胡萝卜体细胞胚胎发生 Ⅱ胡萝卜体细胞胚的组织学和细胞起源

通过大量的叶柄外植体培养系统切片观察及悬浮细胞和平板培养证明,胡萝卜体细胞胚一般是由单个胚性细胞分裂经2,3,4细胞的原胚阶段发育为胚状体的,进一步证明了其单细胞的起源。实验中也观察到有由愈伤组织细胞团内部的多个细胞共同形成胚状体的现象,和文献中所述的多细胞起源十分类似。     

cDNA文库的差异筛选与抑制性减数杂交相结合分离胡萝卜体细胞胚根发育相关基因

应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖基化酶、脂肪酸去饱和酶、一种poly(A)结合蛋白和一种酰基转移酶.另外3个是5′端部分缺失的cDNA基因片段,分别编码三磷酸甘油醛脱氢酶、一种糖蛋白和一种与单链RNA/DNA结合的蛋白.对其中部分基因的Northern分析结果显示,它们的表达量在蔗糖调控下的胡萝卜体细胞胚根发育的不同时期均有显著变化,说明它们都是与胚根发育相关的基因.     

花生(Arachis hypogea L.)体细胞胚胚性特异蛋白的研究

花生萌发３ｄ的胚叶在诱导培养基上出现高频率的体细胞胚发生．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明：在体细胞胚发生过程中,诱导第三天开始出现３条新的蛋白谱带,７ｄ后出现２条新带,１５ｄ后又出现３条;而在非胚性组织中检测到抑制性的特异蛋白条带．     

拟南芥DnaJ蛋白的过量表达对细菌耐盐性的影响

热激蛋白是植物在各种环境胁迫下产生的一种蛋白,其表达与多种胁迫的抗性有一定关系。从野生型拟南芥cDNA中克隆获得了编码442个氨基酸序列的DnaJ基因,其与大肠杆菌DnaJ基因含有相同的J区和半胱氨酸富集区。将DnaJ基因构建到pET32a的原核表达载体,过量表达DnaJ基因的细菌在含有0.5 mol/LNaCl的培养基中仍然可以生长,初步推断DnaJ的表达与耐盐性有关。     

植物AGAMOUS同源基因的表达调控

AGAMOUS基因（AG基因）是控制高等植物花器官发育的一类非常重要的基因.以拟南芥AG基因为例,重点综述了近20年来AG基因及其同源基因的结构、功能及与其它基因之间的调控关系的研究进展。在此基础上,对AG基因的表达和应用进行了探讨.     

胡萝卜LEA基因家族新成员DcLEA1的克隆及其结构与表达特性分析

利用改进的cDNA代表性差示分析(RDA)技术,从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到LEA基因片段,以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库及用控渗法构建的基因组文库,获得了胡萝卜LEA基因家族的一个新成员DcLEA1(GenBank注册号:AF308739).该基因转录区由5′UTR区、两个外显子、一个内含子及3′UTR构成,启动区长1.2kb;开放阅读框为480 bp,编码159个氨基酸和一个终止密码子.Northern杂交分析表明,DcLEA1基因在胡萝卜成体中无表达活性;在调控状态的胡萝卜体细胞胚中具有高表达活性;在解调控12 h的胡萝卜体细胞胚中,转录本含量急剧下降;随着解调控时间的延长,胡萝卜体细胞胚根开始延伸,DcLEA1基因的表达活性又有所增加.这一现象与LEA基因在种子休眠和萌发过程中表达活性的变化规律相似.由此推测,可以利用胡萝卜体细胞胚蔗糖调控-解调控体系,来模拟种子休眠与萌发的过程,研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理.     

水稻热激蛋白基因（HSP70）的PCR法快速分析

通过比较几个已知ＨＳＰ７０的ｃＤＮＡ顺序，用ＰＣＧＥＮＥ软件中的ＰＣＲＰＬＡＮ程序设计出一对简并引物，然后从水稻（广陆矮４号）总ＤＮＡ中扩增出ＨＳＰ７０的基因片段并将其克隆到ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ载体中。在完成了对克隆的序列测定之后，用ＰＣＧＥＮＥ中有关程序对其进行同源分析，并对其他已知的ＨＳＰ７０作了一些分类及分子进化方面的探讨。     

植物体细胞胚胎发生的理论研究

把体细胞胚胎发生现象看作开展生物学理论研究的良好模型,介绍了运用细胞生物学和分子生物学的原理与技术进行研究的成果,特别是体细胞胚胎发生相关基因的研究进展。     

胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达

对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关的研究结果设计引物 ,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增得到了长 10 99bp的抗冻蛋白基因。测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有 3个碱基的差别。将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约 6 0 0 0 0的融合蛋白 ,证明该AFP基因在原核表达系统中可以正常表达     

菜豆DnaJ-like基因组DNA片段的克隆及其表达分析

以PvSR6 cDNA编码一种菜豆DnaJ-like蛋白，并利用PCR的方法克隆出基因组部分序列。核苷酸列分析表明PvSR6基因在这段编码区无内含子；Southern blot分析表明菜豆基因组中存在多个PvSR6基因拷贝；Northern blot分析结果表明PvSR6是组成型表达蛋白，重金属Hg,Cd,和As，过量的Cu和Zn及受伤，高温，病毒侵袭和水杨酸等均能强烈地诱导其基因在叶片中的表达，表明DnaJ-like蛋白与植物的抗逆性有关。     

拟南芥 BAH1 与大肠杆菌热胁迫耐受的关系分析

拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的热敏表型,在43℃存活;而转入突变锌指结构的JdBAH1C231S,C234S,C276S,C279S(JdBAH1△Zn1/2)菌株在43℃高温条件下不能存活,说明BAH1在大肠杆菌内具有类似DnaJ锌指结构的功能.因此,BAH1在E.coli中的功能有可能与DnaJ相似,通过锌指结构参与了DnaK/DnaJ伴侣系统发挥功能.     

拟南芥Hsp40蛋白AtDjA5在大肠杆菌中的功能分析

通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型, 发现AtDjA5及其J Domain能够功能性地替换DnaJ及其J Domain. 免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用. 由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量. 这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能.