微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

上海市某行政区空气中细菌总数分布与常见致病菌检测

本文采用FA-1型六级撞击式空气微生物采样器对上海市某区4个功能区的细菌进行了收集,并应用菌落计数器和显微镜对收集到的细菌进行平皿菌落计数以分析空气中细菌总数分布现状.细菌致病性分析采用崂应2050型空气智能中流量采样器对4个功能区的细菌进行了收集,应用环介导等温扩增技术对特定致病细菌进行检测,并对该区的细菌污染状况进行评价.细菌总数和致病细菌检测结果显示:4个监测站点微生物总量的变化范围是294～1 862CFU/m~3,低于3 000CFU/m~3,依据《大气微生物评价分级标准》评价,该区的空气始终处于清洁水平,空气质量较好;夏季空气中检出沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的概率比秋季高.     

大理某医院检验报告单带菌情况分析

目的:研究检验报告单的带菌情况,并行菌属及菌种类型分析。方法:在检验报告单上直接取样增菌接种于血琼脂平板和麦康凯平板培养,用形态学检验及生化反应鉴定到种。结果:1 000份检验报告单,血琼脂平板共生长细菌719株,其中葡萄球菌属518株占72.04%,肠道杆菌175株占24.34%,枯草杆菌26株占3.62%。麦康凯平板共生长细菌369株,其中葡萄球菌属299株占81.03%,肠道杆菌70株占18.97%。结论:检验报告单主要带菌为葡萄球菌和肠道杆菌,其中葡萄球菌以表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为主,肠道杆菌以耶氏菌和志贺氏菌为主。     

奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎小鼠模型的建立

目的利用从临床乳腺炎奶牛乳样中分离纯化的金黄色葡萄球菌（S.aureus）感染小鼠乳腺,建立奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎小鼠模型。方法将产后8～10 d的ICR远交系母鼠随机分为3组,包括无菌生理盐水对照组,低剂量攻菌组（含金黄色葡萄球菌2×102CFU）和高剂量攻菌组（含金黄色葡萄球菌5×106CFU）。以小鼠第4对乳腺为攻菌部位,用非损伤方法经乳头管注入生理盐水或金黄色葡萄球菌。攻菌24h后采集乳汁进行白细胞计数;从眼球采血,进行血常规检测和流式细胞计数;之后处死母鼠,取乳腺组织进行匀浆细菌计数,并做乳腺组织切片。结果高剂量攻菌组不论是体温、组织学观察,还是乳汁白细胞计数、乳腺匀浆细菌计数、血常规指标和流式细胞计数,都和对照组有显著或极显著差异（P〈0.05）;而低剂量攻菌组与对照组相比,除血液CD4＋/CD8＋比值差异显著外（P〈0.05）,其余指标差异均不显著。结论金黄色葡萄球菌浓度为5×106CFU、攻菌时间24 h时,成功建立了远交系小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎模型,而2×102CFU细菌浓度则不适于远交系小鼠乳腺炎模型的建立。     

浅谈对食品安全国家标准微生物学检验方法的理解与应用

2010年3月26日,卫生部公布了《生乳(》GB19301-2010)等66项食品安全国家标准,随着本次乳品标准的公布,涉及的10个GB 4789系列食品微生物学检验标准也进行了修订,并定格为食品安全国家标准。新标准的颁布实施,对于进一步规范食品微生物检验、提高食品微生物检验的准确性和可靠性,都具有十分重要的作用。本文拟结合工作实践,就食品微生物检验中常规的菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等项目在新旧标准中的异同点和值得注意的条款,提出我们的浅见和作法,以供商榷。     

乳粉中常见致病菌的多重荧光PCR检测

利用多重荧光PCR技术快速检测乳粉中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌.以沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因为靶基因,选择特异性引物,以参照菌种为对象,验证引物的特异性,建立多重荧光PCR检测方法,人工添加沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌,确定方法的检出限.结果表明该方法特异性强、灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为1CFU/mL,可在8h内完成对乳品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌的检测.     

基于多功能纳米酶的高灵敏金黄色葡萄球菌Apt-LFA检测方法

侧流层析分析(lateral flow assay, LFA)具有操作简单、成本低等优点,在致病菌检测领域应用前景广阔,但以胶体金为标记的LFA比色分析灵敏度较低。基于此,通过合成万古霉素修饰的Fe₃O₄@MOF@PtPd作为磁分离/纳米酶双功能信号探针,并与金黄色葡萄球菌适配体(aptamer, Apt)相结合,实现了夹心模式的LFA检测。在最优条件下,该LFA传感器可以实现对金黄色葡萄球菌的检测,其线性范围为10～100 000 CFU/mL,检测限为2 CFU/mL;该试纸条对牛奶中所添加金黄色葡萄球菌的所得回收率为96.9%～103.4%。研究结果反映出该LFA传感器具有灵敏度高、操作简便的优点;同时,其具有通用性,仅通过更换适配体就能应用于其他革兰氏阳性菌的检测。     

负载黄酮类药物细菌纤维素的抑菌效果的研究

为了探究负载黄酮类药物细菌纤维素的抑菌效果,实验采用平板划线法与涂布平板法,分离提纯得到大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的单菌落进行培养;抑菌实验方法为抑菌圈法,用负载黄酮类似物的细菌纤维素膜放置在涂布好实验细菌的培养基中培养得抑菌圈。研究表明:负载黄酮类药物(槲皮素、桑色素及黄芩素)细菌纤维素膜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有良好的抑菌效果。     

产黄酮马齿苋内生真菌的筛选及代谢产物抑菌效果初步研究

从马齿苋植株中分离内生真菌,提取其代谢产物,以黄酮类化合物显色反应和紫外光谱特征对内生真菌代谢产物进行初步鉴定,筛选得到产黄酮内生真菌AG-10,使用ITS1、ITS4通用引物,扩增菌株AG-10的18S rDNA序列,结合菌落和分生孢子形态特征,对菌株AG-10进行分类鉴定,并采用滤纸片法研究AG-10的代谢产物抑菌效果;菌株AG-10鉴定结果为镰刀菌(Fusarium sp.),其代谢产物可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,最小抑菌质量浓度分别为1.0 mg/mL和2.0 mg/mL。研究结果证实了马齿苋中存在有可能产黄酮类化合物的内生真菌,为利用微生物产黄酮类化合物提供参考。     

大蒜汁抑菌作用的研究

采用平板菌落计数法,比较不同浓度的生蒜汁、熟蒜汁、醋酸汁、糖蒜汁对常见的3种菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)的抑菌作用.结果表明:生蒜、醋蒜汁对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用,且生蒜汁和醋蒜汁的抑菌作用显著高于熟蒜和糖蒜,且随大蒜汁浓度的增加,抑菌作用逐渐增强.     

菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响

为探讨受试菌菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响,该文采用微量稀释法测定阿莫西林/克拉维酸（4：1）、庆大霉素、多西环素和恩诺沙星等4种药物对鸡大肠杆菌和鸡金黄色葡萄球菌在不同菌悬液浓度（10^3CFU/mL、10^4CFU/mL、10^5CFU/mL、10^6CFU/mL、10^7CFU/mL）的最小抑菌浓度（MIC）值。结果表明：恩诺沙星对两类细菌的MIC值不受接种的菌悬液浓度影响;多西环素对大肠杆菌的MIC值受菌悬液浓度影响较小,但其对金黄色葡萄球菌的MIC值随菌悬液浓度升高而升高;阿莫西林/克拉维酸（2：1）和阿米卡星对两类菌株的MIC值均随菌悬液浓度增大而增大,增大的幅度因药物和受试菌不同而异。     

实验动物金黄色葡萄球菌LAMP法快速检测

目的建立一种灵敏、高效,可用于实验动物金黄色葡萄球菌检测的环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。方法针对金黄色葡萄球菌nuc基因(V01281.1)参考设计4条LAMP扩增引物,并选取常见实验动物致病菌进行引物特异性检测;通过优化LAMP反应体系中Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度及LAMP反应时间,确立LAMP反应最佳条件;本文采用LAMP法和PCR法对不同浓度梯度的金黄色葡萄球菌以及用不同浓度金黄色葡萄球菌人工感染的粪样进行检测,比较两种方法的检测灵敏度。结果通过条件优化,本实验建立的LAMP法检测实验动物金黄色葡萄球菌的最佳反应温度为60℃,反应时间为50 min,优化后的LAMP反应体系为dNTP浓度2.0 mmol/L、Mg~(2+)浓度8.0 mmol/L、引物对FIP/BIP浓度1.6μmol/L、引物对F3/B3浓度0.2μmol/L,且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应;对金葡菌纯培养物进行检测,LAMP法检测灵敏度为9CFU/反应管(9×10~3CFU/mL),PCR法检测灵敏度为9×10~1CFU/反应管(9×10~4CFU/mL),对人工接种金黄色葡萄球菌的SD大鼠粪样进行检测,LAMP法检测灵敏度为4.49×10~4CFU/0.1 g粪样,PCR法检测灵敏度为4.49×10~5CFU/0.1 g粪样。结论本实验建立的实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法,与PCR法,免疫学法和传统检测方法比较,具有特异性强、灵敏度高、操作简单等特点,可应用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。     

流式细胞术对生乳中微生物检测的应用研究

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种对流动的单细胞或小颗粒分子进行快速、多参数检测的新兴技术,其以快速、精确的特点,被应用于食品微生物的检测中。本研究以牛乳为材料,使用蛋白酶消化和尼龙膜过滤的方法来去除生乳中的大颗粒物质;利用7-AAD进行染色,结合荧光微球,对细菌总数进行计数;在FACS Aria II flow cytometer(BD)流式细胞仪的操作系统上建立微生物的检测程序检测细菌总数;检测限达到101 CFU/mL数量级。检测结果与平皿菌落计数法进行比较分析,结果表明,流式细胞术与平皿菌落计数法的结果呈显著相关(P0.01)。     

MTT法检测金黄色萄萄球菌活菌数的研究

以金黄色葡萄球菌为对象,探讨了MTT法应用于细菌细胞数定量分析时,MTT作用时间、毒性、剂量和DMSO用量等因素对活菌计数的影响.结果表明:当细菌数在105～107个/mL时,吸光度值与细菌数目呈良好的正向线性关系,MTT法可准确检测金黄色葡萄球菌的活菌数量.最佳反应条件为:0.25 mg/mL MTT溶液作用2 h,DMSO为2～2.5倍的菌液体积.     

沼泽红假单胞菌优化培养及检测方法的研究

目的和意义:研究培养基各组分的优化组合,提升活菌数;比较不同培养方法,探索简便有效菌落检测计数模式的建立.本实验研究有利于实际生产和应用中提升菌落培养和检测计数的效率,可为简便、快速的菌落检测计数模式的建立提供一定的理论依据.方法:采用L27(3)13正交表,对沼泽红假单胞菌所需的营养组分在一定的范围内进行优化试验,筛选出最佳组合的配方;分别采用三种培养方法(双层平板稀释涂法,平板稀释涂布法及半固体试管法)进行培养,比较试验检测计数的结果,确定出方便、快捷检测计数的培养方法.结果与结论:经优化实验研究得到能提升菌数的培养基配方为酵母膏0.4g,NH4Cl 0.3g/L,Na2HPO4 0.06g/L,CH3COONa 2.5g/L,Mgcl2 0.03g/L,微量元素液1.5ml/L,生长因子溶液1ml/L,pH 7.8+0.2.在此培养基配方情况下,双层平板平板法及半固体试管法培养方法能较显著提升菌落检测计数的准确度和效率.     

大蒜汁抑菌作用的研究

采用平板菌落计数法,比较不同浓度的生蒜汁、熟蒜汁、醋酸汁、糖蒜汁对常见的3种菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）的抑菌作用.结果表明：生蒜、醋蒜汁对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用,且生蒜汁和醋蒜汁的抑菌作用显著高于熟蒜和糖蒜,且随大蒜汁浓度的增加,抑菌作用逐渐增强.     

2017年夏安庆市大型超市冷冻食品微生物污染状况调查与分析

依据《食品微生物学检验》(GB 4789.1-2016)、《公共场所卫生检查方法》(GB/T 18204.3-2013)和微生物测试片法,于2017年夏对安庆市7个超市冷冻食品微生物和空气微生物进行了检测,采用SPSS17.0进行数据处理和分析。共检测冷冻食品7类,49份,合格42份,总合格率85.71%(42/49),其中,金黄色葡萄球菌超标占不合格份数的42.86%(3/7),细菌菌落总数超标占不合格份数的28.57%(2/7),大肠杆菌超标占不合格份数的28.57%(2/7);不同超市食品微生物合格率与空气微生物浓度之间无统计学意义(p>0.05),且两者之间的相关性极弱(R<0.3)。安庆市大型超市冷冻食品微生物污染较严重,食品药品监督局要加强对食品的监测、监督和宣传,并加大执法力度,同时市民也要增强对食品卫生的关注力度。     

白头翁对金黄色葡萄球菌和产气肠杆菌抑菌作用的研究

采用滤纸片法和试管稀释法研究不同浓度的白头翁提取物药液对金黄色葡萄球菌和产气肠杆菌的抑制作用.结果表明,白头翁对金黄色葡萄球菌及产气肠杆菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,最低抑菌浓度为62.5 mg/mL,对产气肠杆菌抑制作用一般,最低抑菌浓度为250 mg/mL.     

HACCP体系对冻干葱产品菌落总数的控制效果

为了检验Hazard Analysis and Critical Control Point(简称HACCP)体系对产品菌落总数的控制效果,本文特采用数理统计的方法对冻干小香葱产品执行HACCP体系前后菌落总数的数据进行分析研究,结果发现两种情况菌落总数均呈威布尔分布,以104 CFU/g为标准,执行HACCP体系后,产品合格率从未执行前的39%左右提高到96%以上,这说明HACCP体系对产品微生物具有良好控制效果,值得在食品工业中推广应用.     

茶多酚/淀粉可食性膜的制备及其性能

采用流延法制备含不同浓度茶多酚的淀粉可食性膜,对其性能进行表征,以期得到具有一定功能活性的薄膜.结果表明:茶多酚对薄膜的表面结构和水分含量无显著影响;薄膜透明度和接触角随茶多酚含量增加而显著减小;当茶多酚含量为5%时,薄膜具有较好的机械性能和较低的水蒸气透过性;与纯淀粉膜相比,茶多酚/淀粉膜有助于延缓鱼油氧化,可有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长;在抑菌试验中,基于计算机视觉和机器学习技术建立的自动菌落计数技术能够准确、高效地进行菌落计数.