水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建

根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58,经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP）中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPⅡ和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。     

水稻petH基因启动子的克隆及其转化载体的构建

以水稻幼嫩叶片为材料,提取基因组DNA;根据GenBank公布的该启动子序列设计引物,克隆了水稻的petH启动子,并构建了用于植物转化的双元载体p1391Z-OsR-petH-pro,为进一步研究该启动子在植物体中表达调控模式提供了试验条件。     

水稻花粉Profilin基因启动子的克隆及序列分析

作者使用两次染色体步移（Genome walking)法,从灿稻（Oryza sativa subsp.indica)IR36中克隆到长度为569bp的花粉proiflin基因的启动子片段,并进行了全序列测定和分析。结果表明：在该段序列中含有3个TATA box,3个CAAT box和2个G－box。通过EPD（The Eukaryotic Promoter Database)的比较发现,序列的＋2－-71区域与番茄（Lycopersicon esculentum)花粉特异基因LAT52,向日葵（Helianthus annuus)花药特异基因SF2启动子关键序列的同源性为50％左右。     

长江中游地区水稻中醇溶蛋白的提取与优化

为了提高水稻中醇溶蛋白提取效果,以长江中游水稻为研究对象来优化提取技术。对温度、时间等因素进行控制,通过G-250染色法分析提取效果。实验结果表明,当实验温度为50℃、提取时间为10h、离心环境设置为10000r/min,持续10min、料液比设置为0.025g:1ml、提取液为70%乙醇时,溶酶蛋白提取为最佳条件。同时,与默认条件相比,最佳条件提取效果整体提升7.98%。由此可见,控制好实验条件因素将进一步改善溶酶蛋白提取效果。研究内容将水稻品种鉴定以及蛋白提取提供重要技术支持。     

水稻（IR36）基因文库中与玉米醇溶蛋白基因同源克隆的分离

本研究以玉米醇溶蛋白基因(Zein)为探针,从水稻(IR36)基因文库中筛选出一个具有同源顺序的克隆λRASI,并制作了其插入水稻片断(14.2kb)的限制性内切酶物理图谱.Southern杂交结果表明,与Zein基因同源的区域位于λRASI插入序列的0.9kb EcoRI-HindⅢ片断上.     

青海高原春小麦醇溶蛋白电泳分析

采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ａ－ＰＡＧＥ）法,分析了青海省不同地区同一品种和同一地区不同品种（系）的春小麦籽粒醇溶蛋白电泳图谱。结果表明：不同地区同一品种的电泳图谱一致;同一地区不同品种（系）间的电泳图谱差异显著,并显示出各自特独的谱带组合。证明麦醇溶蛋白的组成完全的组成完全由遗传决定,不受外界环境条件的影响。     

高粱种子醇溶蛋白的提取条件

以高粱种子为材料,研究了不同提取剂、提取剂用量、浓度和还原剂浓度对高粱种子醇溶蛋白提取的影响.蛋白浓度测定和SDS PAGE电泳表明,DDT浓度为4%的60％叔丁醇溶液,样品质量比提取剂用量为1∶8（g/mL）是提取高粱种子醇溶蛋白的最佳条件.该条件下,提取高粱属不同种的种子醇溶蛋白,得到的高粱属种子醇溶蛋白的“指纹”图谱,可以用来区分高粱属内的种间差异.     

大麦醇溶蛋白基因片段克隆和RNAi植物表达载体构建

 为了降低啤酒大麦蛋白的含量,提高啤酒大麦品质,利用甘肃推广面积最大的品种甘啤4号为材料,克隆大麦醇溶蛋白基因保守区序列,构建RNAi表达载体。根据已知大麦醇溶蛋白基因保守序列设计一对特异性引物B2PF5′-CAACCATTTCCACAGCAACCACCAT-3′,B2PR5′-GAAAGATAGAGTAGACGATTGCACG-3′,采用PCR技术从甘啤4号大麦基因组中获得了1个349bp片段（GP4）。依据载体pHANNIBAL和pART27的结构,分别将GP4按所对应酶切位点正反向插入,利用热激法转化。结果分析显示,克隆出的片段与GenBank （NCBI）中醇溶蛋白基因核苷酸序列同源性高达92%,所构建成的RNAi表达载体pART27-pHAN-GP4中含目标片段。     

玉米渣提取玉米醇溶蛋白工艺初探

主要介绍了从玉米渣中提取玉米醇溶蛋白的工艺。从玉米醇溶蛋白不溶于水和无水乙醇,而只溶于60％～95％的醇水溶液中的特殊溶解性出发,利用90％的乙醇溶液,在45～55℃、pH8．0的条件下处理3～4h,可将玉米醇溶蛋白从玉米渣中提取出来。并通过实验确立了各步的工艺条件,在此奈件下玉米醇溶蛋白的得率可达80％。     

松树根特异性启动子驱动的转CMO/BADH基因水稻的耐盐性研究

运用松树根特异性启动子PmPgPR10驱动把CMO/BADH双价基因转入水稻.对转基因植株根和叶的CMO酶、BADH酶活性及其它生理生化指标进行了测定.结果表明:CMO/BADH双价基因能在根部特异性表达.文章还对转基因提高植株耐盐性的机理进行了探讨.     

水稻花粉特异性启动子的克隆与表达

利用PCR技术,从水稻幼苗总DNA中扩增并克隆了一段DNA片段。将该片段与报告基因GUS基因融合,构成植物表达载体。经农杆菌转化烟草萌发花粉,共培养约24h后,作瞬时表达检测。结果表明,该克隆片段具有启动子功能。DNA序列分析表明,该克隆片段长度为526bp,含有TATA盒及CAAT盒。与原基因（PSI）启动子序列比较,同源性为52％。部分顺式调控元件相同。     

转抗菌肽B基因水稻(Oryza sativa L.)植株的再生

通过研究除草剂Basta对水稻品种台安 1号愈伤组织生长的影响 ,确定了能抑制愈伤组织生长的最低剂量 ;在此基础上将抗菌肽B基因 (cecropinB)和bar基因导入了台安 1号基因组。除草剂抗性鉴定结果表明 :转基因植株表现出对Basta较强的抗性 .     

水稻OsMDH基因的克隆及其生物信息学分析

水稻(Oryza sativa L.) OsAAP6基因是控制水稻种子蛋白质含量的主效数量性状座位(quantitative trait locus,QTL)基因,对水稻品质性状产生重要影响,而OsMDH蛋白能够与OsAAP6基因发生相互作用。利用生物信息学策略对OsMDH蛋白的理化性质、蛋白结构及功能进行预测,探究OsMDH基因的生物学功能。结果表明：水稻OsMDH基因的编码区(coding sequence,CDS)区长999 bp,编码332个氨基酸;编码蛋白为疏水蛋白且不存在信号结构,包含两个跨膜结构。通过蛋白互作分析,发现OsMDH可能与柠檬酸合酶、延胡索酸酶等发生相互作用,参与三羧酸循环过程。     

麻疯树毒蛋白(curcin)基因转化水稻的研究

以粳稻(Japonica)品种日本晴与中花11号为材料,对影响农杆菌介导水稻转化体系的几个因素进行了研究,建立了农杆菌介导的有效水稻转化体系.在该体系中,首次使用浓度为10-4g/mL嘌呤合成抑制剂acivicin在转化前对水稻愈伤组织进行预处理,结果表明此法可有效提高GUS基因的瞬时表达率.同时,利用插入了麻疯树毒蛋白(curcin)基因的植物表达质粒pBI121-curcin,通过农杆菌介导转化水稻,获得了多株转基因植株.通过PCR鉴定,证实curcin基因已整合到水稻基因组中.     

水稻叶色突变研究进展

水稻叶色突变体表型变异明显,易于观察、利用和鉴别。叶色相关基因在水稻叶绿体形成与发育、叶绿素代谢等过程中,具有极其重要的作用。目前,在水稻所有的染色体中都发现了控制叶色相关的基因。文章从叶绿素合成、降解、水稻叶色突变表型以及叶色变化的分子机制等方面阐述了水稻叶色突变形成的机制。