猪树突状细胞的体外扩增

树突状细胞(DC)是一类专职的抗原提呈细胞,在激发机体初始免疫反应和调节T细胞介导的免疫反应中都发挥十分重要的作用,但至今对猪DC的了解较少.本研究从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150ng/mLpGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6 d后诱导出大量DC,通过显微镜观察可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状.猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定坚实的基础.     

DC-CTL体外杀伤人胰腺癌细胞效应研究

研究胰腺癌患者外周血分离培养而来的树突状细胞体外对人胰腺癌细胞BXPC-3、Capan-2的抑制作用.应用各种细胞因子诱导培养从胰腺癌患者外周血分离的单核细胞,获得成熟DC及CIK.胰腺癌组织来源抗原致敏DC,激活T细胞增殖分化为CTL.MTT法检测抗原致敏的DC激活的CTL及单独的CIK对BXPC-3细胞和Capan-2 细胞的杀伤效应.结果显示:胰腺癌抗原致敏的DC,激活肿瘤抗原特异性CTL,体外对BXPC-3和Capan-2胰腺癌细胞产生杀伤作用,分别为75.85%和50.34%;CIK对BXPC-3和Capan-2胰腺癌细胞也有杀伤作用,分别达到62.06%和40.92%,但比抗原致敏的DC激活的CTL的杀伤效应低(P<0.05).胰腺癌患者外周血来源DC在体外能诱导高效的抗胰腺癌细胞免疫反应,提示肿瘤抗原激活的DC作为肿瘤疫苗在胰腺癌的免疫治疗中具有重要价值.     

人外周血DC细胞的冻存

目的:探讨人外周血DC细胞的冻存方法和意义。方法:通过树突状细胞的分离和培养,抗原标本前处理,抗原的装载,实验分组,细胞冻存等,研究树突状细胞冻存情况。结果:冷冻DC细胞保持了它的特性,但会因冻溶过程中生物特性有所减低。结论:我们在应用冻存DC细胞时应考虑增加输入细胞的量。     

两种龟消化道黏膜上皮的扫描电镜观察(英文)

利用扫描电镜对黄喉拟水龟和乌龟的消化道黏膜上皮进行了观察.结果显示,黄喉拟水龟胃黏膜上皮有发达的沟、回结构,在胃的贲门区可见指状突起的黏膜上皮细胞.胃体部的黏膜上皮细胞较大,柱状,表面多数呈五边形或六边形.在一些黏膜上皮细胞中,可见明显的分泌孔.在胃的幽门区,可见突起的微脊.在十二指肠中,可见横行的主皱襞和次皱襞,表面分布着形态不规则的细胞,可见沟、回结构;表面有很多杯状细胞,大多呈圆形.在回肠,可见纵行皱襞,吸收细胞表面不规则,有很多肠腺开口.大肠的黏膜皱襞较浅,可见杯状细胞分布于其中.乌龟胃黏膜上皮表面结构与黄喉拟水龟相似.可见两种不同形状的黏膜上皮细胞,一种为中央凹陷,排列紧密,呈鳞状;另一种为中央稍突起,呈不规则型.胃底部可见很多分泌细胞,在这些细胞中可见乳头状突起,在一些乳头状突起的中央可见分泌孔.小肠上皮细胞结构与黄喉拟水龟相似.大肠黏膜上皮细胞中可见簇状排列的黏液分泌细胞.在两种龟的胃黏膜上皮细胞中均可见胃小凹结构,但未见微绒毛结构,也无杯状细胞.     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

外周血内皮祖细胞在去细胞猪主动脉瓣膜上种植的体外观察

为在体外观察外周血内皮祖细胞种植到去细胞猪主动脉瓣上的生长情况.采用TritonX-100联合胰蛋白酶、核酸酶去除猪主动脉瓣膜细胞.从志愿者外周血中分离培养内皮祖细胞,免疫荧光鉴定细胞后.将从外周血培养的EPC种植到去细胞猪主动脉瓣膜上,用HE、免疫组化染色和免疫荧光染色观察种植效果.结果显示猪主动脉瓣内的细胞去除彻底,但纤维支架保存良好.人外周血培养出的细胞,免疫荧光染色示ac-LDL和UEA-1阳性,提示为内皮祖细胞,种植后行HE染色可见到去细胞猪主动脉瓣膜表面单层内皮细胞生长,并且表达von Willebrand因子和CD31.     

二去水卫矛醇对四种肿瘤细胞的体外抑制作用

采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度二去水卫矛醇(DAG)对人胃癌细胞SGC-7901、人肺癌细胞H460、人鼻咽癌细胞CNE和人肝癌细胞BEL-7404的抑制率研究DAT对4种肿瘤细胞的体外抑制作用.结果表明,DAG对4种癌细胞:CNE、H460、SGC-7901和BEL-7404有较强的抑制作用,作用72h后半数抑制浓度(72h-IC50)分别为4.12μg· ml-1,15.98μg·ml-1,16.00μg· ml-1和16.73μg·ml-1.显微镜下可见经药物作用后细胞圆缩、胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化甚至细胞溶解等损伤现象.DAG在体外对上述4种癌细胞有明显的抑制生长作用.     

铁棍山药多糖对PC12及Hepa1-6细胞在体外增殖的影响

采取闪式提取法从铁棍山药中提取山药多糖,利用胰蛋白酶去除多糖中的杂蛋白,冷冻干燥获得山药多糖制品.分别以10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1 000μg/mL浓度添加于生长良好的PC12及Hepa1-6细胞中,再分别二次培养12h、24h、36h,研究山药多糖在体外对PC12及Hepa1-6两种细胞增殖的影响.结果显示:在培养24h后,当山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL时,对PC12细胞增殖的影响没有差异性(P>0.05),但当浓度进一步提高到500μg/mL、1 000μg/mL时,则对PC12细胞的增殖体现出显著影响(P<0.05);对于Hepa1-6,在培养12h且山药多糖浓度在10μg/mL、500μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05),同时在100μg/mL浓度下,山药多糖对Hepa1-6细胞的增殖抑制更加明显(P<0.01).但当浓度达到1 000μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖呈现促进作用.在培养24h时,各浓度的山药多糖对Hepa1-6细胞增殖的影响均没有差异性(P>0.05).当培养36h后,在山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL下,统计显示对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05).上述结果说明,山药多糖在一定的浓度范围内具有明显的抗肿瘤作用.     

交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的影响

为探讨交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用及可能机制,为交通相关PM2.5的免疫毒性提供实验依据,采用0、50、100、200μg/mL PM2.5对人外周血淋巴细胞进行24 h和48 h染毒,FITC-AnnexinV/PI染色,流式细胞仪检测淋巴细胞早期凋亡和坏死;采用0、20、80、320μg/mL PM2.5浓度分别染毒人外周血淋巴细胞24、48、72 h,Western blot法测定细胞内含半胱氨酸的天冬氨酸特异蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)和cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平,ELISA法检测细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophos-phate,cAMP)含量.结果表明,50、100、200μg/mL PM2.5染毒细胞24 h和48 h后,淋巴细胞早期凋亡和坏死均高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.01),且具有一定的剂量-效应关系;20、80、320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,各剂量组Caspase-3蛋白表达水平均高于对照组,除80μg/mL PM2.5染毒72 h外,差异均具有统计学意义(P<0.01).320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,细胞内cAMP含量均比生理盐水组升高(P<0.05).PM2.5染毒72 h后,CREB表达水平随PM2.5浓度的升高而降低(P<0.01).可见,交通相关PM2.5可诱导人外周血淋巴细胞产生凋亡,且细胞内cAMP和CREB参与了凋亡的调控.     

大鼠不同成熟状态骨髓源树突状细胞的培养与鉴定

分离、纯化大鼠骨髓单个核细胞,在培养体系中添加重组大鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rrGMCSF)和重组大鼠白细胞介素(rrIL-4)刺激获得未成熟树突状细胞(imDC),再分别以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂多糖(LPS)刺激获得半成熟DC(smDC)和成熟DC(mDC).并对imDC、smDC和mDC的形态、表型、细胞因子分泌情况进行鉴定,检测不同DC对异基因淋巴细胞的激活功能.检测结果符合文献对DC的介定,培养所得为imDC、smDC和mDC.可见,体外利用GM-CSF、IL-4、TNF-α和LPS诱导骨髓单核细胞是获得大鼠3种不同成熟DCs的有效方法.     

新型植物来源生物碱——唐松草阿原碱对人体肿瘤细胞株的细胞毒性研究

研究从毛莨科唐松草属植物尖叶唐松草根部提取的新型醚键双生物碱－唐松草阿原碱对几种人体肿瘤细胞株的毒性作用。唐松草阿原碱以质量浓度从2．5μg/mL到100μg/mL作用于6种体外培养的肿瘤细胞株及2种正常细胞株,对其中4个肿瘤细胞株种表现了强烈的杀伤作用。IC50分别为：宫颈癌Hela37 μg/mL,肝癌LCC60μg/ml,胃癌MGC65μg/mL,非小细胞肺癌PLA－80182μg/mL,对2个正常细胞株的毒性分别为：肝细胞L－0265μg/mL,小鼠成纤维细胞NIH3T378μg/mL,而对另一株肝癌HepG2及乳腺癌细胞MCF－7无明显作用（IC50＞100μg/mL）。     

GM-CSF and TNF-alpha cooperate in the generation of dendritic Langerhans cells.

Dendritic cells comprise a system of highly efficient antigen-presenting cells which initiate immune responses such as the sensitization of T cells restricted by major histocompatibility complex molecules, the rejection of organ transplants and the formation of T-cell-dependent antibodies. Dendritic cells are found in many non-lymphoid tissues, such as skin (Langerhans cells) and mucosa, and they migrate after antigen capture through the afferent lymph or the bloodstream to lymphoid organs, where they efficiently present antigen to T cells. Dendritic cells are difficult to isolate and, although they originate from bone marrow their site of maturation and the conditions that direct their growth and differentiation are still poorly characterized. Granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) favours the outgrowth of dendritic cells from mouse peripheral blood. Here we extend this finding to man and demonstrate that cooperation between GM-CSF and tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) is crucial for the generation of human dendritic/Langerhans cells from CD34+ haematopoietic progenitors. The availability of large numbers of these cells should now facilitate the understanding of their role in immunological regulation and disorder.     

有丝分裂原体活化成人外周血自然杀伤细胞CD69表达的研究

目的 :利用自然杀伤细胞 (NK)的早期活化标记CD69的表达探讨NK细胞体外活化的规律 ,促进这类细胞的临床应用 方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人外周血单个核细胞 (PBMC) ,分别在两种不同的有丝分裂原 ,植物血凝素 (PHA ,2 0 μg/mL)和佛波醇酯 (PDB ,10 - 7mol/L)存在的条件下进行培养 ,于 0、2、12、2 4h收获细胞后进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对NK细胞的CD69分子表达情况进行分析 结果 :NK细胞在PHA、PDB刺激 2h后CD69的表达明显上升 ,而且随时间的延长CD69的表达率逐渐增加 ,2 4h分别达到 ( 84 .96± 9.2 4 ) %、( 91 85± 2 .94 ) % ;PDB刺激组CD69的表达率在不同的时间点均比PHA组高 结论 :体外条件下 ,PHA、PDB均能快速上调NK细胞CD69表达 ,而且PDB( 10 - 7mol/L)作用明显强于PHA( 2 0 μg/mL)     

工频磁场对离体细胞胞浆钙离子浓度的影响

研究了50 Hz工频均匀强磁场(0.097 T)对人低分化胃腺癌细胞株-SNU细胞和人淋巴细胞胞浆钙离子浓度的影响.将体外培养的SNU细胞和人淋巴细胞,施加50 Hz工频均匀强磁场(0.097 T),处理不同时间后,应用共聚焦显微镜检测胞浆内钙离子浓度.实验表明,给予工频均匀强磁场处理后,SNU细胞和人淋巴细胞胞浆内钙离子浓度均升高.     

几种胁迫因素对中国红豆杉细胞培养的影响

中国红豆杉细胞培养过程中 ,在第 10d添加 0 .6mg/mL的真菌F5提取物可使紫杉醇的合成量达 30 0μg/ g干重细胞 ;在培养第 2 0d添加 2 0mg/LAg+ ,紫杉醇的合成量达 83μg/ g干重细胞 ;在培养第 2 0d添加 4mg/LCu2 + ,紫杉醇的合成量达 35 μg/ g干重细胞     

抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物抗氧化剂维生素C对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度地有所增长,其中50μg/m L浓度组在卵泡培养相同时间下,卵泡和卵母细胞的增长值相对于其他浓度组略大些,但各浓度组之间无论是卵泡直径增长值还是卵母细胞直径增长值都不存在显著性差异(P0.05).培养到第6天时,50和100μg/m L浓度组卵泡存活率最高,为59.5%,且50μg/m L浓度组第一极体排出率最高,为2.38%,但发生生发泡破裂率次于150μg/m L浓度组.可得结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,添加50μg/m L维生素C有利于腔前卵泡卵母细胞的生长,而添加150μg/m L维生素C有利于生发泡破裂.     

抗人PD-L1单克隆抗体的瞬转表达

利用HEK293 6E细胞瞬转表达抗人PD L1单克隆抗体. 将HEK293 6E细胞无血清悬浮培养, 筛选最佳生长培养基; 考察HEK293 6E细胞的筛选表达培养基、 DNA和PEI质量比及转染时细胞密度等转染条件, 并对收获的抗体进行SDS PAGE和ELISA鉴定. 结果表明: 在A无血清表达培养基中, 以2×106个/mL的细胞密度和m(DNA)∶m(PEI)=1的条件转染, 第4天收获抗体的产量最高, 为170.9 μg/mL; 收获PD-L1抗体的重链分子量约为50 000, 轻链分子量约为25 000.     

Ni元素对铜绿微囊藻的生长、光谱特性及藻胆蛋白含量的影响

 为了探讨微量元素对蓝藻水华生消的影响及其机理,研究了不同浓度Ni对铜绿微囊藻生长、光谱特征及藻胆蛋白含量的影响,结果表明:Ni元素对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa 905)的生长、光谱特性及藻胆蛋白含量均有影响.①Ni元素在低质量浓度(<0.10μg/mL)下促进藻细胞生长,高质量浓度(0.30～1.00μg/mL)下抑制其生长;②Ni元素处理使藻细胞吸收光谱峰位红移、吸光值降低,表明Ni元素使叶绿素和藻胆蛋白变性,抑制了藻细胞的吸光能力;③Ni元素在较低质量浓度(<0.30μg/mL)下使藻胆蛋白的吸收峰值升高,在较高质量浓度(0.40～1.00μg/mL)下则使其降低;④Ni元素在低质量浓度(<0.30μg/mL)下会使藻蓝蛋白(PC)含量增加,高质量浓度(0.40～1.00μg/mL)下则使其减少;不论在高质量浓度还是低质量浓度下,均使别藻蓝蛋白(APC)含量减少.