人胎盘源性间充质干细胞体外分离培养及多向分化潜能的研究

为体外分离培养人胎盘源性的间充质干细胞,并对其生物学特性进行研究.采用组织块贴壁培养法分离培养获取胎盘源性间充质干细胞,通过培养扩增后用流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型,在体外诱导其向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞方向分化,并通过特异性染色鉴定其分化能力.结果显示采用组织块贴壁法能成功获得贴壁生长的成纤维样人胎盘源性间充质干细胞;流式细胞本分析结果示,人胎盘源性间充质干细胞高表达CD29、CD44,阴性表达CD34、CD133、HLA-DR及vWF,细胞周期结果示,G0/G1期细胞约占77％;经向脂肪细胞诱导后油红O染色阳性,向成骨细胞诱导后茜素红染色为阳性,向神经细胞诱导后,NSE表达阳性.由此可知,人胎盘中富含间充质干细胞,与其他来源的间充质干细胞的生物学特征相似.     

兔骨髓间充质干细胞复合脱细胞牛松质骨体外相容性研究

探讨脱细胞牛松质骨（Acellular Bovince Cancellous Bone,ABcB）生物衍生材料与骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的生物相容性,为组织工程方法修复骨缺损提供依据。将兔骨髓间充质干细胞与ABCB复合并体外培养,然后进行形态学、细胞增殖、蛋白质含量测定。骨髓间充质干细胞能够贴附在ABCB孔隙内生长,细胞生长及蛋白合成功能不受ABCB的影响。ABCB生物相容性良好,可作为组织工程的支架材料应用于骨缺损的修复;BMSCs可以作为骨组织工程种子细胞。     

染色体标本制备在骨髓MSCs核型鉴定中的研究

选取对数生长期人骨髓间充质干细胞,用秋水仙素阻断细胞分裂中期,控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间,比较染色体标本制备效果。结果显示,秋水仙素的终浓度0．2μg／ml和作用时间6h,低渗时间35min及胰酶消化时间20s时可制备适合的染色体标本,经核型鉴定为正常二倍体细胞。从而探索出骨髓间充质干细胞染色体制备的适合条件,为骨髓间充质干细胞的进一步研究提供了理论依据和实验基础。     

新疆核盘菌的培养性状及其致病性研究

从温度、pH值、不同培养基、不同光照条件、产生草酸能力及致病性方面对10个供试菌株菌株进行了研究。结果表明:供试核盘菌在5~30℃均可生长,菌丝生长最适温度为20~25℃;最适pH为5~7,光照对菌丝生长影响不大;在PDA和PSA培养基上生长较好,一般生长速度较快的菌株其产毒素草酸能力较强;所有供试菌株,均对向日葵有较强的致病性。     

小麦RIL群体中籽粒蛋白质组分的分离与主要品质性状的相关分析

利用普通小麦重组自交系群体为材料,研究了小麦籽粒蛋白质组分在后代群体中的分离和分布,同时对籽粒蛋白质组分与其它主要品质指标的关系进行了研究.结果发现籽粒蛋白质组分在群体后代中表现为微效多基因控制的数量性状,相对亲本的性状变异较大.醇溶蛋白和谷蛋白相对含量与湿面筋含量、SDS沉降值之间呈显著正相关,与硬度呈正相关.清蛋白、球蛋白相对含量与湿面筋含量、SDS沉降值和硬度呈负相关.     

甜瓜主要农艺性状与品质性状的配合力分析

以6份甜瓜自交系为亲本进行完全双列杂交,采用Griffing方法Ⅱ配制杂交组合15个,对甜瓜6个亲本和15个杂交组合果实的单果重、种腔直径、果实纵径、可溶性糖含量、有机酸含量、维生素C含量一般配合力和特殊配合力进行分析。结果表明：亲本M5、M2的一般配合力较高,是十分优良的母本,而M4、M6是表现较好的父本。组合M4×M5、M2×M6、M5×M6、M2×M4的特殊配合力较高,属综合性状优良的组合。该结果将为甜瓜杂交育种的亲本选择和选配提供依据。     

小鼠精原干细胞的体外培养与鉴定

建立一种简单、有效体外分离和培养精原干细胞（Spermatogonia stem cell,SSCs）的方法。采用酶消化6—8d新生小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液后进行培养,碱性磷酸酶（AKP）染色和间接免疫荧光对培养的细胞进行鉴定;结果显示：SSCs培养3～5天可观察到细胞克隆的产生,AKP染色强阳性;间接免疫荧光显示GCNF阴性,oct-4、c—kit均呈阳性反应。由此可知以DMEM＋15％胎牛血清＋白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）＋L-谷氨酰胺等为培养基,成功建立了精原干细胞的体外培养体系。     

小麦碱性水保持力与品质性状和产量性状的相关性分析

利用小麦京771×Pm97034产生的重组自交系群体,对小麦碱性水保持力与其他品质性状和产量性状在重组自交系群体中的相关性进行了研究。研究结果表明:碱性水保持力与蛋白质含量和籽粒硬度呈显著和极显著正相关(r=0.189,r=0.253),与谷蛋白膨胀指数表现出了极显著的负相关(r=-0.232,P<0.01);与面筋指数、Zeleny沉淀值呈不显著的负相关;与湿面筋含量、膨胀势呈不显著的正相关。碱性水保持力与各产量构成因素的相关性均未达到显著水平,其中除与穗长呈不显著的正相关外,与其他产量性状均呈不显著的负相关。     

分离方法和卵巢发育状况对猪腔前卵泡分离及体外培养的影响

以直径在200～300μm的腔前卵泡为研究对象,研究了不同分离方法及卵巢不同发育状况对猪腔前卵泡分离及体外培养的影响。结果表明,显微分离法每个卵巢可采集的卵泡数极显著高于剪碎过滤法（24．75±2．99vs2．60±0．35,P〈0．01）,显微分离法分离每个腔前卵泡所用的时间极显著低于剪碎过滤法（5．40±0．44vs15．52±1．18,P〈0．01）;有黄体和无黄体的卵巢对卵泡分离的影响差异不显著（26．10±2．02vs24．35±2．32,P〈0．05）,但有黄体的卵巢分离的卵泡数稍多于无黄体的卵巢。此外,对两种分离方法分离出的腔前卵泡进行培养研究表明,两种分离方法对卵泡体外生长和存活,以及正常卵母细胞比率均没有显著影响（P〉0．05）。     

小麦抗性淀粉与其它淀粉性状间的相关及通径分析

为高抗性淀粉小麦品种的选育提供理论依据,利用抗性淀粉含量较高的小麦品种M344和抗性淀粉含量较低的小麦品种武春3号重组自交得到F2∶3家系,对F2∶3家系抗性淀粉含量与总淀粉含量、直链淀粉含量及膨胀势进行了相关、回归及通径分析,分析了小麦抗性淀粉与其它淀粉性状之间的关系。结果表明:小麦抗性淀粉含量与直链淀粉含量呈极显著正相关(r=0.18,P≤0.01),通径分析表明直链淀粉含量对小麦抗性淀粉含量存在正向影响,直接通径系数达0.169;小麦抗性淀粉含量与总淀粉含量呈显著正相关(r=0.151,P≤0.05),但与膨胀势间呈不显著负相关(r=-0.57)。小麦抗性淀粉含量(Y)与总淀粉含量(X1)、直链淀粉含量(X2)及膨胀势(X3)间的回归方程为Y=0.289+0.007X1+0.037X2-0.033X3,该方程可解释抗性淀粉7%的表型变异,说明抗性淀粉含量与直链淀粉含量的关系最密切,其次为总淀粉含量。     

大鼠骨髓间质干细胞的培养和生物学特征

为探索大鼠骨髓间充质干细胞的最佳培养条件及表型,用大鼠股骨抽取骨髓,密度梯度离心分离骨髓间充质干细胞。通过测定生长曲线和克隆形成能力,比较不同培养条件、不同融合度传代及不同生长基质对MsC的影响。免疫组化双标法检测增殖MSC的表型。结果Matrigel包被培养器皿,含10％胎牛血清、10ng／mLEGF的α-MEM培养基,50％融合时消化传代,是MSC保持低分化状态、体外大量扩增的较佳条件。绝大部分MSC表达CD44,部分MSC表达c-kit,MSC几乎不表达CD34。说明以上培养条件是MSC保持低分化状态又大量增殖的较好培养条件,为MSC用于细胞移植和组织工程打下了良好基础。     

脊髓损伤患者骨髓间质干细胞形态学观察

目的骨髓间充质干细胞具有自我复制能力,可以经过不可逆的终末分化过程产生子代细胞,其潜在的多向分化潜力以及可作为细胞治疗这一特点,极有可能成为组织工程较为理想的种子细胞。本实验是对脊髓损伤患者骨髓间充质干细胞形态学观察。方法抽取脊髓损伤患者的骨髓,经密度梯度离心分离、纯化和培养,观察原代和传代细胞的细胞形态。结果原代培养的BMMSCs最佳的贴壁时间为3d,生长性状不一,呈散在圆形细胞群、克隆圆形细胞群、散在梭形细胞群、花带状细胞群、旋涡状细胞群,而传代培养的细胞,增殖速度较快,性状一致,排列规则,呈饱满的梭行。结论体外非诱导培养的BM—MSCs方法可能为临床治疗脊髓损伤患者提供种子细胞。     

2种骨髓间充质干细胞生物性状的比较

比较老人和胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学性状,为选择抗砷细胞的种子细胞提供实验依据。取老人和胎儿骨髓MSCs,在α-MEM培养液中进行骨髓MSCs培养,测定生长曲线,细胞贴壁率及NaAsO2对骨髓MSCs的细胞毒作用。从老人和胎儿骨髓中可培养出骨髓MSCs,二者在细胞形态、生长特性等方面相似,胎儿骨髓MSCs的扩增潜能明显强于成人骨髓MSCs,胎儿骨髓MSCs对NaAsO2的耐受性比老人骨髓MSCs高。因此,从老人及胎儿骨髓中可分离培养出骨髓MSCs,在体外保持有效扩增能力。胎儿骨髓MSCs比老人骨髓MSCs更原始,具有更大的体外扩增潜能,可做为抗砷细胞的种子细胞。     

骨髓间充质干细胞移植治疗四氯化碳大鼠肝纤维化的实验研究

目的通过移植大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)治疗肝纤维化大鼠,并评价其疗效。方法通过全骨髓贴壁法分离培养纯化大鼠BMSC,用流式细胞仪对第3代BMSC进行表面抗原鉴定。选取清洁雄性SD大鼠20只,利用四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl_4)皮下注射构建大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠随机分为BMSC组、PBS组,每组10只;分别通过尾静脉注射,予1 mL细胞浓度为1×10~6个/mL的BMSC细胞悬液、1mL PBS溶液,另取6只健康雄性SD大鼠作为空白对照组;移植后第5周处死各组大鼠,采集血液检测大鼠肝功;取肝脏组织切片进行HE、Masson染色,观测大鼠肝细胞组织损伤及纤维化程度,利用Image J软件计算肝脏胶原容积分数(Collagen Volume Fraction,CVF);通过qRT-PCR检测各组大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果(1)通过流式细胞术鉴定BMSC表面抗原,CD29、CD90高表达,CD45低表达。(2)与PBS组比较,BMSC组大鼠肝脏肝小叶网状结构较完整,CVF降低且Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少(P0. 05)。(3)与PBS组相比,BMSC组大鼠肝功能改善,且差异具有统计学学意义(P0. 05)。结论同种异体移植BMSC可以有效减少肝脏胶原沉积,改善肝纤维化大鼠肝脏功能。     

骨髓间充质干细胞三维培养--构建工程组织

骨髓间充质干细胞因其可获得性、可扩增性和可多向分化性,是理想的组织工程种子细胞,用于构建工程组织。实现这一目标的主要障碍在于如何在体外模拟生理环境培养骨髓间充质干细胞,因此,研究并改进骨髓间充质干细胞体外三维培养至关重要。对近年来骨髓间充质干细胞作为组织工程种子细胞的培养方式、培养系统以及培养中的环境因素加以评述。     

人胎骨髓MSCs的分离鉴定及其向脂肪和成骨细胞的分化

目的:分离鉴定人胎骨髓中的间充质样干细胞(mesenchymal-like stem cell,MSCs),探索其体外培养的生物学特性。方法:利用细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎骨髓间充质样干细胞;利用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志;添加常规诱导液诱导其向脂肪、成骨方向分化,并利用特异性细胞化学染色法加以鉴定。结果:从人胎骨髓中成功分离、纯化得到间充质样干细胞,P4代细胞有92.3%的细胞处于G0/G1期;P5代细胞有96.1%的细胞处于G0/G1期;流式细胞仪检测P3代细胞结果显示:人胎骨髓MSC表达CD15、CD29、CD44、CD105、CD106和CD166,不表达造血细胞标志CD34、CD45,不表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86、CD40、CD40L。在经典的诱导条件下,人胎骨髓MSCs可迅速向脂肪及成骨方向分化。结论:人胎骨髓中含有丰富的间充质样干细胞,具有较强的多向分化潜能,且免疫原性弱,是组织工程的较为理想的种子细胞。     

氧化型低密度脂蛋白提高小鼠骨髓间充质干细胞粘附力

分别采用5、10和20μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)处理小鼠骨髓间充质干细胞(bmMSCs)6h,通过CellTracker预染小鼠单核细胞,检测单核与bmMSCs之间的粘附率,研究ox-LDL对bmMSCs粘附的影响.利用Western blot检测粘附分子VCAM-1和ICAM-1于ox-LDL处理后在bmMSCs内的表达情况.结果显示:bmMSCs阳性表达间充质干细胞特异性标记分子CD44和CD90;ox-LDL可显著提高bmMSC与单核细胞之间的粘附(P<0.05),增强粘附分子VCAM-1和ICAM-1的表达(P<0.05),且具有剂量效应.以上结果表明,ox-LDL通过增强粘附分子VCAM-1和ICAM-1的表达进而增强bmMSCs对单核细胞的粘附,其或许可作为一种提高间充质干细胞粘附和提高干细胞移植后存活率的诱导剂.     

人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定

通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105 、CD106 和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．     

BrdU标记骨髓间充质干细胞的研究

目的:探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-21-deoxyuridine,BrdU)标记骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells.MSCs)的可行性.方法:分离培养骨髓MSCs,经BrdU标记不同时间,免疫细胞化学鉴定.结果:MSCs的CD44、CD54免疫细胞化学染色阳性率达90%以上.BrdU标记的阳性细胞率随标记时间延长而逐渐增高,标记72h阳性率达85%以上.结论:以10μmol/L的BrdU标记骨髓MSCs的最佳时间是72h.