花生根瘤菌转吸氢基因的研究

以ｐＲＫ２０７３为辅助质粒、通过三亲本杂交，将携带豌豆根瘤菌吸氢基因的质粒ｐＡＬ６１８转移到花生根瘤菌ＮＢ２中，通过抗性筛选、质粒检测及吸氢活性测定，获得一系列能稳定遗传的结合株，其中ＮＢ２－７，ＮＢ２－１１在自生条件下其吸氢活性为受体株的１５倍，在共生条件下其吸氢活性为受体株的２～３倍．     

几株花生根瘤菌的内源质粒及其与吸氢酶关联

近年来,根瘤菌吸氢酶基因的研究取得可喜进展,豌豆根瘤菌(Rhizobium lequminosarum)的吸氢基因已证实与结瘤基因连锁共同编码于大质粒上。慢生型大豆根瘤菌(R.japonicum)的吸氢基因则由染色体编码,并进行基因结构和核苷酸序列的分析。花生根瘤菌(R.Trachis)内源质粒的存在情况未见报道。本工作以某些具有吸氢能力(Hup~+)和不具吸氢能力(Hup~-)的菌株为研究对象,采用Hirsch和倒转停顿电场凝胶电泳(FIGE)等方法,检测花生根瘤菌内源     

花生根瘤菌共生吸氢和固氮的某些特性

用花生根瘤菌某些Hup~+和Hup~-菌株作回接,有接种的植株其根瘤数比对照多。所试菌株在共生条件下表现吸氢和乙炔还原活性。离体根瘤 72 h内其吸氧活性表现起初较低,随后逐渐升高,而后又逐渐下降;但乙炔还原活性则随时间的延长逐渐下降。根瘤吸氢依赖于氧并受CO的抑制。10％外源分子氢可提高乙炔还原活性20～60％。不同生长期的吸氢和乙炔还原活性以盛花期为最高。     

花生根瘤菌在自生条件下固氮和吸氢相关性

花生根瘤菌x_(-1)菌株在自生条件下和合适的培养基中,可诱导固氮酶及氢酶的活性,固氮酶反应产生的H_2(内源H_2)能直接诱导氢酶,氢酶活性表达的时间进程是在固氮反应之后,在外源H_2的存在下,固氮酶和氢酶则可同时表达,不同有机碳化合物对固氮酶与氢酶的影响不同,丙酮酸明显提高固氮活性,但对氨酶没有促进作用,蔗糖对固氮活性没有促进作用但对吸氢表现促进作用,分子H_2明显提高固氮活性,2.4-二硝基苯酚抑制需H_2的固氮活性,在外源H_2存在下其抑制作用更明显,铵抑制固氮酶的形成、固氮酶受铵抑制时氢酶也相应受到抑制。     

花生根瘤菌诱变株感染大豆结瘤和固氮

花生根瘤菌诱变株感染大豆结瘤和固氮龙敏南，许良树，张凤章，曾定（生物学系）根瘤菌在共生固氮过程中会放Ｈ２，放Ｈ２是种能量浪费．Ｅｖａｎｓ等［１］研究表明：利用具有吸氢酶活性的根瘤菌［ＨＵｐ＋］接种豆科作物能提高固氮效率、增加作物产量．豆科植物根瘤菌的...     

花生根瘤菌吸氢培养基的改进

花生根瘤菌吸氢培养基的改进许良树，吕荣富，张凤章，曾定，龙敏南（生物学系）１９７８年Ｍａｉｅｒ等￣［１］首次在实验室条件下从大豆根瘤菌诱导氢酶活性、其中一个重要的步骤就是将原来富碳的ＬＮＢ５培养基中的碳源浓度降低。当碳源浓度降低１０倍时其活性最高，并...     

花生固氮根瘤菌应用研究

应用花生固氮根瘤菌,通过拌种方法在花生种子中接种,种植在未种过花生的花岗岩发育的壤土中,进行固氮效果测定。结果表明,施用的花生固氮根瘤菌明显增加了花生的结瘤量,植株生长健壮,群体生长旺盛,增加植株生物量,结荚率提高11%,植株含氮量提高52.9%,籽仁含氮量提高52.5%,产量提高40%,增产效果显著。     

山西省土著大豆根瘤菌共生结瘤固氮特性研究

在山西土壤气候条件下，大豆主栽品种自然结瘤率达９４．６％，单株结瘤量为３７．１±１５．２个，日固氮量０．４４～１，５６ｍｇ，每公顷约固氮３０ｋｇ。单株固氮总活性高峰期随品种和栽培条件的不同有所变化，而单瘤固氮活性的高峰均在花期。土著根瘤茵的固氮强度与结瘤量无相关性，固氮量与单瘤固氮酶活则成显著正相关（ｒ＝０．７１Ｐ＜０．０５）。覆膜栽培和秸秆还田均具有良好的共生固氮生态效应。     

4株高效共生花生根瘤菌的筛选

对22株分离自四川省各地的慢生型花生根瘤进行水培、盆栽、田间小区试验，通过考查结瘤数、鲜瘤重、单株全氮含量、花生产量，筛选出4株有效性高、竞争结瘤能力较土著根瘤菌强的菌株，它能增强豆科植物的共生固氮效果，这在理论上和生产实践上均具有重要的价值．     

花生根瘤菌某些菌株在自生条件下的吸氧活力

用气相色谱法和亚甲蓝去色反应检测29个花生根瘤菌菌株的吸氢性能,只有5个菌株能吸氢·吸氢活力最高为689n mol H_2/mg prot.h.选试的四种培养基中以吸氢培养基对根瘤菌株吸氢活力效果最好,在该培养基中菌株不表现固氮酶活力.在不固氮情况下,外源氢是诱导吸氢活力的必需条件.培养基中的碳源浓度对菌株吸氢活力有明显的影响,高浓度的碳源抑制吸氢.一氧化碳和乙炔对菌株L8 3吸氢的抑制程度比菌株35_1小得多.     

花生根瘤菌基因组文库的构建

以具有高吸Ｈ２活性的花生根瘤菌Ｌ８－３为出发菌株提取总ＤＮＡ，经ＢａｍＨＩ不完全酶切后，获得２０ｋｂ左右的ＤＮＡ片段，按Ｉｓｈ－Ｈｏｒｏｗｉｃｚ和Ｂｕｒｋｅ方法，与具有多克隆位点的ＣｏｓｍｉｄｐＬＡＦＲ３克隆载体连接，经体外包装、转导Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１，在选择培养基平板上获得１万多个重组克隆子．随机挑选２２个克隆子进行分析，其中１９个克隆子携带外源ＤＮＡ片段，平均长度为２１．４ｋｂ，文库有效克隆子数和插入ＤＮＡ片段均达到建库要求．ＰＣＲ筛选和生物素探针杂交初步结果显示，重组质粒中所携带的外源ＤＮＡ可能含有我们所需的吸Ｈ２基因．     

产酸克雷伯氏菌氢酶分离提纯与特性的初步研究

采用硫酸铵沉淀和柱层析 (DEAE-Sepharose F.F., Sephacryl S-200, TSK-DEAE)初步分离纯化了产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HP1可溶性氢酶,研究了温度、pH值、电子载体等对氢酶催化放氢活性的影响.研究表明,可溶性氢酶催化放氢的最适温度为30℃,催化放氢的最适pH值为7.5,甲基紫晶(MV)是氢酶催化放氢的最适人工电子载体,氧对氢酶催化活性有较大的抑制作用.     

台湾毛豆根瘤吸氢及固氮特性的研究

测定了台湾毛豆根瘤在整个发育期吸氢和乙炔还原活性，发现该根瘤属于放氢型；根瘤的吸氢活力与根瘤的发育及固氮活力的高低相关，在根瘤固氮功能的旺盛期，表现较低的吸氢活性．花生根瘤菌变株Ｘ０２－４能与台湾毛豆建立共生关系，并提高根瘤的吸氢能力．