昆明山海棠诱导Jurkat等3个细胞株发生细胞凋亡

为研究昆明山海棠（ＴＨＨ）的药理和毒理作用，通过流式细胞仪检测发现ＴＨＨ对ＪｕｒｋａｔＣＨＥ和ＮＩＨ３Ｔ３细胞均有较强的凋亡作用，但Ｊｕｒｋａｔ淋巴瘤细胞更为敏感，每皿５０μＬＴＨＨ作用４８ｈ后，可使９３％的肿瘤细胞凋亡，使用Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－Ｆｌｕｏｓ检测Ｊｕｒｋａｔ细胞，结果发现ＴＨＨ作用０．５ｈ后即可出现早期细胞凋亡（细胞膜损害）４～６ｈ后１５０～２００μＬＴＨＨ组膜损伤率可同达８５％，证     

转导GST-pi基因表达抑制甲基丙烯酸环氧丙酯的致癌作用

环境中的化学致癌物是引发癌症的主要原因，谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）ｐｉ在防止各种内、外源的对细胞的损害方面起关键性作用，ＧＳＴ－ｐｉ基因与反转录病毒载体（ｐＸＴ１）重组后转染３Ｔ３细胞，使该基因在３Ｔ３细胞中整合和表达，研究发现：ＧＳＴ－ｐｉ的表达可以防止化学致癌物甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导的细胞恶性转化，此结果为进一步探讨ＧＳＴ－ｐｉ在癌症预防领域的作用提供了科学依据。     

孤儿受体TR3 mRNA在大鼠卵泡中的表达和定位

采用原位杂交方法，研究了孤儿受体ＴＲ３ｍＲＮＡ在大鼠卵泡早期发育过程中的定位，结果ＴＲ３ｍＲＮＡ首先在出生后２ｄ（Ｄ２）的卵巢间质细胞中表达；随后在出生后４ｄＤ４）的初级卵泡颗粒细胞（ＧＣ）中表达，ＴＲ３ｍＲＮＡ在ＧＣ的表达随卵泡的发育而增另，在Ｄ６其高量表达逐渐转至ＧＣ外层和膜细胞（ＴＣ）内层，这种表达方式一直维持到小窦状卵泡期（Ｄ１０￣１６），在Ｄ３０９某些小窦状卵泡的ＧＣ内层又有较高量的表达     

35ku的PF18-3分子在小鼠胸腺细胞凋亡亚群上的特异表达

ＰＦ１８－３抗体是一株大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体。在以往的共培养研究中发现该抗体可抑制小鼠胸腺树突状细胞系（ＭＴＳＣ４）诱导的胸腺细胞凋亡作用。目的是观察ＰＦ１８－３抗体识别分子（ＰＦ１８－３分子）的特点及其在ＭＴＳＣ４诱导的胸腺细胞凋亡中的作用。利用流式细胞仪对ＰＦ１８－３分子的表达进行了特性分析，发现ＰＦ１８－３分子除表达于ＭＴＳＣ４表面外，还表达于ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞上，但新鲜胸腺细     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

膜基质金属蛋白酶和金属蛋白酶抑制因子-1 在早期胎盘中的表达及其功能的研究

用原位杂交方法研究了人早期胎盘中膜型金属蛋白酶（ＭＴ－ＭＭＰ－１）和金属蛋白酶抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）的分布。结果表明：（１）在绒毛滋养层细胞和与其邻近的蜕膜细胞中ＭＴ－ＭＭＰ－１和ＴＩＭＰ－１的表达量相对较高；（２）在基底盘，Ｒｏｈｒｓ和Ｎｉｔａｂｕｃｈ纹间的外绒毛膜滋养细胞，滋养层和蜕膜的腺体细胞表达最高；（３）胎膜分离层和绒毛干的少量细胞滋养层细胞以及蜕膜和绒毛干的血管壁上有明显的ＭＴ－     

CD3ε胞浆区2个酪氨酸共同介导T淋巴细胞凋亡

ＣＤ３ε是Ｔ细胞抗原受体复合物（ＴＣＲ／ＣＤ３）的一个成员,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序（ＩＴＡＭ）有关,已有报道人ＣＤ８分子的膜外区－跨膜区的ＣＤ３ε分子的胞内区组成的融合分子（ＣＤ８－ε）能介导Ｔ淋巴细胞激活后凋亡,表明单独的ＣＤ３ ＩＴＡＭ可传递细胞凋亡信号。进一步以ＣＤ８－ε为模板和点突变ＰＣＲ技术制备了     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡，表现为：染化体凝集，凋亡小体形成，ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳，此过程伴随特异核酸酶的激活，其活性依赖于Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋，可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段，ＤＥＶＤ，ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

ATM介导的蛋白磷酸化在辐射损伤信号传递过程中的作用

为了阐明ＡＴＭ在介导辐射损伤信号传导中的作用，对ＡＴＭ，ｃ－Ａｂｌ免疫淀物激酶活性，辐射及损伤ＤＮＡ对其活性的影响进行了分析。结果表明辐射呆引起细胞中多种蛋白磷酸化发生改变，ｐ５３上游基因ＡＴＭ突变的ＡＴ细胞与ＡＴＭ基因正常的同源细胞ＨＥＬ相比，ＡＴ细胞受照后多种蛋白的磷酸化明显减弱。ＡＴＭ与ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性催化ｐ５３在内的多种蛋白磷酸化。ＡＴＭ，ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性可为辐射及损伤     

生物体衰老的部分生化机理

本文从一些研究事实出发，阐明了影响生物体衰老的部分生化基础。即：（１）生物体衰老时体内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性下降，过氧化物酶活性升高，这三种酶能有效清除体内自由基，具有抗衰老作用；（２）生物体衰老时体内生成过量的活性氧自由基，它对细胞的膜脂过氧化作用及其对生物大分子的破坏作用加速了衰老的进程；（３）生物体衰老时其遗传物质ＤＮＡ的损伤修复能力下降，ＤＮＡ、ＲＮＡ的含量降低，使得体内蛋白质等生长物质的合成代谢减弱、分解代谢加强，同化与异化代谢失衡     

PI3K/Akt信号传递途径与CD3ε介导T淋巴细胞激活和凋亡的调控

利用Ｖｅｓｔｅｒｎ印迹免疫沉淀及激酶活性测定方法，研究表达ＣＤ８ａ胞外区－跑膜区和ＣＤ３ε胞浆区的融合分子（ＣＤ８ε）的Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞激活与凋亡过程中磷酸肌醇３－激酶（Ｐ１３Ｋ）和蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ或Ａｋｔ）表达及酶活性的变化．结果表明，在抗ＣＤ８单抗诱导的ＣＤ８ε＾＋Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞（ＴＪＫ）激活与凋亡过程中，Ｐ１３Ｋ及Ａｋｔ的表达均明显增加，Ａｋｔ的激酶活性也增加．而将ＣＤ８     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用，为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

牛朊病毒正常成熟蛋白的高效表达和二级结构分析

利用ＤＮＡ重组技术，将牛朊病毒正常成熟蛋白基因插入表达载体ｐＥＴ３０ａ，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＥＤ３）中高效表达。将表达产物（包涵体）用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解，用阳离子交换柱纯化，纯化产物复性后，进行质谱、圆二色谱（ＣＤ）以及Ｆｏｕｒｉｅｒ变换红外光谱（ＦＴＩＲ）分析。结果表明，所得牛肼病毒正常成熟蛋白的分子量为２３６３０ｕ，其二级结构主要由α螺旋构成，含少量β折叠。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段，该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性，其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中，表达出约５２ｋｕ的蛋白质，表达量约为２１％。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

整合素αVβ3在小鼠胚胎植入中的作用

整合素是一类由α、β亚基构成的异二聚体黏附分子，能够调节细胞间的黏附和细胞通讯，近期研究表明，整合素αＶβ３在胚胎“植入窗口”期能够参与母胚相互作用，是子宫内膜接受性的标记分子，同时决定胚胎侵入性。就此作用机理作了进一步研究。间接免疫荧光和激光共聚焦扫描（ｃｏｎｆｏｃａｌ）结合显示，整合素αＶβ３在不鼠胚泡中明显表达。妊娠第３天小鼠子宫角注射αＶβ３抗血清显著降低妊娠第８天子宫角的着床胚胎数（Ｐ〈     

棉花曲叶病毒外壳蛋白基因启动子不是组织特异表达的启动子

双生病毒是一种单链ＤＮＡ病毒，来自番茄金色花叶病毒（ＴＧＭＶ）的资料表明，其外壳蛋白基因（ｃｐ）启动子在韧皮部特异表达，对新近发现并鉴定的棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）ｃｐ启动子的研究表明，它不是韧皮部特异表达的启动子，该启动子驱动的ｇｕｓ基因表达活笥不仅存在于韧皮部，而且出现在叶肉组织和根尖分生组织中，瞬时表达研究表明，ＡＣ２激活后的ｃｐ启动子在叶肉及叶脉组织均有表达活性。     

高粱psbA基因启动子“-35”元件的突变效应

应用化学合成的２０ｎｔ寡核苷酸引物，诱导高粱ｐｓｂＡ基因启动子“－３５”元件（ＴＩＧＡＣＡ）中的第１位Ｔ碱基和第３位Ｇ碱基发生突变，获得３个突变体ＡＴＴＡＣＡ，ＧＴＧＡＣＡ和ＡＴＧＡＣＡ，在菠菜叶绿体蛋白质提取物系统中，检测突变的及野生型的高粱ｐｓｂＡ基因启动子与蛋白质的结合能力。凝胶阻滞实验结果表明，野生型的具有很强的蛋白质结合条带，单碱基突变的ＡＴＧＡＣＡ和ＧＴＧＡＣＡ的蛋白质条带的强度明显下     

CF3自由基的共振增强多光子电离研究

通过ＣＦ４气体直流脉冲放电产生ＣＦ３自由基,研究了３０９－３２５ｎｍ,波长范围内ＣＦ３自由基的（２＋１）共振增强多光子电离谱,初步确定了４ｐσ（＾２Ａ″２）和４ｐπ（２Ｅ’）２个Ｒｙｄｂｅｒｇ态的带源分别为６２７７７和６２６１４．４ｃｍ＾－１;相应的量子亏损值分别为０．９７和０．９５。并由振动带分析,获得了上述２个Ｒｙｄｂｅｒｇ态的全对称伸缩振动模和ＯＰＬＡ模的振动频率。实验表明：该实验方法对研究     

衰老基因

美国科学家最近发现了另一种与衰老有关的重要基因，从而使不仅可让人衰老、而且可能造成关节炎和早老性痴呆症等疾病的基因又增添了一个新成员。 迄今为止，科学家共发现了６１种与衰老有关的基因。最新发现的这种基因叫ｐ２１，它不仅对细胞有直接的影响，而且似乎控制着其他与衰变和疾病有关的若干基因。 领导这项研究的芝加哥伊利诺斯大学的伊戈尔·罗宁森（Ｉｇｏｒ Ｒｏｎｉｎｓｏｗ）指出：“这种基因被触动后，其他许多与衰老及老年病有关的基因都发生了变化。” ｐ２１基因对细胞有抑制作用，一旦细胞受到毒素或辐射损害，它就会使…