地塞米松对LPS诱导的小鼠24p3 mRNA表达的影响

采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法研究了脂多糖（lipopolysaccharide ,LPS）诱导的炎症中小鼠免疫器官脾脏和胸腺中24p3 mRNA含量的变化以及糖皮质激素地塞米松（DEX）对它的影响.结果表明,应急时相反应蛋白24p3不仅能被促炎症因素LPS还能被抑炎症因子DEX诱导,并且两者都呈时间依赖性的诱导24p3 mRNA的表达,但两者作用机制以及反应时间不同,DEX的作用较LPS缓慢.LPS和DEX共同作用时DEX起了主导作用,即24p3 mRNA的表达与地塞米松单独作用时趋势一致     

分娩前后小鼠子宫肥大细胞的数量变化

采用甲苯胺蓝染色 (TB)和阿尔新蓝 -番红花红 (AB -S)染色法研究了孕 17d ,18d ,19d ,2 0d和娩后0 .5d ,1d ,2d ,3d时子宫内肥大细胞的数量变化 .结果表明肥大细胞的数目于分娩前剧增、分娩后 (0 .5d)急剧减少、以后 (1～ 3d)又快速回升 ;娩后 0 .5d小鼠子宫肥大细胞数目与分娩前相比差异极其显著 (P <0 .0 1) .提示子宫肥大细胞可能参与了分娩过程以及分娩后子宫内膜的修复 .     

安徽省农田净初级生产力时空变化特征及影响因素——基于MOD17A3的研究

基于MODIS/MOD17A3数据集,结合土地利用数据、气象数据,运用距平分析、相关分析等方法,分析了2000-2010年安徽省农田净初级生产力(NPP)的时空变化特征及影响因素.结果表明:安徽省农田以水田为主;研究时段内,安徽省农田年NPP均值及年NPP总量整体上呈现波动上升趋势;中产农田面积最大,低产农田次之,高产农田面积最小;农田NPP空间分异显著,呈由北向南递增的趋势,中低产水田和旱地主要集中在长江以北地区,高产水田和旱地分布于沿江及其以南地区;降水与水田和旱地NPP均值呈弱负相关关系,温度与水田和旱地NPP均值呈显著正相关关系;温度是影响安徽省农田生产力空间分异的主要气象因素.     

应用梭状芽孢杆菌口服疫苗载体表达HIV p24蛋白的研究

应用一种不产毒的梭状芽孢杆菌（Clostridium perfringens,C.P.）作为口服疫苗载体表达HIVp24蛋白。用PCR扩增HIVp24基因,酶切后插入到含有C.P.序列的pJRC200质粒的CPEORF中,将重组的cp24质粒转化无致病作用的ATCC3624菌株。使HIVp24基因在C.P.形成芽孢时大量表达。结果应用SDS_PAGE和West Blot分析HIVp24在重组C.P.繁殖体和芽孢中的表达情况,发现HIVp24蛋白在C.P.芽孢体中大量表达,而在C.P.繁殖体中却没有表达。证明在体外构建了含有HIVp24基因的重组pJRC200质粒,成功地表达了HIVp24蛋白并得到了HIVp24的高表达ATCC3624菌株。为成功研究C.P.作为一种口服HIV疫苗载体奠定了基础。     

GC-17A型气相色谱仪及实验操作

本文详细介绍了GC-17A Ver.3型气相色谱仪的性能指标、实验操作、使用维护。     

miR-152-3p靶向DDX6/CBLB在肥胖相关子宫内膜癌发生过程中的作用及机制研究

目的 明确miR-152-3p是否通过靶向DDX6和CBLB在肥胖相关子宫内膜癌发生发展过程中发挥作用,并探究其可能的分子机制。方法 体外培养子宫内膜癌细胞系Ishikawa;qRT-PCR、ELISA和Western Blot检测患者血浆、子宫内膜组织和ECa细胞中miR-152-3p及其下游靶基因的表达水平;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因实验,筛选和验证miR-152-3p下游与肿瘤发生密切相关的靶基因;CCK-8、EdU增殖检测、细胞划痕和Transwell等实验,明确miR-152-3p及其下游靶基因对ECa细胞生物学行为的影响。稳定过表达miR-152-3p的ECa细胞进行裸鼠成瘤实验,明确miR-152-3p及其下游靶基因对ECa细胞体内成瘤能力的影响;SPSS 20.0软件进行统计学分析,P＜0.05定义为差异具有统计学意义。结果 与正常体重ECa患者相比,miR-152-3p在肥胖伴ECa患者血浆和肿瘤组织中表达水平显著降低;双荧光素报告基因实验证实DDX6和CBLB是miR-152-3p的下游靶基因,并且在肥胖伴ECa患者血浆和肿瘤组织中表达水平显著增加;过表达miR-152-3p后,DDX6和CBLB的表达水平显著降低,并且显著抑制了ECa细胞的增殖和迁移能力;过表达miR-152-3p的ECa细胞在裸鼠体内的成瘤能力显著降低,并且肿瘤组织中DDX6和CBLB表达水平显著降低。结论 miR-152-3p可通过靶向下调DDX6/CBLB的表达,抑制子宫内膜癌细胞的生物学行为,并在肥胖相关肿瘤微环境中降低其成瘤能力。     

基于CYP24A1的癌症治疗研究进展

25-羟维生素D_3-24-羟基化酶(CYP24A1)是使1α,25-二羟基维生素D_3(1α,25(OH)_2D_3)和25-羟基维生素D_3(25(OH)D_3)代谢失活的关键酶。活性维生素D(1α,25(OH)_2D_3)不仅能够抑制细胞增殖、诱导细胞分化与凋亡、增强免疫调节作用,还可以降低癌症发生风险。有越来越多的证据表明,血清25(OH)D_3水平降低、CYP24A1基因高表达与多种癌症的发生率及不良预后密切相关,CYP24A1高表达可能促进维生素D的代谢降解,进而影响癌症的发生与发展。CYP24A1抑制剂或维生素D类似物与1α,25(OH)_2D_3联用能够显著提高1α,25(OH)_2D_3的抗肿瘤细胞增殖作用,这能为癌症的预防和治疗提供新的思路。回顾了CYP24A1在癌症中的研究进展,并就维生素D活性类似物及CYP24A1抑制剂在癌症治疗中的研究和应用进行了总结,以期为相关癌症的诊断和治疗提供理论参考。     

小鼠IL—6基因的克隆及表达载体的构建

采用常规的分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的IL－6,并构建了表达载体,序列分析表明所克隆的IL－6序列与献已报道的一致,构建的表达载体经鉴定正确。     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现:S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高;在妊娠第4天,子宫中S100A10基因表达明显上调,且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达,其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞,且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞,而非植入位点呈现极其微弱的表达;从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达;正常动情周期中,S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调;卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达,孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

原发性子宫内膜癌与p16基因突变及蛋白表达关系的研究

目的研究p16蛋白表达与原发性子宫内膜癌发生发展的关系和p16基因缺失突变及点突变在原发性子宫内膜癌发生发展中的地位.方法利用免疫组织化学方法、聚合酶链反应和聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,分别检测正常子宫内膜组织、子宫内膜癌前病变组织及原发性子宫内膜癌组织,观察p16蛋白和p16基因缺失突变及点突变.结果1)p16蛋白阳性表达率在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌前病变组织中表达率分别为92.78%和90.00%,两者相比无差异性;在原发性子宫内膜癌组织中为66.67%,明显低于正常子宫组织及癌前病变组织;2)在42例原发性性子宫内膜癌组织中有14例发生p16基因缺失突变,4例发生了p16基因点突变,突变率为分别为33.33%和9.6%,正常子宫颈组织和子宫内膜癌前病变组织未发现p16基因缺失突变和点突变.结论1)在原发性子宫内膜癌发生发展过程中,p16蛋白的表达在高分化癌明显低于低分化癌,表明p16蛋白缺乏与子宫颈细胞增殖失控及分化不良紧密相关.2)原发性子宫内膜癌存在p16基因点突变,以低分化癌多见,但不是较频繁的事件;原发性子宫内膜癌存在p16基因缺失突变,以低分化癌多见,是较频繁的事件.3)p16蛋白表达与p16基因突变的相关性未被发现.     

盐酸法舒地尔抑制小鼠EAE作用及机制研究

目的探讨盐酸法舒地尔（Fasudil hydrochloride）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的抑制作用和可能的机制.方法按平均体重将C57BL/6雌性小鼠分为EAE组、盐酸法舒地尔治疗组和佐剂组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽（MOG35-55）诱导EAE模型,佐剂组以等量生理盐水代替.治疗组于免疫后6d开始按50mg（/kg&#183;d）腹腔注射盐酸法舒地尔,EAE组和佐剂组用等量的生理盐水作为对照.比较各组小鼠的各种表现,并进行症状评分.免疫后18～20d取各组小鼠,制备脾脏淋巴细胞悬液,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测并比较各组淋巴细胞培养上清液中细胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的水平.结果盐酸法舒地尔能够显著改善EAE的症状,减轻中枢神经系统（CNS）炎性浸润及髓鞘脱失等病理变化,并且可抑制脾脏淋巴细胞分泌INF-γ、IL-17（P〈0.05）,促进IL-10的分泌（P〈0.05）.结论盐酸法舒地尔可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其对脾淋巴细胞中INF-γ、IL-17表达的下调和IL-10表达的上调作用有关.     

采用抗体包被金磁纳米微粒修饰电极的HIV p24/gp36安培联检芯片

研制了以聚碳酸酯为基底的双通道安培检测微流控免疫芯片,在其中分别集成了修饰有HIV核心抗原p24/gp36的单克隆一级抗体的纳米金修饰电极,并应用于人血清中p24和gp36抗原的同时分析.检测原理是:基于夹心免疫分析法,在电压驱动下,一次性加入含有p24和gp36样品及HRP酶标记的p24和gp36二级抗体溶液,与电极表面的一级抗体生成夹心免疫复合物;接着在体系中加入H2O2,以方波溶出伏安法检测免疫复合物上HRP催化H2O2的还原电流.在pH为6.2的磷酸缓冲液中,对HIV p24和gp36的检测时间均少于2 min,线性范围为0.5～400 μg/L,检测限为0.25 μg/L.该芯片集成了加样、分离和检测系统,检测时间短,灵敏度明显高于传统的酶联免疫吸附分析法,可应用于对艾滋病的旱期诊断和大范围筛查.     

高脂饮食及耐力训练对大鼠腓肠肌p53和IL-6表达的影响

目的:探讨高脂饮食和耐力训练对大鼠腓肠肌p53和IL-6表达的影响.方法:28只大鼠随机分成4组:高脂对照组(H)、高脂耐力组(R)、普通对照组(C)和普通耐力组(E),每组7只,训练8周;末次训练后24h,各组大鼠在安静状态下处死,取腓肠肌.采用ELISA法测定腓肠肌胞浆中p53和IL-6的含量.结果:(1)E组大鼠肌浆中p53的表达显著低于C组(p<0.05),H组与C组比较无显著性差异,R组与E组比较也无显著性差异;(2)H组大鼠肌浆中IL-6的表达显著高于C组(p<0.05),R组也显著高于E组(p<0.05),但 C组与E组比较无显著性差异.结论:高脂饮食不仅会引起大鼠在安静状态时的炎症反应,还会促进大鼠运动时出现的运动性机体改善;耐力训练对大鼠骨骼肌的衰老具有一定的延缓作用,IL-6对长时间的耐力运动具有一定的适应性.     

IL-17在胃癌组织中的表达及其与微血管生成的相关性分析

为探讨胃癌患者肿瘤组织中IL-17的表达及其与微血管生成的关系,采用免疫组织化学染色检测IL-17在30例胃癌患者石蜡包埋肿瘤组织中的表达,分析IL-17阳性细胞的形态学特征;对上述胃癌组织进行CD34免疫组织化学染色,计数微血管生成;统计学分析胃癌组织中IL-17表达与微血管生成的关系.结果在人类胃癌组织中IL-17阳性细胞多呈淋巴细胞样特征,且其表达水平较高组微血管生成增多.说明胃癌组织中IL-17表达水平与微血管生成正相关.     

IL-24联合大蒜素体外抗肺癌细胞生长的实验研究

目的探讨抑癌基因IL-24联合大蒜素对肺癌A549细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法提取前期构建的p DC316-h IL-24-EGFP质粒,转染肺癌A549细胞,分为A组(空白对照组)、B组(单独大蒜素组(40μL/m L))、C组(脂质体+IL-24组)、D组(大蒜素(40μL/m L)+脂质体+IL-24).荧光显微镜下观察质粒的转染情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测p DC316-h IL-24-EGFP、大蒜素和联合用药作用A5 4 9细胞4 8 h后IL-24,Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果大蒜素(40μL/m L)和p DC316-h IL-24-EGFP单用48 h对A549细胞均有明显抑制作用;大蒜素(40μL/m L)联合p DC3 1 6-h IL-24-EGFP比单用p DC3 1 6-h IL-24-EGFP作用更强(P0.05);大蒜素(40μL/m L)、p DC316-h IL-24-EGFP和两药联用48 h后,A549细胞凋亡率分别为32.7%,39.4%和68.8%;大蒜素(40μL/m L)和/或IL-24作用于A549细胞48 h后,Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3表达均上调,联合用药组效果尤其明显.结论p DC316-h IL-24-EGFP联合大蒜素可协同抑制人肺癌A549细胞生长,机制可能是通过调节基因Bax/Bcl-2的表达比率,并上调Caspase-3的表达,进而诱导A549细胞的凋亡.     

趋化素对肥胖哮喘小鼠气道IL-17表达的影响

为了研究趋化素（chemerin）对肥胖哮喘小鼠气道中IL-17表达的影响。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学染色等方法研究了小鼠体内chemerin和IL-17的表达,选取了36只雄性C57BL/C小鼠随机分至6组,每组6只,分别为正常对照组,肥胖对照组,哮喘模型组,肥胖哮喘组,二甲双胍哮喘组,二甲双胍肥胖哮喘组。造模完毕后,收集各组小鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织,检测血清及BALF中chemerin及IL-17浓度,进行BALF细胞计数与分类以及肺组织免疫组化染色。结果表明：与正常对照组、肥胖对照组及哮喘模型组相比,肥胖哮喘组小鼠血清及BALF中chemerin、IL-17浓度明显升高,BALF中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数增多;经二甲双胍干预后,二甲双胍肥胖哮喘组小鼠chemerin及IL-17浓度较肥胖哮喘组小鼠降低,且各分类细胞计数减少。可见随着chemerin表达的减少,肥胖哮喘小鼠气道IL-17水平降低,chemerin可能参与了肥胖哮喘小鼠气道IL-17的表达。