纤溶酶高产菌株筛选及其液体发酵条件研究

研究实验室自主分离的2株纤溶酶高产菌株发酵条件,采用4因素、3水平的正交试验设计方法对液体发酵培养基的碳源、氮源、无机盐进行了优化,并对培养基初始pH、发酵时间、发酵温度对产酶量的影响进行了测定.结果表明:菌株1液体发酵合适的产酶培养基配方为大豆粉的质量分数为6%,葡萄糖2%,CaCl2 0.06%,MgSO4 0.07%;菌株2液体发酵合适的产酶培养基配方为大豆粉的质量分数为6%,玉米淀粉2%,CaCl2 0.06%,MgSO4 0.07%.培养基初始pH均为6.5时酶活性最高;发酵温度均以38℃最好;而菌株1和菌株2的适宜发酵时间分别为48～84 h和60～84 h.在优化条件下,菌株1、菌株2液体发酵最高酶活分别为306.46 IU/mL和319.76 IU/mL。     

蛹虫草纤溶酶液体发酵条件的优化

在发现蛹虫草具有纤溶酶活性的基础上,对蛹虫草产纤溶酶的液体发酵条件进行了优化,以期获得最佳的产酶条件。研究结果表明,蛹虫草纤溶酶的最优培养基组成是：以20 g/L可溶性淀粉为碳源,10 g/L酵母粉为氮源,Mg2＋浓度为7 mmol/L;最适发酵初始pH值为6;最适发酵时间为4 d。     

蛹虫草菌丝液体发酵产纤溶酶的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝液体发酵产纤溶酶的实验研究,获得了蛹虫草纤溶酶液体发酵的适宜参数.结果表明,蛹虫草菌丝液体发酵产纤溶酶的适宜碳源为玉米粉和蔗糖,豆饼粉和较高浓度的玉米浆(8%~12%)作为氮源是适宜的,培养基中适量添加Mg SO4(0.05%)、KH2PO4(0.1%)和Ca Cl2(0.05%)、Mn SO4(0.05%)等无机盐有利于蛹虫草纤溶酶产生;发酵p H值以4.5~5.5为宜,温度以22~24℃为宜,培养时间以6~7 d为宜.     

产纤溶酶菌株的分子鉴定及其液体产酶特点分析

通过对实验室分离筛选出的2株产纤溶酶能力较强的细菌菌株进行16S rRNA碱基序列测定,并与已发表的16S rRNA序列进行对比分析,确定2个菌株均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).在此基础上,对2个菌株液体发酵产纤溶酶的特点进行了对比分析.实验结果表明,2个菌株适宜的发酵产酶时间均为60～108 h.在优化的液体发酵条件下,2个菌株单位发酵液中纤溶酶平均产量可分别达到773.07 U/mL(菌株1)和962.28 U/mL(菌株2).     

中药红花与产纤溶酶菌株相互影响的研究

作者采用生长曲线法衡量不同浓度红花对产纤溶酶菌株C2-13的生长影响;纤维蛋白平板法测量纤溶酶活性;邻二氮菲-Fe^2 氧化法测量羟自由基清除率;乙酸酐直接测定法测量总胆固醇;HPLC法分析发酵产物．结果表明：产纤溶酶菌株C2-13能显著提高红花降血清总胆固醇的功效以及抗羟自由基氧化的能力;一定浓度红花的加入对C2-13的生长和纤溶酶活性有明显促进作用．HPLC分析还观察到红花经发酵炮制后,其成分发生了改变．说明中药红花与产纤溶酶菌株C2-13可相辅相成,互相促进．     

华根霉固态发酵产纤溶酶的工艺优化和初步提纯

采用华根霉TK317（Rhizopus chinensis）进行固态放大发酵实验，发酵培养基初始含水量为0．75mL／g，固体发酵罐中湿度控制在70％，发酵前期30h通风量为640L／min，后30h通风量变为560L／min，酶活力最高，达到706．3U／g干基。研究并确定了中空纤维超滤浓缩，硫酸铵盐析的分离提取工艺，经过纯化，酶的比活力达23．32U／mg，比浸提液提高11．05倍，酶活力回收率为70．2％。     

离子诱变选育纤溶酶高产菌及其发酵条件的研究

在诱变育种研究中 ,寻找突变频率高 ,突变频谱广的突变源是一项重要而实效的工作 .离子注入法作为一种新的生物突变技术是近年发展起来的 ,已经引起国内外学者的广泛关注[1,2 ] .离子注入和其他常规诱变有着明显的差异 .离子注入的同时存在能量传递 ,动量传递 ,离子沉积以及电荷积累过程 .而其他的辐射诱变仅仅是利用能量传递 ;化学诱变则从分子基团的交换考虑 .因此离子注入不仅兼有辐射诱变和化学诱变的特点和功能 ,而且可以通过调整离子种类 ,能量及电荷达到有目的进行诱变的效果 .1986年 ,中国科学院等离子体物理研究所余增亮等人发现离…     

产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化

为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.     

微生物源纤溶酶的研究进展

本文阐述了微生物发酵生产纤溶酶的研究背景,并对几种主要的纤溶酶的来源及理化特征和作用机理进行分析和总结,为寻找新型的、相对廉价有效的溶栓药物提供了依据。     

一株来源于酒曲的纤溶酶产生菌的鉴定及其酶学性质

从酒曲中分离到一株纤溶酶产生菌,经形态及ITS序列分析鉴定为菊芋小孢根霉(Rhizopus microsporus var.tuberosus).酶学性质研究表明,该纤溶酶的最适作用温度为37,℃,最适作用pH为7.0.在37,℃保温4,h酶活力仍保存95%,57,℃下保温4,h后仍有一定酶活.该酶具有广泛的酸碱适应性,在pH<3.4时仍残留部分活性;最稳定的pH范围是6～8.Zn2+、Cu2+对酶活有抑制作用,Na+、Ca2+、Mn2+对酶活具有明显的促进作用.该酶在人工肠液中具有较好的稳定性,37℃保温4 h后残余酶活仍然保持在80%以上,有望制成注射剂应用于临床.     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.     

豆豉纤溶酶纤溶活性的定向进化研究

通过易错PCR方法向来源于枯草芽孢杆菌DC-12的豆豉纤溶酶基因中引入突变并构建突变体库.利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA以酶活力为指标对突变体库进行筛选,通过三轮易错PCR最终获得一株酶活力提高的突变株M324.序列分析表明突变体M324酶基因发生了六处碱基突变,其中四处突变发生氨基酸取代,另两处为无义突变.通过SWISS-MODEL Repository模拟突变酶的结构显示,三个突变氨基酸位于回环结构上,一个位于α螺旋上.纤维蛋白平板法测定纤溶酶活,结果显示突变酶的比活力是野生型的2.44倍.     

枯草杆菌SBS6中一种纤溶酶的纯化及部分特性

从枯草杆菌SBS6菌株发酵上清液中分离得到电泳纯的纤溶酶，经SDS—PAGE和凝胶过滤测得其分子质量为31ku，最适pH8．9，最适温度为50oC，酶在60℃下pH5～12范围内相当稳定，Ca^2 ，Mg^2 ，Zn^2 ，Mn^2 等离子对酶的溶解血纤维活性无明显影响，Fe^2 和Fe^3 分别抑制酶活性的17％和20%。