山茱萸药材中总DNA的提取方法

<正>随着分子生物学技术的发展,如限制性酶切片段长度多态性(RFLP),随机扩增多态性DNA(PAPD),扩增片段长度多态性(AFLP)等;分子标记技术已经用于植物种质资源和系统发育的研究。目前,报道的大多从是植物叶片中提取DNA且方法众多,技术较为成熟,但这     

南五味子叶绿体DNA的提取

<正>随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是在DNA水平上进行遗传标记的常用分析方法之一。在操作过程中,DNA的提取质量是影响实验结果最为关键     

南五味子叶绿体DNA的提取

随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是在DNA水平上进行遗传标记的常用分析方法之一.在操作过程中,DNA的提取质量是影响实验结果最为关键的因素.本文,笔者在对五味子进行分子生物学研究时发现南五味子叶中多酚、多糖、蛋白质等复杂的次生、初生代谢物质,给叶绿体DNA提取造成很大的影响.     

福建省6种早熟良种柚的RAPD分子标记研究

采用改良的CTAB法成功提取龙柚等6种福建省旱熟良种柚叶片的DNA,并对其进行RAPD分析．从初选的100个随机引物中筛选出12个扩增效果较好的引物,对提取的DNA进行PCR扩增,获得清晰可重复的位点107个,平均每条引物产生的位点为8．9个,其中多态性位点93个,占86．9％;在部分样品中检出了特异性RAPD标记24个,占23．4％：样品间遗传相似系数比较和UPGYA聚类分析表明坪山柚和文旦柚的亲缘关系最近,度尾蛮柚和四季柚分别与其它5个柚类的亲缘关系较远．     

玉米丝黑穗病苗的快速鉴定

通过提取玉米根和叶片组织的DNA,再选用玉米丝黑穗病菌的特异性引物(GSP)进行PCR扩增检测,结果发现,GSP引物在玉米根组织中丝黑穗病的检测率在80%,叶片中玉米丝孢堆黑粉菌的检测率为15%.表明,可以利用GSP引物通过检测玉米根部组织,快速发现玉米丝黑穗病病苗.     

水稻叶绿体DNA提取和纯化方法优化

改进了水稻叶绿体DNA的提取和纯化方法,获得的高纯度的水稻叶绿体DNA适于PCR扩增等分子操作.本方法要点为:匀浆液2 300 r.min-1离心去核,上清液4 300 r.min-1离心,沉淀用于DNA提取,提取后的叶绿体DNA用RNase和蛋白酶K纯化.     

基于边缘和纹理结构实现叶片识别的应用研究

植物野外实习教学系统的主要功能是通过计算机图像处理技术对叶片边缘与纹理结构进行分析,自动提取叶片信息,确定叶片相关的理论知识.从图像预处理、叶片区域定位分割和叶片识别三方面实现植物野外实习教学系统的叶片识别模块,采用边缘和纹理结构实现叶片的定位分割与识别.实验结果表明,该方法能有效地识别出叶片并归类.     

第三代测序细菌基因组DNA提取方法的比较

为筛选有效提取细菌菌株总DNA的方法,分别采用SDS法、CTAB-SDS法、试剂盒法和改良试剂盒法对苏云金芽胞杆菌、粘细菌和放线菌进行总DNA的提取、电泳检测、NanoDrop 2000测定、PCR扩增.对放线菌和苏云金芽胞杆菌,用改良试剂盒法所提取的总DNA纯度较高,电泳条带清晰,DNA主带位于23 kb,单位体积菌液所提取到的总DNA较SDS法和CTAB-SDS法高,能满足下游的PCR扩增等分子操作.对待测样品所做的质检报告也证实样品合格,可用于后续建库、测序.而粘细菌提取到的总DNA由于它们的OD260/230在2.0以下,没有达到第三代测序样品的要求.改良试剂盒法所提取到的总DNA大多数可以满足第三代测序技术样品制备的要求.     

龙柚芽变系的RAPD分析鉴定

利用100个10bp的随机引物对龙柚的4个芽变系的基因组DNA进行RAPD扩增分析,探讨芽变系遗传物质的变化．在这100个随机引物中,筛选出能在4个芽变系中扩增出稳定多态性片段的引物11个,一共扩增出了63条片段,其中多态性片段有19个,占30．16％．聚类分析的结果,芽变系2和4的遗传距离最小（0．1001）,相似系数最大（0．9048）．表明了芽变引起的遗传物质的改变能够通过无性繁殖的方式存在,用RAPD的方法来分析不同芽变系的遗传关系是可行的．     

Fe_3O_4纳米磁珠快速提取植物DNA的实验研究

磁珠易与生物分子偶联,操作方便,能高效获取靶物质。研究建立一种植物DNA的快速提取方法,用吸附性能优异的Fe_3O_4纳米磁珠作为固相载体提取三角梅DNA,时间为40min,与常规方法相比时间缩短。所提DNA紫外吸光度比值A260nm/A280nm=1.792、A260nm/A230nm=2.219,提取DNA电泳条带大小为1 600bp左右。所提取DNA杂质少,纯度高,可用于后续基因扩增、杂交检测等。研究将为构建基于纳米磁珠微流控芯片的遗传信息高效获取系统打下坚实基础。     

SDS、CTAB和PVP法提取香蕉基因组 DNA的比较研究

文章报道了采用SDS法、CTAB法和PVP法提取的香蕉基因组DNA片段大小比较一致,都可直接用于RAPD分析,SDs法提取的DNA纯度较高,吸芽基因组DNA提取率略高于嫩叶,对相同done不同单株间基因组DNA的RAPD分析结果并不表现出明显的多态性.     

中国常染色体显性遗传骨胳石化症(II型)家系突变基因筛查研究初报

为寻找骨胳石化症II的致病基因,从一患该病的家系成员收集血液,制备基因组DNA.应用PCR(聚合链式反应)技术和直接测序分析ClCN7的24个外显子,寻找基因变异.结果表明,除一些内含子中存在个别多态性外,所有成员均未检测到ClCN7基因突变,提示该基因不是本病常见的致病基因,在这个家系中ADOII可能归因于其他基因的突变.     

花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

提取“异9-3”柱头外露棉总基因组DNA，通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707．1的胚囊内，D1代田间筛选到柱头外露的转化植株，遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制，50个随机引物进行PCR扩增，33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性，其中引物S462(TCG GCA CGC A)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物，该引物有可能作为柱头外露系的分子标记．RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点，而与供体相同基因位点较少，转化体还有供体和受体都不具有的基因位点，这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致。     

原生质体膜的发育特征

通过对黑麦(Secale Cerenle.L.)、向日葵(Helianthus Annuus.L)幼苗叶片的分段取材,利用扫描电镜技术研究了植物叶肉原生质体质膜的发育特征。我们发现(从叶片基部开始到叶尖)双子叶、单子叶植物原生质体的质膜发育具有相似的规律性。原生质体幼龄时,质膜表面出现了各种突起组成的球状“微区”,随着细胞的成熟,质膜表面逐渐变得多皱,进而光滑,其方式在单、双子叶植物略有不同。本文详细地描述了质膜的形态发育特征,同时讨论了这些特征与叶肉原生质体其它特征的关系。     

中国常染色体显性遗传骨胳石化症(Ⅱ型)家系突变基因筛查研究初报

为寻找骨胳石化症Ⅱ的致病基因,从一患该病的家系成员收集血液,制备基因组DNA.应用PCR（聚合链式反应）技术和直接测序分析ClCN7的24个外显子,寻找基因变异.结果表明,除一些内含子中存在个别多态性外,所有成员均未检测到ClCN7基因突变,提示该基因不是本病常见的致病基因,在这个家系中ADOⅡ可能归因于其他基因的突变.     

羊草(Leymus chinensis)psbD基因开放读码框(ORF)的克隆及序列分析

从羊草中提取总RNA,采用简并PCR方法,扩增出编码353个氨基酸的psbD基因开放读码框(Open read ing frame,ORF)cDNA序列,GenBank登陆号为FJ176573,并对其序列进行了分析.同时次基因组DNA为模板对psbD基因开放读码框区域进行了扩增,证明该基因无内含子,为其功能的进一步研究提供基因材料和理论依据.     

一种适合抗癌药紫杉醇产生菌AFLP分析的DNA提取方法

比较研究了2种常规的DNA提取方法及一种新改进的抗癌药紫杉醇产生菌DNA提取方法.结果表明,CTAB提取法DNA产量低,多糖和蛋白质含量高;高盐低pH法(SD S法)提取DNA的产量较高,蛋白质和多糖含量高,需要进一步去除;新改进的DNA提取方法,DNA产量极高,而且蛋白质含量和多糖含量也低,适合AFLP分子标记技术对该菌的分子生物学研究.     

福建6种柚RAPD鉴定分析

以福建省栽培面积较广,果实成熟期不同的渡尾文旦柚、琯溪蜜柚、坪山柚、长泰文旦柚、龙柚、下河蜜柚6种柚为研究对象,用100个10bp的随机引物对6种柚的基因组DNA进行RAPD分析,筛选出能扩增出稳定多态性片段的引物31个,一共扩增出174条片段,其中多态性片段有137个,占78.74%.聚类分析的结果,RAPD标记所反映的6个品种之间的遗传相互关系与传统的分类结果是一致的.     

点带石斑鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记技术对海南点带石斑鱼养殖群体和野生群体的遗传结构进行了初步研究.从100个随机引物筛选出20个,在养殖群体和野生群体各20尾中分别扩增出183和176条DNA片段,其中多态性片段的比例分别为67.57%和75%,平均杂合度分别为0.498 0和0.531 1,遗传相似率分别为0.816 5和0.794 6,群体间遗传距离为0.329 6.Shannon遗传多样性指数表明,两群体中的遗传变异有40.95%来自群体内,而59.05%来自群体间.野生群体的多态位点比例和杂合度明显高于养殖群体.点带石斑鱼与野生群体相比,养殖群体的杂合度和遗传多样性有所下降,提示在点带石斑鱼的人工繁育过程中应引进标记辅助选择等技术手段.     

美洲南瓜SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

应用单因素实验和L16(44)正交设计对影响美洲南瓜SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合美洲南瓜SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明,不同水平的各因素对PCR反应结果均有影响,优化后美洲南瓜SSR-PCR反应体系(20μL)为:1.00μmol.L-1引物、0.150 mmol.L-1dNTP、0.9 U Taq酶、50 ng DNA模板。运用优化后的反应体系对美洲南瓜进行多态性引物的筛选,从300对引物中筛选出68对扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物。