肝片吸虫抗原基因的克隆与筛选

提取肝片吸虫总RNA,经oligo(dT)-纤维素柱分离得到mRNA,反转录合成cDNA后,连接Eco RI人工合成接头,酶切后克隆到表达型质粒载体pGEX-1λT,转化大肠杆菌JM107菌株构建肝片吸虫cDNA文库(文库大小约为2.1×105)．用免疫印迹筛选出5个阳性克隆,分别命名为pFH2,pFH4,pFH16,pFH21和pFH29．其中pFH21印迹信号最强．Eco RI酶切pFH21显示插入片段大小约为1.0kb.重组子pFH21经SDS-PAGE电泳显示表达有一个重组蛋白,分子量约为48kD.     

肝片吸虫保护性抗原基因在卡介苗中的表达

用ECoR　I酶切合肝片吸虫保护性抗原基因FH3的重组质粒pUC18／FH3,回收FH3(约1．0kb)片段并测定其碱基序列．FH3片段以正确相位插入到E．coli—分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV261中,构建含有肝片吸虫保护性抗原基因的重组穿梭质粒．通过电转移法转化卡介苗,斑点杂交实验汪明,重组卡介苗中含有此抗原基因．热诱导FH3基因在卡介苗中的表达,并对基图表达产物进行别SDS—PAGE分析．结果显示,表达产物相对分子量为22kD．     

肝片吸虫和巨片吸虫染色体和同工酶的研究

本文研究了来自国内数省份的片形吸虫的染色体和同工酶,发现肝片吸虫的染色体为三倍体型,巨片吸虫的染色体为二倍体型。根据二者核型相近、酯酶同工酶一致以及生活史各期虫体形态相似,作者认为肝片吸虫是巨片吸虫的同源三倍体的种类。     

肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

山羊血浆环核苷酸在感染肝片吸虫前后的变化

用放射免疫方法测定山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ正常水平值以及感染肝片吸虫后的动态变化。结果表明：山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ的正常值分别为（０．８０±０．０３）,（０．８３±０．０３） ｐｍ ｏｌ·ｍ Ｌ－ １,（０．６９±０．０４）,感染１ 组和２ 组山羊在感染后第１～６ 周,血液中ｃＡＭＰ水平显著低于或低于对照组,以后两组水平相当。感染１ 组的ｃＧＭＰ水平在感染后５～９ 周期间低于对照组,而感染２ 组山羊的ｃＧＭＰ水平在感染后１～４ 周高于对照组。感染１ 组和２ 组山羊的ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值分别在感染后１～４ 周和１～６ 周呈现低于对照组的趋势,但差异不明显。因而,肝片吸虫感染可导致宿主的ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ紊乱。     

肝片形吸虫精子发生的染色体动态研究

采用常规细胞染色空气干燥标本制片技术制片及直接涂片,观察100个虫体的200张滴片,20个虫体的40张涂片,发现肝片形吸虫精子发生的染色体动态是:1.精原细胞,分为A型和B型。A型胞核内染色质细粒状,着色较深。B型胞核内染色质颗粒多沿核膜分布,着色较浅。在精原细胞增殖的有丝分裂中,其染色体中期相2n=20。2.初级精母细胞,核内染色质呈颗粒团,随后细胞进入第一次成熟分裂(减数分裂),其过程分为前期、中期、后期和末期,各期细胞染色体形状、大小相异。3.次级精母细胞,核内有大小不等的染色质颗粒团或染色痕迹。4.精细胞,染色体为单倍体(n=10)胞核由圆形迎渐为椭圆形、钉子形、V形、S形、弯梭形,最后由弯梭形的细胞分化产生精于。5.精子,头颈部螺旋状锥形,尾细长。     

肝片形吸虫成虫及虫卵的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜系统观察了肝片形吸虫的体表结构和虫卵.1.在口腔内壁上密市有细绒毛,其间还有很多小孔.2.肝片形吸虫的体棘在头锥部份排列整齐而有规则,共有60圈,每圈60～70个.在腹吸盘以后的体棘则规律不明显.3.本文将观察到的不同形态的体棘,按其发育过程分为初生期,早期,中期及后期体棘四类,它们的末端都呈锯齿状.体棘窝较浅.因此体棘较易脱落.4.在张开的生殖腔中,同时观察到了雌雄生殖系统的2个开口,并对伸出体外的阴茎进行了描述.5.肝片形吸虫卵的表面光滑,但在其外膜脱落后则有散在性的小凹陷;卵盖与卵壳连接处虽不很整齐,但并不呈锯齿状.约60%的虫卵后端也具有小结节.     

牦牛肝片吸虫四种抗原交叉免疫印迹分析

用牦牛肝片吸虫四种抗原分别制备四种抗血清，其ＥＳＩＳＡ效价 １：８００，１：１６００，１：３２００和１：８００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳区带组分分别为２５，２４，１８和９条带；免疫印迹结果，各种抗清与相庆抗原作用的主要抗原成份分别为５，１０，７和３；四种抗原中存在的共同抗原为１７．２ｋＤ；特征抗原ＨＡ为２９．９ｋＤ，ＳＡ为２７．２ｋＤ的２４．３ｋＤ；正常兔血清与各个抗原间均未出现免疫反应。     

肝片形吸虫种类鉴定PCR方法的建立

为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪观察;用核酸蛋白测定仪测定肝片形吸虫gDNA的浓度,然后将gDNA原液进行不同倍数的稀释,筛选最佳条件,进行敏感性检测.结果显示只有肝片吸虫样品有特异性条带,对照样品均呈阴性;可以检测到的最低DNA浓度分别为1.17 ng/μL、0.59 ng/μL.     

流感病毒疫苗研究现状、发展趋势和展望

 流感大流行严重威胁人类的生命健康和社会经济的发展。及时提供充足、有效的流感疫苗是目前各国应对流感大流行的首选方法。然而,目前流感疫苗还存在许多问题,如生产周期长、保护范围有限（不具备广谱性）、易产生过敏反应等。为此,各国政府和科研团体都在进行着不懈的努力以应对流感的大流行。本文介绍了目前国内外使用的流感疫苗,比较了流感灭活疫苗和减毒活疫苗的优缺点;针对当前流感病毒疫苗研制中亟待解决的问题,即疫苗的保护时效及合适的培养基问题,探讨了解决的思路以及取得的进展;结合中国在流感方面的主要研究进展,探讨了中国流感病毒疫苗相关基础研究中需要解决的关键科学问题,并对未来流感的防控进行了展望。     

转乙肝表面抗原基因植物疫苗研究的进展

介绍了转基因疫苗生产的原理及方法,综述了转乙肝表面抗原基因植物疫苗的研究进展,探讨了转基因植物研究中所存在的问题及其转基因植物疫苗的优点及前景。     

苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化

将苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate,A1MV-Ch)的复制酶P2亚基(90 kD蛋白)基因的全长cDNA构建到植物表达载体pROKⅡ中,得到重组植物表达载体pAIMV-FL．用三亲融合法导入农杆菌LBA4404,并转化烟草,经PCR检测,获得了含全长cDNA的转基因烟草植抹．     

抗A5型口蹄疫病毒重组多肽疫苗的研究

根据A型口蹄疫病毒（FMDV）的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果。设计了A型FMDV的重组多肽疫苗．分别选择VP1上21～40位和137～160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137～160—21～40-137～160的串连结构,并以大肠杆菌β-半乳糖苷酶为大分子载体,构建重组质粒pLM99,在大肠杆菌中表达得到高含量的融和蛋白．体外免疫原性检测表明,所表达的融和蛋白与标准A型阳性血清有特异性抗原／抗体反应,即说明该融和蛋白具有免疫反应性．免疫豚鼠的实验结果表明,融合蛋白能在豚鼠体内诱导中和抗体,并使70％的豚鼠能抵抗病毒的攻击．