转Bt 基因抗虫棉品种的推广利用与棉铃虫抗性的治理

我国现有３类转Ｂｔ基因抗虫棉种质材料：９４－２４，中心９４和Ｒ１９，它地棉铃虫初孵幼虫都表现出显著的抗虫性，用它们作亲本材料都已培育出转基因抗虫棉的品种或杂交种，这三类抗虫棉在不同生育期抗虫性表现程度不同，苗期（１０片主茎叶以下）吉处发孵死亡率一般达１００％，生育后期抗虫性则有所下降，Ｂｔ基因转发方棉花后能稳定遗传给后代，不同世代的抗虫性表现基本一致，通过室内汰选，烟芽夜蛾等害虫很容易对Ｂｔ杀虫     

用微卫星标记定位一个未知的小麦抗条锈病基因

条锈病抗生鉴定和遗传分析表明，小麦品系Ｒ５５携带一个显性抗条锈病基因；用微卫星标记和Ｆ３分离群体分组分析法研究表明，该抗条锈病基因们于小麦１Ｂ染色体短臂上，与微卫星分子标记ＷＭＳ１１－１９３ｂｐ，ＷＭＳ１８－１８４ｂｐ紧密连锁，遗传距离均为１．９ｃＭ；据抗源的系谱、亲本抗性及基因位点分析，该基因来源于圆锥小麦，不同于已知的小麦抗条锈病基因，以ＰＣＲ为基础的微卫星标记可方便地用于小麦育种辅助选择。     

转双基因抗虫烟草延缓棉铃虫抗性的作用评价

用转单（Ｂｔ），双（Ｂｔ＋ＣｐＴＩ）基因抗虫烟草按平均校正死亡率约６０％汰选棉铃虫１８代，棉铃虫对ＣｒｙＡｃ型Ｂｔ杀虫蛋白的抗性指数分别增长为１３．１，３．０２倍，其中转单基因烟草汰选的种群在两种抗虫烟草上的死亡率显著降低，而转双基因烟草汰选的种群与对照种群相比无显著差异。     

染色体重排引起转基因双价抗虫棉变异

在我国自己培育的转Ｂｔ＋ＣｐＴＩ双价抗虫棉Ｔ４纯合后代中获得了一株畸形突变株，它的株型小，雌雄不育，减数分裂也不正常，细胞学研究表明抗虫突变株发生染色体变异导致形态变异，抗虫性分析和ＰＣＲ检测结果均揭示出，该突变的发生不影响希虫蛋白基因的正常表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析结果进一步证明，该突变株可能发生了染色体缺失或外源基因插入位点转移，在纯合的转基因后代中，染色体结构再发生重排的现象还不多见。     

表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫

利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因，与人工合成的ＣＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草，获得２８株卡那酶素抗性植株，经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹检测，证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合，转基因烟草杀棉铃虫试验表明，４０％转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性；Ｂｔ杀虫蛋白ＥＬＩＳＡ检测获得与虫试较一致结果，抗虫性较强株Ｋ１１号ＣｒｙＩ     

水稻抗白叶枯病基因Xa—4的精细定位及其共分离分子标记

利用Ｘａ－４的近等基因系ＩＲ２４和ＩＲＢＢ４构建Ｆ２群体，通过抗性鉴定筛选出感病植株，利用水稻高密度图谱上的分子标记和候选抗病基因片段进行分析，构建了抗白叶枯病基因Ｘａ－４的遗传图谱，并获得了与Ｘａ－４共分离的分子标记ＲＳ１３。构建的遗传图谱还包含另外５个紧密边锁的分子标记，其中 １个是ＰＣＲ标记，４个是国际通用的水稻高密度图谱上的ＲＦＬＰ标记。为图位克隆Ｘａ－４打下的基础，也为分子标记辅助选择育     

水稻抗白叶枯病基因Xa-4的精细定位及其共分离分子标记

利用Ｘａ－４的近等基因系ＩＲ２４和ＩＲＢＢ４构建Ｆ_２群体，通过抗性鉴定筛选出感病植株，利用水稻高密度图谱上的分子标记和候选抗病基因片段进行分析，构建了抗白叶枯病基因Ｘａ－４的遗传图谱，并获得了与 Ｘａ－４共分离的分子标记 ＲＳ１３．构建的遗传图谱还包含另外５个紧密连锁的分子标记，其中１个是ＰＣＲ标记，４个是国际通用的水稻高密度图谱上的ＲＦＬＰ标记．为图位克隆Ｘａ－４打下了基础，也为分子标记辅助选择育种提供了有效的分子标记。     

其他寄主作物能成为Bt感性棉铃虫的庇护所吗?

害虫的抗药性是苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt)微生物杀虫剂及转Bt基因抗虫作物在推广应用过程中潜在的巨大生态风险，建立庇护所、提供敏感种群是美国、澳大利亚等地在转Bt基因抗虫棉种植过程中采取的主要的抗性防治措施；而国内转Bt基因抗虫棉在田间多与其他作物套种，没有建立专门的庇护所。应用PCR指纹谱方法，检测了棉铃虫不同寄主种群的遗传差异，分析了棉铃虫不同寄主植物种群间的基因交流情况。结果表明，在田间棉铃虫的不同寄主种群中，Bt棉种群与普通棉花、玉米、蓖麻种群间基因交流频繁，而与芝麻、花生种群间交流存在一定障碍，彼此个体间不能进行随机交配，说明除普通棉花外、玉米、蓖麻能作为庇护所，防止棉铃虫对转Bt抗虫棉的抗性、而芝麻和花生不适于作为庇护所在田间与转基因棉花套种。     

用低能氩离子束介导将水稻几丁质酶基因导入小麦

用低能氩离子束介导将构建的ｐＣＡＭＢＩＡ１３０８质粒载体上携带的几丁质酶基因（ＲＣＨ８）导入３个小麦栽培品种扬麦１５８，皖９２１０，皖麦３２号的成熟胚细胞，来自成熟胚的初生愈伤组织转Ｈｍ浓度为１０－２０ｍｇ／Ｌ潮霉素（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ，Ｈｍ）的培养的筛选培养，获得的抗性伤组织转入Ｈｍ浓度为１０－２０ｍｇ／Ｌ的培养基上进行分化培养，３个小麦品种都获得了再生植株，再生苗ＰＣＲ和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅ     

猪FSHβ及ESR合并基因型对猪产仔数性状的影响

雌激素受体（ＥＳＲ）基因和促卵泡素β亚基（ＦＳＨβ）基因对猪产仔数具有显著的影响，分析了这两个基因座的合并基因型对母猪产仔数性状的影响，结果表明ＥＳＲ基因与ＦＳＨβ基因在商业猪种中均为控制猪产仔数的主效基因，但是它们对产仔数的主效基因，但是它们对产仔数的影响存在显著的场间和品种间差异。这两个基因座的合并基因型ＢＢＢＢ母猪比ＡＢＡＡ母猪总产仔数平均每胎多１．８５～３．０１头，产活仔数平均每胎多２．０     

DREB转录因子在提高植物抗逆性中的作用

拟南芥ｒｄ２９Ａ基因编码一种与ＬＥＡ蛋白相似的亲水性很强的蛋白，该基因的表达受干旱、高盐及低温的诱导、ｒｄ２９Ａ基因启动子区域中的有两个与上述环境胁迫应答有关的ＤＲＥ顺式作用元件，利用ｒｄ２９Ａ基因启动子的ＤＲＥ顺式作用元件和酵母Ｏｎｅ－Ｈｙｂｒｉｄ方法，两类与ＤＲＥ元件特异结合，在低温或干旱、调卤胁迫条件下调控报道基因表达的南芥ＤＲＥＢ转录因子被克隆及鉴定，分别定名为ＤＲＥＢ１Ａ￣Ｃ和ＤＲＥＢ２     

TMV-RNA 非翻译区对外源基因在整体植物中表达水平的影响

利用ＧＵＳ基因及ＴＭＶ－ＲＮＡ非翻译区序列构建了４种ＧＵＳ基因的植物表达载体，即ｐＢＧ４３７，ｐＢＧ４３８，ｐＢＧ４４０和ｐＢＧ４４０△ＮＯＳ。在这４种表达载体中带双增强子的３５Ｓ启动子的下游分别由ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ－ＮＯＳ和Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ组成４个不同的表达框架。转基因烟草ＧＵＳ活性检测表明，转ＰＢＧ４４０植株的ＧＵＳ活性是转ｐＢＧ４３７的５倍，是转     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞，ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

来自长穗偃麦草的抗小麦条锈病基因的定位

对一套小麦－长穗偃麦草二体代换系进行了条锈病抗性鉴定，抗性遗传和生化分析，结果表明，长穗偃麦草携带有新的抗小麦条锈病基因，位于３Ｅ染色体上，在小麦背景中呈显性遗传，暂定名为ＹｒＥ，长穗偃麦草编码的酯酶－５结构基因位于３Ｅ染色体上，暂命名为Ｅｓｔ－Ｅ５．Ｆ２群体分析发现Ｅｓｔ－Ｅ５与抗病基因ＹｒＥ呈共分离，表明Ｅｓｔ－Ｅ５是检测３Ｅ染色体及其携带的抗条锈病基因较理想的生化标记位点。     

水稻耐盐性QTL的定位

利用已建成的１个以籼稻窄叶青８号（ＺＹＱ８）和粳稻京系１７（ＪＸ１７）为亲本的ＤＨ群体及其高密度分子连锁图谱,在水稻生长的幼苗期,用高浓度的ＮａＣｌ胁迫处理ＺＪＤＨ群体,以各株系存活时间为指标,得到１组耐盐性数据。然后分别用ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＱＴＬ１．１和ＰＬＡＢＱＴＬ１．０软件分析,结果表明ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＱＴＬ１．１和ＰＬＡＢＱＴＬ－ＳＩＭ均将耐盐主效基因Ｓｔｄ定位于第１染色体的ＲＧ６１２和     

大豆花叶病毒抗性基因Rsa的分子标记

大豆花叶病毒病危害严重,世界大豆产区的均有发生,以广谱抗源材料科丰１号为母本,感病品种南农１１３８－２为父本配制杂交组合,针对南方强毒株系Ｓａ进行了抗病性遗传学分析。通过接种鉴定亲本,Ｆ１,Ｆ２和Ｆ３代的抗性表现,Ｘ＾２测验结果表明,对Ｓａ的抗性是由单显性基因Ｒｓａ决定的采用ＢＳＡ法,利用ＲＡＰＤ技术在抗感染池间寻找多态性标记。     

猪leptin受体基因OBR的表达检测与部分片段克隆分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法分析了猪ｌｅｐｔｉｎ受体ＯＢＲ基因在１１种组织和器官（心肌、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、脂肪、大脑、垂体、下丘脑）中的表达分布，结果表明ＯＢＲ基因在１１种组织和器官中都有表达，其中在肺、肝和下丘脑的表达高于其他组织。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示，编码长细胞内区的长片段表达形式只在下丘脑组织中表达，而已有证据表明只有编码长细胞内区的长片段表达形式才具有     

玉米自交系P9-10遗传转化体系的建立

在Ｎ６培养基中添加１０＾－４ｍｏｌ．Ｌ＾－１ＡｇＮＯ３可促进玉米Ｐ９－１０自交系幼胚诱导产生Ｉ型胚性愈伤组织,把这些胚性愈伤组织经高渗处理后作为受体,用基因枪转化含Ｂｔ基因的ｐＭＧ６质粒,通过选择压递增式筛选,得到了１４个抗性克隆。抗性克隆３种不同的培养基中共诱导出１０个胚状体,经分化得到１０个再生植株累ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实有８个再生植株的基因组中整合有Ｂｔ基因。ＥＬＩＳＡ分析结果     

Bt杀虫基因在转基因双价抗虫棉中的整合与遗传稳定性

Bt抗虫棉中Bt杀虫基因的表达与遗传稳定性对抗虫棉的品种培育和商品化生产至关重要，利用转基因双价抗虫棉R3，R4及R5材料基因组DNA，然后采用GFMCryIA基因的PstI酶切片段做探针，进行Southern杂交分析，研究Bt杀虫基因在双抗抗虫棉虫棉所19材料基因中的整合、拷贝数及遗传稳定性，结果表明，转基因抗虫棉和阳性对照经HindⅢ酶切，Southernblot均出现了约4．7kb的杀虫基因阳性带，从而在分子水平上证实了杀虫基因在棉花基因组中的整合及其完整性，利用在杀早基因中只有一个酶切位点的XhoI酶切后，阳性对照出现了预期大小的17．7kb的阳性带，而双价转基因抗虫棉R3，R4及R5材料均出现了分别为约17．7，8．0，5．5和4．7kb的4条阳性带，初步认为，外源Bt杀虫基因在双价抗虫棉中棉所19材料基因组中至少有4个拷贝，这4个拷贝中很可能有一个以上能够稳定遗传和表达，该研究结果为以后的双价抗虫棉品种培育及商品化生产提供了依据。     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用，为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．