中华芦荟多酚氧化酶的分离纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法从中华芦荟中提取多酚氧化酶.提取的粗酶液经30%~80%硫酸铵分级沉淀,透析除盐,DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱层析,后经PEG 6000浓缩,得到纯化的多酚氧化酶,其纯化倍数为13.28.纯化后的酶液经SDS-PAGE电泳分析,采用考马斯亮蓝R-250染色显示为单一蛋白带,分子量约为54.1 KD.     

家蝇蛹中多酚氧化酶的分离纯化及抑菌活性的研究

采用缓冲液浸提、超滤、亲和层析和高效液相色谱4种方法,从家蝇蛹中分离纯化一种D-半乳糖专一性的多酚氧化酶(PO),并对其抑菌活性进行了研究.在SDS-PGAGE中呈现出两个条带,其中表观分子质量为78 ku的条带为目的蛋白;经过高效液相色谱分析,呈现出了分别和SDS-PAGE结果中相对应的两个峰,其中第一个峰为要纯化的目的蛋白;目的蛋白经过肽指纹图谱检测为PO,精确分子质量为79ku.1mL纯化的PO在1 g/L的质量浓度下对1 mL稀释后的大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌和伤寒沙门菌(106mL-1)的抑制率分别为43.2%、38.7%和50.1%.     

莲藕中多酚氧化酶的性质

以冷冻丙酮制备莲藕多酚氧化酶丙酮粉，用分光光度法研究pH值、温度、底物浓度、抑制剂对酶活性的影响.结果表明，以邻苯二酚为底物，莲藕ppo的最适pH值为7.0，最适温度为35 ℃；Km为22.7 mmol/L，Vm为0.625 OD/min，100 ℃热处理25 s可钝化ppo的活性；抗坏血酸、亚硫酸钠为强烈抑制剂，1.75×10^-4的抗坏血酸和3.00×10^-4 的亚硫酸钠能有效抑制ppo的活性.     

多孔菌（Polyporus）多酚氧化酶的性质研究

研究了多孔菌（PoLyporus）多酚氧化酶的产酶曲线及酶作用最适条件;结果表明在该培养条件下,多孔菌第12天达产酶高峰,峰值酶活为529μ/ml,酶作用的最适PH值为6.0,最酶解温度为30℃,Mg^2 对漆酶有激活作用,而Ag^ 、Cl^-则能明显无抑止漆酶活性。     

多酚氧化酶催化儿茶酚的动力学及机理研究

本研究采用冷丙酮二次提取法从马铃薯中提取出多酚氧化酶,用微量呼吸仪和氧电极测定酶的最适 pH 为7,最适反应温度为25℃。通过对多酚氧化酶活性中心的测定和探讨,认为活性中心起催化作用的是二价铜(Ⅱ),两个铜离子(Ⅱ)之间的距离与儿茶酚两个羟基间的距离一致。双底物动力学结果证明,反应是以氧首先进攻酶的活性中心的强制有序三元复合物的机理。本文还用最小二乘方法回归出了动力学常数,求出了反应的活化能等重要的动力学参数。     

香水梨中多酚氧化酶的活性研究

以磷酸盐作为缓冲液。提取梨中多酚氧化酶的粗酶液。以邻苯二酚为底物。用分光光度法研究了多酚氧化酶作用的最适条件以及一些化学试剂对酶活性的影响．结果表明：香水梨中多酚氧化酶酶促反应的适宜温度为25℃,最适pH值为5．0。半胱氨酸、维生素C为较好的抑制剂,柠檬酸对多酚氧化酶的抑制作用随浓度不同而不同．     

新疆马乳葡萄中多酚氧化酶性质的研究

采用分光光度法,研究了不同pH值、温度和底物浓度对新疆马乳葡萄多酚氧化酶的活力的影响,利用高压液相色谱法对新疆马乳葡萄中的酚类物质进行了定性分析。结果表明,PPO的最适pH值为6.0,最适温度为19℃,在该条件测得Km=14.5 mmol/L,Vm=1.380 D/min。马乳葡萄中酚类物质以绿原酸的含量最多。     

菊芋多酚氧化酶的酶学性质

为了解菊芋提取物氧化变色的机理,用分光光度法分别研究了以邻苯二酚为底物的酶促褐变反应动力学和pH值、温度、底物浓度、酶浓度对该反应的影响,以及不同底物对多酚氧化酶活性的影响,揭示了菊芋多酚氧化酶(PPO)的基本酶学性质.结果表明:菊芋PPO催化邻苯二酚氧化反应的最适pH值为4.8,最适温度为35℃;菊芋PPO的热稳定性差,85℃以上加热处理5min就可使其大部分失活;菊芋PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的规律,相应的动力学参数Km=0.013 mol/L,Vmax=7.5 mmol/s.菊芋PPO的活性随酶浓度的增加而增大,酶的添加量超过0.8mL后,增速逐步减小;菊芋多酚氧化酶对邻位多酚的氧化具有专一性.     

红豆杉细胞多酚氧化酶的性质研究初探

从红豆杉组织培养的细胞中提取多酚氧化酶,以分光光度法研究了多酚氧化酶作用的最适条件、动力学性质及抑制剂对酶活性的影响,结果表明：最适作用温度范围为２５ ℃至３５ ℃;最适ｐ Ｈ 值为６ ．８ ;适宜底物为邻苯二酚, Ｋｍ 值为２ ．５ ｍ ｍｏｌ· Ｌ－ １ ,ｖｍ ａｘ 值为０ ．５（Δ Ｏ Ｄ·ｍｉｎ － １） ;氯化钠、苯甲酸、二乙基二硫代氨基甲酸钠为强抑制剂     

植物中多酚氧化酶的特征

多酚氧化酶(简称PPO)是核基因编码的专一性质体铜金属酶, 由于它的酶促褐变往往导致一些植物经济价值的下降,且与植物对病害、伤害和虫害的防御等生理功能息息相关,因而一直成为人们研究的热点.文中对近年来PPO研究进行了总结、分析和讨论,包括其分子生物学特征,基因表达及活性酶的形成,酶的潜伏性,有关催化机理,在环保和医药上的应用等,提出了一些新概念,建立了相应的理论, 指出了 PPO研究的热点领域,并展望未来的研究领域.     

从麸皮中提取木糖及其成分研究

文中利用具有丰富来源的麸皮为原料，采用酸解条件，经过一系列生化过程，提取出木糖粗品，开辟了麸皮综合利用新途径。     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

疏水层析法分离纯化脂肪酶的研究

采用疏水层析法对商业解脂假丝酵母的中性脂肪酶粗制剂进行了分离、纯化,实验以Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为固定相,异丙醇－哌嗪为流动相,经一次柱层析,从该粗酶中分离出的单一脂肪酶的比活可提高１０倍以上。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量约为２０．８ｋＤ;管状等电聚焦法测其等电点约为４．５０。     

黄色短杆菌中谷氨酸脱氢酶的分离纯化及特性

经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析、苯-琼脂糖CL-4B(Phenyl-SepharoseOL-4B)层析和交联葡聚糖G-200(Sephadex G-200)层析等步骤从谷氨酸产生菌——黄色短杆菌中分离纯化的谷氨酸脱氢酶,酶活提高了230倍。该酶的分子量约为30万,由六个分子量约为5万的亚基组成,最适pH为8.9,并对热较稳定。在pH8.2时,以谷氨酸和NADP+为底物时的米氏常数值分别为0.294mol/L和0.1mmol/L。     

玉米巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质

从玉米种子纯化的两种巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ－Ｉ和ＣＰＩ－Ⅱ）分子量分别为９５００和１３０００,经们都只抑制巯基蛋白酶的水解活性,而对丝氨酸蛋白酶则无抑制作用,属于巯基蛋白酶水解抑制剂,它们在ｐＨ３．０～１１．０或１００℃温度范围内保有１００％的抑制木瓜蛋白的抑制活性,表明在这些外界条件下其分子非常稳定。     

鼠肾纤维蛋白溶酶原激活酶的纯化和部分鉴定

采用肝素—Sepharose亲和层析和凝胶过滤自鼠肾提取纤维蛋白溶酶原激活酶,产率5.1×10~(-5)％。在还原和非还原状态下SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳及电泳酶谱分析均呈单一区带,证实产物仍保持单链状态。测得其分子量为70000。纤维平板试验和无纤维蛋白溶酶原纤维平板试验证实其活性依赖于纤维蛋白溶酶原。     

米曲霉(Aspergillus oryzae)植酸酶的分离纯化及性质研究

从5株霉菌中筛选出1株产胞外植酸酶最高的菌株(Aspcrgillusoryxae;简称霉菌3号)。经发酵,硫酸铵分级沉淀,Sephadex G—100凝胶过滤、SE—Sephadex G—50层析和电泳分离,获得2种植酸同工酶.此两种酶的分子量为40000d,等电点分别为4.5和4.8,最适pH为2.7和5.6,最适温度为50℃,K_m值为50μmol/L。SDS、Fe_~(2+)对酶活力无影响;Mn~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)有激活作用;Cu~(2+)有抑制作用。     

抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母Ｃｕ＾２＋抗株ＹＮＤ２１经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后,收集菌体,破碎细胞,离心后ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析分离可获得三种铜结合蛋白ＤＥ－１,ＤＥ－２,ＤＥ－３。ＤＥ－１脱盐后（Ｇ－１）经鉴定具有金属硫蛋白的特性：表观分子量约为１８ｋＤ;每分子蛋白含２０个巯基,结合１１个铜原子;氨基酸组成中富含半胱氨酸（１８％）、碱性和酸性氨基酸,而酪氨酸和蛋氨酸含     

桑寄生毒蛋白的分离纯化与部分性质研究

中药桑寄生(Loranthas parasiticus Merr)中的毒蛋白(简称LPT)可以用DE—52离子交换层析和Sepbacryl—S—200分子筛过滤进行分离纯化.纯化的IPT进行还原及非还原SDS—PAGE,均呈现单一蛋白带且测得分子量为43,000d,表明LPT为一单链蛋白质.LPT对骨髓瘤细胞具有杀伤作用,其半致死量ID_(?)为1.O×10~(-7)mol/L.LPT对兔网织红细胞破碎中的蛋白质生物合成也具有抑作用,其半数抑制剂量为7.0×10~(-5)mo/L.