中华鳖种群RAPD分析

选用14个随机引物对中华鳖基因组DNA进行了随机扩增DNA片段多态性（RAPD）分析，14个引物，在8个待检样品中共扩增出714条清晰的DNA片段，片段大小在200～3000bp之间，平均每一引物在每个样品中扩增了6．0条带，统计结果表明，中华鳖群体内平均相似率0．857，总平均带纹频率0．773，遗传变异率为0．227．研究表明，中华鳖为遗传共享度较高的群体。     

福建省6种早熟良种柚的RAPD分子标记研究

采用改良的CTAB法成功提取龙柚等6种福建省旱熟良种柚叶片的DNA,并对其进行RAPD分析．从初选的100个随机引物中筛选出12个扩增效果较好的引物,对提取的DNA进行PCR扩增,获得清晰可重复的位点107个,平均每条引物产生的位点为8．9个,其中多态性位点93个,占86．9％;在部分样品中检出了特异性RAPD标记24个,占23．4％：样品间遗传相似系数比较和UPGYA聚类分析表明坪山柚和文旦柚的亲缘关系最近,度尾蛮柚和四季柚分别与其它5个柚类的亲缘关系较远．     

基因枪法导入cyclAt和GUS基因获得转基因水稻

以cyclAt基因为目的基因,HPT和GUS为选择和报告基因,应用PDS-1 000/He型基因枪协同转导,通过轰击来源于水稻成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织,获得了转基因水稻植株.结果表明:通过X-Gluc染色分析,GUS基因在愈伤组织和再生植株叶片中的表达效率高.以转基因植株的基因组DNA为模板,用cyclAt基因的特异性引物对其进行PCR扩增,只检测到1 000 bp左右的片段,比其1 604 bp的完整序列小,因此推测cyc1At基因在转导入水稻后被剪接.此外,在协同转导过程中,cyc1At和GUS可能与受体基因组DNA随机整合,因此视GUS基因为报告基因有一定局限性;但两者同时被整合的频率远高于单一基因的整合.     

拟南芥FIE基因特异片段的克隆及序列测定

根据拟南芥FIE基因的序列设计PCR引物,以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR反应扩增FIE基因特异性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长为1633bp,与预期结果相符。将该基因片段定向克隆到pGEM-T载体上,得到重组质粒p1633,酶切鉴定及测序分析结果表明该克隆为拟南芥FIE基因特异片段,与拟南芥FIE基因比较同源性达99.8％,可以作为探针使用。     

含ipt基因的根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的研究──Ⅲ苗期形态特征分析

将含有３５ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４,做为供体．以大豆萌动种胚为受体,用菌液浸染法转化大豆品种黑农３６．对转化植株及对照植株苗期在发芽率、株高、叶子、致瘤等形态特征进行观察．发现转基因植株与对照植株有明显差异．转化植株生长状况明显弱于对照植株．植株矮小、叶子畸形生长,根致瘤率低．间接验证了外源ＤＮＡ的导入．说明苗期形态学分析可做为转基因植株早期筛选的方法之一．     

PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA

提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法．根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier 5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA．实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列．     

黑麦草漆酶编码基因片段的克隆与序列分析

黑麦草中木质素的结构、含量是决定其饲用品质的主要因素。漆酶是木质素生物合成中的关键酶之一,属于多铜氧化酶基因家族。根据报道的植物漆酶编码基因的氨基酸序列中铜离子结合域及N-端糖基化位点两个保守区设计4对引物,以黑麦草总DNA为模板,经PCR扩增、克隆、测序后得到3个有效序列,分别命名为Lac10-1、Lac8-1和Lac11-1。序列分析表明,3个基因片段的编码蛋白不仅含有保守的蓝铜氧化酶结合区域HAH和N-末端糖基化位点,而且分别与黄杨、黑麦草中分离的漆酶编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性。因而,推断克隆到的3个基因片段是黑麦草漆酶基因家族的成员。     

不同来源苦楝种质资源遗传多样性的RAPD分析

对来自不同地区的15份苦楝个体用RAPD技术分析其遗传多样性,20个随机引物共扩增出193条重复性好、清晰的位点,其中多态位点共计189个,占97.9%.聚类分析表明：云南保山与四川绵阳种源间的遗传距离最大（0.936）,福建永泰与福建建瓯之间的遗传距离最小（0.186）.应用UPGMA聚类分析法构建了DNA分子系统树图,为基于DNA分子水平深入探讨苦楝不同种源间的亲缘关系和系统位置奠定了良好的基础,在散生乡土树种遗传多样性研究方面进行了开拓性和有意义的探索.     

5个温郁金居群遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR标记技术对瑞安、乐清和平阳三个地区5个居群的温郁金(Curcuma wenyujin)遗传多样性进行分析,筛选出6个引物用于温郁金5个居群的50个个体ISSR-PCR扩增,共检测到42个结合位点多态位点34个,多态位点百分率是80.95%.总的基因多样度平均值为0.239 5,居群内的基因多样度为0.161 8,居群间的基因多样性为0.0777.基因分化系数在0.019 1⁰.9414之间,平均值为0.324 5,其中居群间的遗传变异占总遗传变异的32.45%,居群内的遗传变异占总变异的67.55%.温郁金有着较高的遗传多样性水平,且居群内发生了较高的遗传分化.基因流系数Nm为1.041 0,表明温郁金居群间的基因交流也比较多.     

G型小麦细胞质雄性不育RAPD分析

对小麦G型细胞质雄性不育的供体材料、轮回亲本和近等基因品系进行RAPD分析,在200个随机引物中获得二个具有多态性的特异片段．     

RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨

进行了RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨.利用蜘蛛的附肢作为其基因组DNA抽提的材料,且该改进的方法所抽提的蜘蛛基因组DNA的产量与纯度足以满足RAPD分析的要求;通过优化RAPD PCR反应条件,可以获得清晰度高,重复性好的RAPD图谱以用于蜘蛛(如拟水狼蛛Piratasubpraticus)、拟环玟豹蛛(Par dosapseudoannulata)、武昌獾蛛Trochosawuchangensis等)的遗传多样性研究;在不投食饲养武昌獾蛛一个月以上的前提下,用随机引物S92(5′CAGCTCACGA3′)比较分析了武昌獾蛛的头胸部与其附肢各自的RAPD图谱的差异,差异不显著(P>0.05).结果表明:蜘蛛的附肢和头胸部均可作为其遗传多样性研究材料,但以前者为材料可以有效防止异源DNA的干扰.因而,其基因组DNA在作为蜘蛛遗传多样性的RAPD分析模板时要优于头胸部.     

单只不育果蝇未知基因的反向PCR

根据ｐ转位子诱变和ｐｏｘｎ基因双杂合子法检测化学感受器数目的变化,筛选到一系列突变个体,其中一个雄蝇腿部表现出不能形成化学感受器的突变表型;遗憾的是该只雄蝇是不良的,为了克隆该基因,研究出一种微量ＤＮＡ反向ＰＣＲ法,该法可用０．５只果蝇扩增出Ｐ转位子插入点相邻的基因组片断,方法简便可靠。     

羊草(Leymus chinensis)psbD基因开放读码框(ORF)的克隆及序列分析

从羊草中提取总RNA,采用简并PCR方法,扩增出编码353个氨基酸的psbD基因开放读码框(Open read ing frame,ORF)cDNA序列,GenBank登陆号为FJ176573,并对其序列进行了分析.同时次基因组DNA为模板对psbD基因开放读码框区域进行了扩增,证明该基因无内含子,为其功能的进一步研究提供基因材料和理论依据.     

不同倍性鱼cdc2基因cDNA部分序列的克隆及其在卵巢中的表达分析

利用3-’RACE的方法分别从异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的卵巢中克隆了cdc2基因cDNA的部分序列.选取这3种鱼cdc2 cDNA中一段长为157 bp的保守片段设计特异引物,通过Real-time PCR检测cdc2 mRNA在这3种不同倍性鱼卵巢中的表达水平,结果表明cdc2转录量随着倍性的递增而相应升高.     

ftsZ基因和16SrDNA特异引物检测栗瘿蜂体内 Wolbachia感染研究

应用Wolbachia的ftsZ基因和16SrDNA特异引物,通过PCR扩增法检测栗瘿蜂Dryocosmus kuriphilus(Yasumastu)6个地理种群(河北保定、山东泰安、甘肃陇南、湖南株洲、湖南怀化、福建福州)体内Wolbachia感染情况.结果表明:野外采集的6个地理种群全为雌性个体;湖南株洲、福建福州两个地理种群体内有Wolbachia感染,感染率分别为25.0%和87.9%,其余4个地理种群未发现Wolbachia的感染.     

拟南芥LRR-RLK亚家族基因At1 g09970突变体鉴定及表型观察

LRR-RLK是植物类受体蛋白激酶家族(RLK)中最大的亚家族.该亚家族基因在调控植物体生长发育和抗逆性方面发挥重要作用.At1g09970是LRR-RLK亚家族成员.通过PCR和RT-PCR在DNA和RNA水平上筛选鉴定At1g09970对应的T-DNA插入失活的突变体.对萌发和萌发后阶段进行突变体的表型分析结果表明,At1g09970突变体在萌发后对NaCl敏感,暗示该基因与植物的抗盐胁迫有关.