猪骨形态发生蛋白15基因的分子克隆及分析

骨形态发生蛋白15(Bone Morphogenetic Portein-15,BMP15)由卵母细胞特异表达,在卵母细胞发育与成熟过程中起重要调控作用.本文以长白猪为研究模型,克隆BMP15基因cDNA全长并探究该基因组织表达图谱.研究显示,家猪BMP15基因cDNA全长1298bp,编码具402个氨基酸的前体蛋白.依赖RT-PCR技术,家猪Bmp15基因被发现特征性表达于家猪卵巢中.在本研究中,还分离到家猪BMP15基因潜在启动子区(3279bp),针对该启动子区,部分转录因子结合位点获得预测.这些研究结果为探究BMP15基因的表达调控机制及其对家猪卵泡发育影响奠定基础.     

骨形态发生蛋白研究进展

本文对骨形态发生蛋白的分子生物学研究状况、骨形态发生蛋白的载体及其促进骨形成机理和临床应用等方面进行了阐述,并提出了骨形态发生蛋白在临床应用中存在的问题及应用前景.     

重组人骨形态发生蛋白诱导异位成骨的病理学观察

目的：本文报告了重组人骨形态发生蛋白－２在小鼠肌肉内诱导异位成骨的生物学作用。结果：植入重组人骨形态发生蛋白－２后１天有间充质细胞向植入区内聚集;５天出现典型的软骨细胞;７天钙化开始;１０天形成雏形的骨髓腔;１４天骨髓腔内出现幼稚的造血细胞;２１￣３０天形成大量网状骨小梁、骨单位,在骨小梁间隙出现骨髓细胞。结论：大肠杆菌表达的重组人骨形态发生蛋白－２具有较强的诱导成骨活性。     

人骨形态发生蛋白4多拷贝表达盒的构建及其表达

为了了解在毕赤酵母中人骨形态发生蛋白4基因剂量对其表达量的影响,利用毕赤酵母表达载体pAO815质粒上的2个同尾酶BglⅡ和BamH Ⅰ在体外构建了人骨形态发生蛋白4成熟肤序列1,3,6,9个拷贝表达盒,并对它们进行表达量研究.结果表明,在毕赤酵母中表达人骨形态发生蛋白4蛋白时,1个拷贝基因能达到最大表达量,增加人骨形...     

骨形态发生蛋白7在兔卵巢中的表达分析

为探讨BMP7蛋白在卵泡发育、黄体化和排卵过程中的作用,本研究采用免疫组织化学方法检测了BMP7在兔卵巢中的表达定位情况.结果显示, BMP7蛋白在兔卵巢原始卵泡和初级卵泡中未检测到表达;在次级卵泡卵母细胞及有腔卵泡的各种细胞中都有表达,但只在部分内膜细胞中表达;在间质细胞、黄体及表面上皮中也有表达.由此表明,BMP7没有参与兔原始卵泡的激活,而在初级/次级卵泡转化以及其后的卵泡成熟过程中发挥了作用;BMP7不仅是卵泡内膜细胞分泌因子,而且也是卵母细胞和颗粒细胞分泌因子.对BMP7的表达来说卵泡内膜细胞存在功能性差异.BMP7可能参与了兔黄体、排卵等活动的调节.     

重组人骨形态发生蛋白4在毕赤酵母中的表达研究

试图建立人骨形态发生蛋白-4在毕赤酵母(Pichia pastoris) 中的表达技术.包括:将hBMP4成熟片段从全长cDNA亚克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表达rhBMP4的载体质粒pPIC9K-hBmp4.经转化Pichia pastoris宿主菌株GS115,PCR鉴定基因整合后,摇瓶培养,用甲醇诱导表达.表达上清液经SDS-PAGE和Western-blot 分析,结果表明rhBMP4以单体形式分泌到发酵上清液中,单体分子质量大小约为26 ku,摇瓶表达量达到20.13 μg/mL.     

BMP2，BMP4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达

研究目的：研究骨形态发生蛋白（BMP）2,4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达模式。创新要点：运用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）系统地研究了Bmp2和Bmp4及其BMP信号通路相关成员在小鼠子宫中mRNA水平表达模式,同时运用免疫组化方法研究了BMP2蛋白在小鼠子宫中的定位模式。研究方法：重要结论：收集发情周期各个时期小鼠子宫,一侧子宫角贮存于液氮或-80℃冰箱用于实时荧光定量PCR,另一侧子宫角用40mg／ml多聚甲醛固定用于BMP2蛋白免疫组化定位。实时荧光定量PCR结果表明,Bmp2的表达水平在发情前期显著高于发情期和发情后期（P〈0．05）,Bmp4的表达水平呈现显著波动,但Bmp2与Bmp4差异不显著（P〉0．05）。Bmprla和Bmpr2的表达水平在整个发情周期无显著变化（P〉0．05）。然而,Bmprlb的mRNA水平在发情期显著下降（P〈0．05）,在发情后期上升。此外,Bmprlb的mRNA水平显著低于相应时期Bmprla和Bmpr2的mRNA水平（P〈0．05）。三种R—Smads差异地表达于小鼠子宫,并且Smad1和Smad5的表达水平显著高于Smad8（P〈0．05）。此外,Smad4的表达水平在整个发情周期无显著变化。免疫组化结果显示,BMP2蛋白在整个发情周期差异表达,并主要定位于子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞。我们的结果提供了BMP2和BMP4及其BMP信号通路相关成员mRNA水平表达变化信息,这些数据为论证BMP在子宫内膜中的作用如子宫内膜的退化与重塑提供量化和有用的信息。     

缓释骨形态发生蛋白-2促进骨修复的生物相容性载体研究进展

骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)属于转化因子,是一种多功能生长因子,在细胞增殖、分化迁移和重建方面具有重要作用。在临床骨缺损修复中,BMP-2是参与体内骨修复至关重要的促进因子。一方面,由于BMP-2在体内的稳定性不强;另一方面,如果无载体保护,其在移植处的释放扩散形式呈爆炸式。而骨生长分化是一个动态的过程,因此需要建立一个可控的缓释载体。介绍了目前已应用的4种BMP-2控制释放载体,包括水凝胶和微囊、层层自组装(layer-by-layer self-assembly,LbL)、表面微处理的钛金属以及静电纺丝纤维。     

骨形态发生蛋白诱导成骨机理的研究及应用现状

目的：综述骨形态发生蛋白（Bone morphgenetic protein,BMP）研究现状。方法：对近年国内外有关BMP的研究及应用献进行综合分析。结果：较为系统地阐明了BMP的研究进展及其临床应用现状。结论：BMP是一较好的骨诱导因子，具有广泛的应用前景，但其纯化及免疫原性方面还须进一步研究。     

梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达

克隆得到梅花鹿过氧化氢酶基因序列,已提交Genbank登录(HQ877674).基因编码区全长1 584 bp,编码527个氨基酸,理论计算分子量为60 027.4 Da,理论计算等电点为6.67,预测蛋白质结构中不含有二硫键,在蛋白质序列中,具有过氧化氢酶家族活性中心保守序列和过氧化氢酶家族亚铁血红素保守序列,其DNA序列和蛋白质序列均与Bos taurus来源过氧化氢酶的同源关系最为接近.使用pPICZαC质粒和毕赤酵母GS115菌株,成功异源表达该基因,对诱导表达的发酵上清液进行活性测定,酶活为463 U·mL-1.     

梅花鹿FGF10基因的生物信息学分析

应用生物信息学的方法对梅花鹿FGF10基因的核苷酸和氨基酸序列进行了初步的生物信息学分析,包括理化性质分析、信号肽和跨膜结构域分析、磷酸化位点和疏水性分析、蛋白质二级结构分析、功能结构域分析以及系统进化分析.结果表明:梅花鹿FGF10基因编码213个氨基酸,蛋白相对分子量为23.84kD,为碱性不稳定蛋白;存在信号肽和跨膜结构域;共有26个磷酸化位点;二级结构主要由α螺旋、β转角、延伸链和随机卷曲组成.具有FGF典型的FGF结构域.系统进化分析显示,梅花鹿FGF10与哺乳动物FGF10相似性较高,并且与牛、羊在亲缘关系上最相近.为梅花鹿FGF10基因的结构和功能的进一步研究打下了坚实的理论基础.     

鹿茸的组织结构及离体细胞的显微结构观察

本文对鹿茸的组织结构、鹿茸皮肤及顶端肉质部分的显微结构进行了较详尽的观察,同时对从鹿茸分离的细胞及由鹿茸组培养出的细胞形态结构也作了初步研究。     

鹿茸组织和细胞原代培养和继代培养研究

本文对鹿茸皮肤及肉质部分组织块的培养及继代培养方法、从鹿茸各组织中分离细胞的方法及分离细胞的原代培养和继代培养进行了研究。由鹿茸皮肤细胞建立的细胞系已在体外培养了近四个月,传至第三十代,由鹿茸的肉质部分建立的细胞系已在体外传了二十几代。传代工作仍在继续。     

中国梅花鹿地理分布的变迁

在综合化石记录、历史文献和野外资料的基础上对我国梅花鹿地理分布的变迁进行了探讨.早更新世,梅花鹿分布于华北区和台湾;中更新世至全新世,向北扩展到蒙新区的东部、东北区以及朝鲜、苏联西伯利亚东南部,向南经华中区的东部分布到广西和越南北部,另有一支经东部滨海平原迁移到了日本.川西高原的四川亚种是由华北区向西南延伸的一支演化而来.梅花鹿是适应性很强的林缘动物,其分布区急剧地缩减与晚更新世至全新世青藏高原的强烈抬升有关,更主要地是受冰期后人为活动的影响.     

家蚕质多角体病毒基因部分序列克隆及分析

根据BmCPV(Bombyx mori cytoplasmic polyedrosis virus)核酸片段4的末端序列设计一对引物,通过RT－PCR扩增获得多条DNA片段,对其中占优势的约740bp的片段进行切胶回收,克隆到pGEM-Teasy载体上并进行序列测定。与GenBank中的database比较分析表明,该序列与已登录的序列同源性很低,并与呼肠弧病毒科其它种的对应核酸序列有较大差异。本实验证明所测序列为一新序列。     

鹿茸整体液氮保存及复苏试验

本文对鹿茸的整体液氮保存及复苏进行了初步研究。结果表明:采用液氮冷冻和复苏方法,可使在液氮中保存一年半的鹿茸组织结构不受任何破坏,细胞仍可在体外培养增殖、传代[到目前(1990.1)已传至第十五代,现仍在继续传代]。     

黄粉虫抗冻蛋白基因TmAFP84的克隆和序列分析

对黄粉虫抗冻蛋白(AFPs)基因进行RT-PCR扩增后,构建克隆重组质粒pUCm-T-TmAFP84,经双酶切、PCR和测序鉴定,克隆出了与GenBank中公布的编码84个氨基酸基因(注册号AF159114)基本相一致的抗冻蛋白基因TmAFP84,其同源性高达98.81%.与其他编码84个氨基酸的抗冻蛋白基因的同源性为95.92%.进而构建了表达重组质粒pMAL-p2X-TmAFP84.     

生物活性梯度涂层的结构与动物实验

采用先进的表面技术复合制备生物活性梯度涂层材料。通过与rhBMP-2生物组装获得具有骨诱导功能的复合人工骨材料,这种材料在植入动物体内3周后即可形成大量的新生骨细胞和骨组织,新生骨组织沿着涂层的微孔长入,与涂层结合紧密。16周后新生骨组织矿化均匀,形成比较成熟的、排列有序的层板编织骨。作为对比研究的金属钛合金植入体与骨组织结合的界面中只是形成大片的纤维组织,而未见新生骨组织。     

对硝基酚磷酸酶pNPPase的基因克隆和序列分析

对硝基酚磷酸酶（p-nitrophenylphosphatase pNPPase)是一种对硝基酚磷酸盐（p-intophenylphosphate)为底物的酶,被广泛地应用于核酸标记,通过菌落原位显色法成功地从脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus)中克隆到了编码耐热pNPPase的基因,序列分析表明它是一个编码255个氨基酸的酶。     

基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化

含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98％。