油菜促生菌的研究和应用：Ⅰ菌种的分离和筛选

1988—1989年从南昌市郊油菜根际土壤分离得161个菌株,从中筛选出13个菌株进行生长促进试验.二次盆栽试验结果表明,JS-3和JS-4的促生长效果最好,油菜出苗率、植株鲜重、株高和叶片的大小以及产量均有显著增长.同时还讨论了JS-3、JS-4与JS司和JS-2配成菌株组合的增产效果.     

氮源对杜鹃花菌根真菌氮吸收及硝酸还原酶活性的影响

采用菌丝干重法、半微量凯氏定氮法和磺胺比色法分别测定了HD19、ZT13和D1 3个树粉孢属杜鹃花菌根真菌菌株在铵态氮、硝态氮和有机氮培养基中的生物量、含氮量和硝酸还原酶活性。结果表明:3个菌株在3种氮源培养基中生长良好,而且无机氮培养基中菌株生物量和氮吸收量均显著高于有机氮培养基; 其中菌株HD19在硝态氮培养基中氮吸收量显著高于铵态氮,而菌株ZT13和D1在铵态氮培养基中氮吸收量较高; 菌株在硝态氮培养基中硝酸还原酶活性均较高,说明树粉孢属杜鹃花菌根真菌不仅具有较好的利用硝态氮的能力,还可以吸收利用其他形态的氮源,外源硝态氮可以诱导该类真菌硝酸还原酶活性的提高。     

纤维素降解固氮芽孢杆菌的筛选和鉴定

为了筛选利用纤维素的高效固氮芽孢杆菌作为生产生物固氮菌肥料的菌株,将土壤样品悬液在80℃水浴加热10min,采用以微晶纤维素为碳源的无氮培养基富集和分离纯培养;用DNS法测糖、微量凯氏定氮法定氮测定纤维素酶活性和固氮效率;通过盆栽试验观察菌液对黄瓜植株生长的影响;通过形态观察、生理生化鉴定和16SrDNA比对分析对菌种进行鉴定.实验筛选到生长较快、纤维素酶活性和固氮效率较高的利用纤维素的固氮芽孢杆菌菌株CX21,该菌株在黄瓜盆栽试验中可以达到对照处理施用化学氮肥的等同效果;鉴定结果表明该菌株属于胶质类芽孢杆菌Paenibacillusmucilaginosus.     

碳源、pH值和温度对脱氮菌株脱氮性能的影响

考查碳源(醋酸钠、柠檬酸钠、葡萄糖、甘油、糖蜜、甲醇和蔗糖)、pH值和温度这3个条件对脱氮菌株HN18脱氮能力的影响.结果显示:以糖蜜作为碳源不但使菌株HN18对氨氮、硝酸盐氮的去除率高,亚硝酸盐氮的积累量少,而且价格低、原材料来源广泛,能得到较高的经济效益;菌株HN18生长和脱氮的最适pH值为7.5,最适温度为30℃.     

沼泽红假单胞菌CQV97对养殖水体无机三态氮的去除机制

针对不产氧光合细菌(APB)在养殖水体脱氮过程中是否积累氨氮和亚硝氮等有害产物的问题,以沼泽红假单胞菌CQV97为APB的代表菌株,系统地研究该菌株对无机三态氮的去除机制.结果表明:该菌株能以无机三态氮为唯一氮源生长,通过氨同化、氨氧化、反硝化、亚硝酸盐氧化和同化硝酸盐还原机制脱除无机三态氮;该菌株在氨氮去除过程中积累亚硝氮,在硝氮去除过程中积累氨氮和亚硝氮,在亚硝氮去除过程中积累硝氮.     

啤酒厂废水处理活性污泥中一株细菌的分离与鉴定

从某啤酒厂废水的活性污泥中分离纯化了一株微生物菌株Z-1,分析了该菌株的16S rDNA基因序列及形态特征,测定了该菌株的生长曲线、对抗生素的耐药性及该菌株的曝气池污水氮、磷含量.结果表明:该微生物为芽孢杆菌属细菌(Bacillus),生长较快,对抗生素的耐药性弱,对废水中N、P去除较多,为筛选活性污泥法处理啤酒废水的高效菌株奠定基础.     

好氧反硝化菌的脱氮性能及N_2O逸出量研究

采用SBR反应器,以硝酸钾为氮源驯化活性污泥,筛选分离出两株好氧反硝化菌X1和X2进行生理特性、脱氮性能及N2O逸出量的研究.结果表明:两菌株均能在完全好氧的条件下(DO2mg/L),利用KNO3进行反硝化,总无机氮去除率分别为72.1%和78.9%;以KNO2为氮源时,菌株X1的总无机氮去除率仅为16%,而菌株X2的总无机氮去除率则达到73%;好氧反硝化过程中菌株X1的N2O逸出量高于菌株X2,这与硝酸盐的积累相关;碳源种类对菌株N2O逸出量有较大影响,琥珀酸钠做碳源时N2O逸出量最高.     

小冠花_Coronillavaria_根瘤菌生理生化特性和共生效应的研究

小冠花根瘤菌8406、MXCV1、MXCV2.MWCV3,MXCV4等五菌株的生理生化特性研究表明:8406、MXCV1、MXCV2在YEM培养基中生长较快,代时在5小时以下;而MXCV_3;MXCV4生长较慢,代时分别为8.0和8.4小时.所有菌株在YEM培养基中产酸,对单糖、双糖、多糖等多种碳源的利用行为相似,在碳源利用时大多产酸,对抗菌素的抗性特征等都与一般快生型根瘤菌相似.菌株对有机氮源利用较好,而利用无机氮源生长较差.石蕊牛奶反应中均出现血清环、产酸或产碱,菌株在34℃以上高温均不生长,生长pH范围为6.0—8.5,菌株的耐盐能力不超过0.1mol/L NaCl.小冠花——根瘤菌共生效应表明,菌株MXCV_2的接种效果最显著,有作为优良菌株用于生产菌剂的前景.     

银合欢根瘤菌的生理生化特性及共生固氮效应

所试的七个菌株都是快生型根瘤菌.能利用包括双糖在内的较多的碳水化合物,对多数碳源基质,在利用的同时产酸.除菌株CB81外,其他菌株的代时在3.5小时以下,而菌株CB81的代时为7.2小时.这些菌株能利用无机和有机态氮,但蛋白胨和酵母提取物是良好的氮源.它们在氧化酶、接触酶、脲酶和硝酸还原酶试验中皆呈阳性;在石蕊牛奶试验中产血清环;大多数菌株在pH4.0-9.0仍能生长;这些菌株的耐盐性不超过0.2M NaCl,结瘤实验证明本地菌株LL2的共生固氮能力超过国外菌株TAL1145和CB81.     

一株耐盐菌GL的分离鉴定及促生特性分析

利用海底的淤泥进行分离挑选得到一株耐盐性较强的菌株，该菌为细长的棒状且菌体较长，菌落发白，用接种针易刮起，发出微臭气息.经过16S rRNA序列比对，该菌株与嗜热脂肪土芽孢杆菌菌株GL(KX254601.1)之间关系可信度达到100%,故将其定名为嗜热脂肪土芽孢杆菌(GL).经过对该菌株在1%～10%盐浓度下生长曲线分析，3%～6%的NaCl浓度内菌株最高OD₆₀₀能达到1.5,但是当盐浓度达到10%时菌株生长受到严重影响.菌株GL在1%～9%盐浓度下长势良好，其最佳生长盐浓度为2%.对该菌种的固氮、产铁载体以及促进种子萌发能力进行分析，可以看到在0～2.5%盐浓度下，Ashby无氮培养基上菌落周围均有透明圈，说明该菌株在0～2.50%的盐浓度下具有较好的固氮能力.菌株在0～150 mmol/L的盐浓度下可以产生铁载体，能够促进小白菜种子在盐胁迫条件下萌发和生长，说明该菌株在盐胁迫条件下具有较好的促生特性.     

被孢霉生产γ-亚麻酸发酵条件的研究

在以前的工作基础上继续对变株A02生产γ-亚麻酸的发酵条件进行了研究.我们使用不同碳源、不同氮源、不同温度以及不同C/N进行摇瓶实验.结果发现葡萄糖是油脂合成的最适碳源,最适氮源为酵母膏,菌丝生长的最适C/N比为40:1,而油脂合成的最适C/N比为60:1,25～30℃适于菌丝生长,15～20℃既适合细胞积累油脂,又适合γ-亚麻酸的合成.研究结果提高了用微生物发酵法大规模生产多不饱和脂肪酸的产率.     

反硝化菌株GW1的筛选及特性研究

研究利用反硝化培养基,从实验室厌氧反硝化颗粒污泥中分离、筛选出1株反硝化优势菌株GW1,通过16SrDNA序列分析对其初步鉴定,并研究了温度、pH值、碳源、碳氮比和硝酸盐氮质量浓度对菌株GW1反硝化特性的影响。研究结果表明,菌株GW1的16SrDNA基因序列与Paracoccus versutus有最大相似性,达到99.9%,Genebank登录序列号为GU111570;分离菌株呈革兰氏阳性;最佳反硝化条件:丁二酸钠为碳源,温度为35～40℃,pH值为7.0～8.0,建议工程应用碳氮比为3∶1(质量比)。该菌株特性的研究为解决反硝化速率过慢问题提供了技术支持。     

邻氯硝基苯降解菌Pseudomonas putida OCNB-1的分离、鉴定与降解质粒研究

摘要：以邻氯硝基苯为唯一碳源、氮源和能源从某化工厂废水处理站分离出一株细菌, 经微生物自动测定仪WSVTK-R07.02和16SrRNA扩增测序鉴定为Pseudomonas putida;在 培养基pH为8.0,培养温度32 ℃,摇床转速120 rpm 条件下考察了该菌株降解邻氯硝基苯的能力, 菌株42 h内将起始浓度为1.07 mM的对邻氯硝基苯降解近80%;经质粒检测,在菌株OCNB-1中发现一条质粒条带,选用7种内切酶对质粒pOCNB-1进行单酶切,得出质粒大小约为32 Kb;抗生素抗性实验表明菌株对红霉素、氨苄青霉素、青霉素钠的抗性与质粒无关,对利福平、氯霉素的抗性与质粒有关;通过细菌接合,质粒转移到无降解邻氯硝基苯能力的Pseudomonas.stutzeri受体菌中,接合子Pseudomonas.stutzeri能利用邻氯硝基苯为唯一碳源、氮源和能源,证明质粒为降解质粒。     

一株偏二甲肼降解菌的筛选及其降解特性研究

 从驯化的活性污泥中筛选得到降解偏二甲肼(UDMH)的目标菌株。目标菌株纯化后通过Biolog微生物鉴定系统鉴定为Stenotrophomonas。该菌对数生长期是12—18h,能在以偏二甲肼为唯一碳源、氮源的培养基中生长。考察了温度、pH值、外加碳源、初始偏二甲肼质量浓度对降解效果的影响。结果表明,降解偏二甲肼的最适生长温度为30—35℃,最适pH值为7.2—8.0,添加葡萄糖能够促进偏二甲肼的降解,偏二甲肼最适初始质量浓度为50—80mg/L。最适条件下,偏二甲肼72h累计降解率最高可达96.19%。     

一株好氧反硝化菌的鉴定及脱氮特性研究

以筛选分离得到的好氧反硝化菌HG-7为研究对象, 经过16S rRNA同源性分析, 初步鉴定该菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。对菌株HG-7反硝化功能基因的扩增结果表明, 菌体HG-7内存在好氧反硝化功能基因napA和nirK, 证实该细菌为好氧反硝化细菌。对菌株的脱氮特性和影响因素的研究表明, 以硝酸盐氮为氮源时, 菌株的最适碳源为乙酸钠和丁二酸钠, 最佳C/N比为6~10, 最适宜的温度范围为26~30℃。在上述条件下, 菌株HG-7的好氧反硝化活性较高, 48小时内对100 mg/L硝酸盐氮的去除率可达98%, 且在反应过程中亚硝酸盐氮积累量较低。以亚硝酸氮为唯一氮源时, 低浓度条件下可实现100%的氮素去除率; 高浓度条件下, 脱氮速率则受到明显的抑制, 对91.4 mg/L的亚硝酸盐氮氮去除率约为40%。因此, 将该菌株应用于废水的脱氮处理, 可实现氮素的有效去除, 具有潜在的应用价值。     

定向产S-1-苯乙醇菌株的筛选和发酵

以DL-1-苯乙醇为唯一碳源从土壤微生物中筛选出1株高度立体选择性还原苯乙酮为S-1-苯乙醇的产酶菌株No.XC35-8。对发酵条件进行了优化，考察了多种辅助底物对酶促反应的影响，选取异丙醇进一步研究其对酶促反应的促进作用。结果表明：5g/L葡萄糖为培养基碳源，10g/L胰蛋白胨为氮源，30℃，200r/min振荡培养30h。转化底物苯乙酮体积分数为0.1%，辅助底物异丙醇体积分数为6%，转化24h，底物转化率可达83.4%，产物的对映体过量值(ee值)为99.5%。     

同型产乙酸菌株CA3及其发酵葡萄糖产乙酸条件优化

 同型产乙酸菌纯培养物的获得,可为研究其在厌氧生物处理系统中的生理生态功能以及生产化工溶剂乙酸提供种质资源。以CO₂为碳源,采用改良Hungate厌氧技术,从厌氧活性污泥中分离得到一株同型产乙酸菌CA3。该菌株为严格厌氧,卵形,G⁺,可利用H₂/CO₂产乙酸,也能发酵葡萄糖、果糖等产生乙酸。16SrRNA基因序列比对及系统发育树构建结果表明,CA3隶属Blautia sp.。菌株CA3能在20~45℃的温度范围内生长,最适生长温度为35℃,最适初始pH值为8.0。在最适条件下,菌株CA3利用H₂/CO₂产乙酸速率可达8.92mg/(L·h);以酵母粉作为氮源发酵葡萄糖时,发酵体系的乙酸浓度可达1370mg/L。     

石油烃降解菌培养基组分和条件优化

从新疆油田油井旁土样富集、筛选得到一株高效石油烃降解菌HL-6,经初步鉴定为红球菌属（Rhodococcus sp.）．研究表明,使用乙醇作为碳源制备液体种子液是可行的,之后采用单因素试验设计先后对菌株生长的培养基组分及生长条件进行了优化．结果表明,菌株HL-6的最适生长条件为：碳源（柴油）浓度为0．5％、氮源选择（NH4）2SO4浓度为8g／L、磷源为KH2PO4：Na2HPO4摩尔比为3：1、酵母粉浓度为0．03g／L、培养时间为3d、培养温度为20℃、pH=7．6、装液量为30mL、接种量为1．5％、摇床转速为150rpm．验证实验和预期一致,优化后降解率达到89．80％,比最初的78．50％提高了14．4％．     

嗜热耐盐烃降解菌Geobacillus sp.WJ-2降解原油性能研究

以液蜡为唯一碳源,从大庆油田龙虎泡区块采油污水样中分离到一株高效嗜热耐盐的兼性烃降解菌WJ-2,经形态观察、生理生化实验和16S rRNA基因序列分析,初步鉴定为地芽孢杆菌Geobacillus sp..在有氧或者厌氧条件下,该菌均在45～75℃和0～10％ NaCl溶液中生长良好,其最适生长温度为65℃,最适盐的质量分数为3.0％;该菌株能以原油为唯一碳源生长并合成生物表面活性剂,发酵7d,生物表面活性剂产量在好氧条件和厌氧条件下分别为19.89 g/L和11.69 g/L.薄层层析和显色反应表明WJ-2产出的表面活性剂组成在好氧和厌氧条件下不相同.经GC气相色谱和族组分柱层析对菌株WJ-2在好氧和厌氧降解下原油组分分析结果表明:该菌在好氧下优先降解较轻组分,在厌氧条件下优先降解重质组分,原油黏度分别降低71.57％和77.45％,凝固点分别降低5℃和8℃.在好氧和厌氧条件下该菌可在一次水驱基础上分别进一步提高采收率6.96％和6.42％,可有效应用于高温高盐油藏微生物驱现场试验.