎｉｎｅ为标准对照的薄层层析分析,表明其中６个菌株能分泌紫杉烷类的化合物．分类鉴定的初步结果为头孢霉属、轮柄梳霉属和无孢菌群等     

皖贝母内生真菌的初步研究

采用平板分离法从皖贝母新鲜鳞茎、茎杆和叶中分离出2种内生真菌（A1和B1）,通过菌落形态和ITS序列确定内生菌的种属,通过DNAMAN软件多重序列比对确定与其他真菌的同源关系。结果表明,A1归为被孢霉属,与Mortierella elon-gata的ITS序列同源性高达99.44%;另一种归为青霉属,与Penicillium janthinellum的ITS序列同源性高达98.65%。     

博落回内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

从健康博落回植株中分离内生真菌,用PDA培养基分离纯化菌株,结果纯化得到19株内生真菌,用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选,其中有2株博落回内生真菌对指示菌株有抑菌作用,占总分离菌株的10.53%,其中有一株内生真菌具有较强的抑菌活性。     

红树植物内生真菌的种群动态及生物活性

2003年10月至2004年8月对福建龙海浮宫2种红树植物秋茄、木榄的内生真菌进行连续6次的分离,得到290株内生真菌．研究结果显示,木榄（Bruguiera gymnorrhiza）和秋茄（Kandelia candel）内生真菌数量高峰期分别为4月份和10～R12月份;青霉（Penicillium）、交链孢（Alternaria）、Dothiorella和无孢目是秋茄中的主要优势属;木榄内生真菌主要优势属为头孢霉（Cephalosporium）、交链孢（Alternaria）、青霉（Penicillium）等．不同宿主对内生真菌的季节分布有重要的影响．抗菌测定共筛选得到活性菌株40株,占总菌株数的13．8％;17株内生真菌对KB（人口腔上皮癌）和／或Raji（人B淋巴瘤）细胞具有抑制作用,占总菌株数的5．9％．生物活性菌株分布于青霉、交链孢、拟青霉、无孢目等10个不同的分类单元中,2种宿主植物内生真菌抗菌及抗肿瘤活性均有不同程度的季节差异性．     

红树林内生真菌的抗肿瘤活性

从红树植物秋茄、桐花树和白骨壤树皮样品中分离出125株内生真菌。采用MTT法对其体外抗肿瘤活性进行检测,发现11株红树植物内生真菌对KB(人口腔上皮癌)或HL-60(人白血病)细胞具有显著的抑制活性,占总分离菌株的8.8％。秋茄、桐花树和白骨壤的抗肿瘤活性菌株分别占供测菌株的11.6％、5.7％和4.8％。抗肿瘤活性菌株主要分布在拟青霉属及曲霉属。在所分离的菌株中,归属于拟青霉属的活性菌株占供测菌株的比例最高、活性最强。结果显示红树植物内生真菌是潜在的抗肿瘤药物资源。     

水稻内生真菌类群分析及其颉抗病原菌活性研究

采用常规方法对广东省番禺和五山两地种植的水稻内生真菌进行分离、鉴定和比较分析,结果表明两地水稻内生真菌的优势菌群为镰刀菌Fusarium spp..同一地区从感病品种和生长不良水稻植株中分离出内生真菌种类相对丰富.水稻根和茎叶中分离出内生真菌的种类有差异,叶片中内生真菌的多样性高于根部,一些内生真菌的分布呈现出器官特异性.通过平板颉抗试验,发现分离到的内生真菌中有41.2%表现出不同程度的抗水稻病原菌活性,其中镰刀菌Fusarium spp.的比例最大.一些内生真菌的抗病原菌活性与产生铁载体有关.     

信阳杉木内生真菌种类研究

通过组织分离及物种鉴定,对信阳杉木内生真菌种类进行了研究.得到丝孢纲(Hyphomycetes)和腔孢纲(Coelomycetes)真菌4科12属15种.淡色孢科(Moniliaceae)3属5种,暗色孢科(Dematiaceae)2属2种,黑盘孢科(Melanconidaceae)2属3种,球科孢科(Sphaeropsidaceae)5属5种,这些真菌均为半知菌,是杉木内生真菌首次记载.其中,拟茎点霉Phomopsis sp.、球刺盘孢菌Colletotrichum coccodes分布于杉木各样地各器官,为杉木内生真菌广布种.     

空心莲子草内生真菌多样性研究

通过采样、组织分离、培养和鉴定,对入侵植物空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)内生真菌的种类组成、分布规律及其生物多样性进行了初步研究.结果表明:空心莲子草内生真菌种类丰富,从茎、叶中共分离得到16种内生真菌.产孢真菌有12属15种,非产孢真菌1种.产孢真菌全部为半知菌.曲霉1(Aspergillus sp.1)、曲霉2(Aspergillus sp.2)、刺盘孢菌(Colletotrichum sp.)、大茎点霉(Macrophoma sp.)、弯孢霉菌(Curvularia sp.)在供试的各种组织均有分布,且分离率较高,是空心莲子草的优势内生真菌.内生真菌广泛分布于各种组织,总定殖率为81.5%,老茎组织定殖率最高,达90.9%.生境及组织类型对空心莲子草内生真菌的群落结构及定殖率有重要影响.